水產(chǎn)養(yǎng)殖弧菌的處理精選(九篇)

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第1篇：水產(chǎn)養(yǎng)殖弧菌的處理范文

（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東 湛江 524088）

摘要：研究葡萄糖的不同添加量（1.25～5×10-3 g/L）對對蝦養(yǎng)殖水體水質(zhì)指標(biāo)（氨氮、活性磷）和微生物數(shù)量（總異養(yǎng)菌、弧菌）的影響。結(jié)果顯示，與對照組相比，水體中添加葡萄糖能明顯提高異養(yǎng)菌、弧菌密度（P＜0.05），顯著降低養(yǎng)殖水體中氨氮、活性磷濃度（P＜0.05）。且在一定濃度范圍內(nèi)，葡萄糖濃度越高，氨氮、活性磷濃度越低，異養(yǎng)菌、弧菌密度越高。

關(guān)鍵詞 ：碳源；凡納濱對蝦；水質(zhì)

中圖分類號：S942

近年來，對蝦養(yǎng)殖業(yè)已成為我國主要的養(yǎng)殖業(yè)之一，其養(yǎng)殖產(chǎn)量占了全球?qū)ξr養(yǎng)殖產(chǎn)量的1/3。但是，隨著養(yǎng)殖技術(shù)的發(fā)展，集約化、高密度、高產(chǎn)量的養(yǎng)殖方式導(dǎo)致水體污染日趨嚴(yán)重，甚至病害發(fā)生日益頻繁。水體中污染因素主要是養(yǎng)殖生物的排泄物、殘餌以及有機(jī)碎屑等，這些物質(zhì)不斷被氧化分解，導(dǎo)致氨氮等有害物質(zhì)的積累，可造成養(yǎng)殖生物中毒[1]。養(yǎng)殖水體的水質(zhì)調(diào)控已經(jīng)成為對蝦養(yǎng)殖者和科研工作者最關(guān)注的問題之一，去除氨氮等有害物質(zhì)常用的方法有換水、添加化學(xué)試劑和生物修復(fù)等。頻繁換水容易導(dǎo)致水資源浪費(fèi)，人為添加化學(xué)試劑造成藥物殘留，污染海區(qū)，所以生物修復(fù)技術(shù)成為當(dāng)今水產(chǎn)養(yǎng)殖水處理的研究熱點(diǎn)。生物修復(fù)，即通過生物-生態(tài)措施，修復(fù)受損的池塘生態(tài)系統(tǒng)，加速生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量循環(huán)，增加水體溶氧，改善水質(zhì)和池塘自凈能力[2]。主要有向水體中投加有益微生物[3]，或定向培育有益微藻[4]等措施，加強(qiáng)對有機(jī)污染物的分解和提高池塘的自凈能力。但是水體中微藻的密度受天氣等各方面因素的影響，難以控制數(shù)量，如果微藻數(shù)量過大，而天氣連續(xù)陰雨，容易造成微藻大量死亡，敗壞水質(zhì)。向水體中投加有益微生物改善水質(zhì)，有其優(yōu)勢，容易大量培養(yǎng)，可操作性強(qiáng)，受到養(yǎng)殖戶的青睞，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用廣泛。但是微生物在水體中能否生存與繁殖，受到環(huán)境條件的限制。有研究表明，加入碳類物質(zhì)可以增加養(yǎng)殖系統(tǒng)中細(xì)菌生物量[5]，且在高碳氮比的情況下，異養(yǎng)菌所具有的優(yōu)勢更加明顯[6]，從而水體中的氮也消耗更多。近年來，少數(shù)研究者向養(yǎng)殖水體或富營養(yǎng)化水體中加入碳源，達(dá)到降低水體中的氨氮的目的[7-11]。

葡萄糖是多糖最基本的組成單位，因此研究葡萄糖在廢水凈化中的作用就顯得更加重要[12]。李洪鵬等[12]等認(rèn)為葡萄糖添加量在一定范圍內(nèi)，氨氮等污染物的去除率均隨添加量的增加而升高，當(dāng)葡萄糖添加量高于某一臨界值時，去除率將隨葡萄糖的增加而下降。關(guān)于向?qū)ξr養(yǎng)殖水體中添加不同濃度的葡萄糖進(jìn)行水質(zhì)凈化的研究未見有報道。本文旨在研究葡萄糖的不同添加量對凡納濱對蝦（Litopeneaus vannamei）養(yǎng)殖水體水質(zhì)和微生物數(shù)量的影響，探討葡萄糖的添加量與水體中氨氮、活性磷濃度和微生物數(shù)量的關(guān)系，以期為對蝦養(yǎng)殖過程中的水質(zhì)調(diào)控提供理論參考。 1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物

養(yǎng)殖對象為健康的凡納濱對蝦，平均質(zhì)量6 g。對蝦飼料為粵海牌2#對蝦料。葡萄糖為廣東光華科技有限公司生產(chǎn)。

1.2細(xì)菌培養(yǎng)基

異養(yǎng)菌培養(yǎng)基（2216E）：蛋白胨5.0 g，酵母膏1.0 g，磷酸鐵0.01 g，瓊脂16.0 g，陳海水1 000 mL，調(diào)pH 至7.6～7.8。

弧菌培養(yǎng)基（TCBS）：北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

1.3養(yǎng)殖管理

養(yǎng)殖容器為玻璃鋼桶，養(yǎng)殖水體100 L。養(yǎng)殖期間，連續(xù)充氧，保證水體中氧氣的充足，為防止充氣過大而將對蝦殘餌或糞便打散，造成實(shí)驗(yàn)誤差，氣石的擺放位置為養(yǎng)殖桶的邊緣。每天按8%的量投喂餌料，每天投喂時間8:00，12:00，17:00，22:00。每天每個桶吸污1次，吸污量為10 L。水溫（28±1） ℃，pH 8.0±0.2。

1.4實(shí)驗(yàn)方案

實(shí)驗(yàn)分為5個組，每組3個平行，每個實(shí)驗(yàn)桶放凡納濱對蝦40尾。每天早上投料后投放不同濃度的葡萄糖。葡萄糖的投放量根據(jù)投餌量確定（葡萄糖投放量見表1）。

每隔48 h檢測氨氮和活性磷一次。氨氮采用納氏試劑法[13]，活性磷采用磷鉬藍(lán)法[13]。每96 h檢測總異養(yǎng)菌和弧菌數(shù)量一次。

2結(jié)果與分析

2.1添加不同濃度的葡萄糖對對蝦養(yǎng)殖水體總細(xì)菌的影響

在實(shí)驗(yàn)期間，所有實(shí)驗(yàn)組水體中總異養(yǎng)菌的數(shù)量隨養(yǎng)殖時間的延長呈上升趨勢，說明添加葡萄糖有利于養(yǎng)殖水體中異養(yǎng)菌的增殖。在12 d時，組3、組4和組5的養(yǎng)殖水體中總異養(yǎng)菌的數(shù)量都顯著高于對照組（P＜0.05）。在16 d時，組5的養(yǎng)殖水體中的總異養(yǎng)菌的數(shù)量出現(xiàn)明顯下降，且低于對照組，但其余各組的養(yǎng)殖水體中的總異養(yǎng)菌的數(shù)量仍高于對照組。組5的細(xì)菌密度前期高而后期突然降低的原因，是由于實(shí)驗(yàn)開始時組5的外加碳源最多，細(xì)菌量因營養(yǎng)豐富而迅速增加，同時營養(yǎng)物質(zhì)也因細(xì)菌量增加而消耗更多，但實(shí)驗(yàn)期間水體中的碳源不再補(bǔ)充濃度不斷降低，氮的來源還是與其他組一樣來自殘餌和糞便，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)后期細(xì)菌密度下降較快，見表2。

2.2添加不同濃度的葡萄糖對對蝦養(yǎng)殖水體弧菌的影響

在實(shí)驗(yàn)期間，所有實(shí)驗(yàn)組水體中弧菌的數(shù)量隨養(yǎng)殖時間的延長也有所上升。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，添加葡萄糖也會導(dǎo)致養(yǎng)殖水體中弧菌的數(shù)量的上升。組5在加入葡萄糖后的各個時間點(diǎn)養(yǎng)殖水體中弧菌的數(shù)量都顯著高于對照組（P＜0?05），見表3。

2.3添加不同濃度的葡萄糖對對蝦養(yǎng)殖水體氨氮的影響

如圖1所示，由于養(yǎng)殖期間水體中殘餌和對蝦糞便的積累，在實(shí)驗(yàn)前期對照組和處理組的氨氮含量均呈上升趨勢；但添加葡萄糖后的8 d以后，對照組的氨氮含量繼續(xù)呈上升趨勢，而各處理組的呈下降趨勢，其中葡萄糖濃度高的組4、組5下降最明顯；第14 d的檢測結(jié)果顯示，組4、組5的氨氮含量顯著低于對照組（p＜0.05）。筆者認(rèn)為，葡萄糖的添加加速了水體中異養(yǎng)菌的繁殖和生長，消耗了大量的氮源，從而氨氮含量下降，且葡萄糖濃度越高的組，氨氮濃度下降越明顯。

2.4添加不同濃度的葡萄糖對對蝦養(yǎng)殖水體活性磷的影響

海水養(yǎng)殖的生態(tài)系統(tǒng)中，磷是物質(zhì)循環(huán)的重要組成成分，也是細(xì)菌的重要生長因子，其存在形式和多寡，能促進(jìn)或限制生態(tài)系統(tǒng)的能量轉(zhuǎn)化，是影響?zhàn)B殖水環(huán)境的重要因素。如圖2所示，由于餌料的添加，實(shí)驗(yàn)早期（6 d以內(nèi)）各組的養(yǎng)殖水體中活性磷的含量均呈上升趨勢，各組間差異不顯著；第6 d以后，對照組、組2和組3的活性磷含量繼續(xù)上升，而組4、組5的活性磷含量比較平穩(wěn)；第14 d檢測結(jié)果顯示，組2、組3的活性磷含量與對照組差異不顯著，組4、組5顯著低于對照組（p＜0.05）。說明在水體中添加葡萄糖后，葡萄糖濃度高的組水體中異養(yǎng)菌大量生長和繁殖，明顯消耗大量的活性磷。

3討論

3.1對蝦養(yǎng)殖水體的水質(zhì)調(diào)控

在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，水質(zhì)的好壞直接影響?zhàn)B殖生物的生長與存活，從而影響?zhàn)B殖效益。隨著高產(chǎn)、高密度的對蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，養(yǎng)殖水體中常因池中殘餌、水生生物排泄物及尸體等的腐敗、分解，引起水質(zhì)惡化，使水中營養(yǎng)元素N、P等發(fā)生非正常變化并產(chǎn)生有害物質(zhì)[14]。這些有害物質(zhì)被海水溶解或經(jīng)過微生物的分解和礦化作用產(chǎn)生可溶性營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入養(yǎng)殖水體，一部分被浮游植物利用，一部分通過換水進(jìn)入海區(qū)，還有一部分會在養(yǎng)殖水體中積累，在水體中積累到一定濃度后，將對養(yǎng)殖生物產(chǎn)生一定的毒害作用。楊世平等[14]通過對對蝦高密度養(yǎng)殖池中水質(zhì)的連續(xù)監(jiān)測，認(rèn)為養(yǎng)殖水體的污染主要是含氮廢物的污染，在高密度養(yǎng)殖池養(yǎng)殖后期，水體中氨氮首先達(dá)到峰值2.32 mg/L，隨后亞硝酸鹽的含量也迅速達(dá)到峰值0.773 mg/L，在高密度養(yǎng)殖池中活性磷的含量也較高。Li等[15]認(rèn)為，水體中氨氮含量將隨著餌料中蛋白質(zhì)含量和蛋白質(zhì)投喂量的增加而增加。餌料在水中的降解過程中不斷的釋放氨氮和有機(jī)碳。潘云峰等[16]認(rèn)為水體中的氨氮有三個階段動態(tài)的變化階段：第一階段微生物對氨氮的利用小于餌料降解的氨氮，造成氨氮不斷升高，第二階段微生物對氨氮的利用和餌料降解的氨氮相等，造成氨氮在水中殘留達(dá)到最大值，第三階段微生物對氨氮的利用大于餌料降解的氨氮，造成氨氮降低。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，實(shí)驗(yàn)早期氨氮含量呈上升趨勢，濃度上升到一定高時開始降低。

針對對蝦養(yǎng)殖水體的水質(zhì)污染，利用可控的人工措施，采用物理、化學(xué)或生物等方法調(diào)控水質(zhì)，改善養(yǎng)殖水體環(huán)境。常用物理方法包括物理過濾、沉淀、泡沫分離等，物理方法凈化水體的優(yōu)點(diǎn)在于無二次污染，但費(fèi)時費(fèi)力。常見的化學(xué)方法包括絡(luò)合、氧化還原、臭氧消毒等，消毒效果不錯，但使用不當(dāng)可能會對養(yǎng)殖水體造成二次污染。生物方法是利用微生物或自養(yǎng)性植物(如綠色藻類、高等水生植物)改良水質(zhì)，其原理是這些微生物和植物可以吸收利用水體中的營養(yǎng)物質(zhì)(殘餌及水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的代謝產(chǎn)物)，有助于防止殘餌與代謝產(chǎn)物積累所引起的水質(zhì)敗壞[17]。由于生物方法處理水質(zhì)具有成本低、無污染等特點(diǎn)，近年來越來越受到人們的青睞，人們在處理對蝦養(yǎng)殖水體時，常引入細(xì)菌[18]或微藻[4,19]改善水質(zhì)。但是池塘中微藻的密度受天氣等各方面因素的影響，難以控制數(shù)量，藻種供應(yīng)商品化程度較低，相對而言細(xì)菌具有可操作性的特點(diǎn)，生產(chǎn)、儲存和運(yùn)輸都不存在問題，所以生產(chǎn)上應(yīng)用最多。但是，在實(shí)際操作過程中被投入到養(yǎng)殖水體的細(xì)菌能否存活和生長，受到水體環(huán)境的影響，將直接影響水質(zhì)處理效果。人們發(fā)現(xiàn)在水體修復(fù)過程中，水體中可被生物利用有機(jī)物含量較低或缺乏氮、磷元素時，修復(fù)效果較差，添加某種營養(yǎng)物質(zhì)可以加強(qiáng)生物修復(fù)[20]。

3.2養(yǎng)殖水體中添加碳源對水質(zhì)的影響

細(xì)菌所需要的營養(yǎng)物質(zhì)與其細(xì)胞的化學(xué)構(gòu)成大致相同，大致有5 類：碳源、氮源、磷源、無機(jī)鹽和生長因子[10]。水體中氨氮的去除，主要是通過細(xì)菌固定和轉(zhuǎn)化，但對于細(xì)菌來講，養(yǎng)殖池一般是屬于氮源過剩，而碳源缺乏的環(huán)境，經(jīng)常限制細(xì)菌生長的是碳源[21]。故添加一定的碳源才有利于細(xì)菌對氨氮的轉(zhuǎn)化。近年來，許多研究者為降低水體中的氮污染，而向水體中添加碳源，取得了較好的效果。如李彥等[5]研究發(fā)現(xiàn)，向羅非魚養(yǎng)殖池塘添加碳源可以降低池塘水體氨態(tài)氮含量，趙志剛等也研究發(fā)現(xiàn)，定期向松浦鏡鯉養(yǎng)殖池塘添加碳源可顯著降低池塘水體氨態(tài)氮含量[8]。Hari[11]等研究碳源對對蝦養(yǎng)殖水體水質(zhì)的影響，也認(rèn)為添加碳源可以顯著降低水體中氨氮濃度。常用的外加碳源有甲醇、乙醇、乙酸、乙酸鈉和葡萄糖等[10]。其中葡萄糖是多糖最基本的組成單位，是一種重要的簡單碳水化合物，它在主要的生化途徑中有重要作用。有研究已證明葡萄糖在水質(zhì)處理方面效果較好，如李洪鵬等[12]報道證實(shí)添加葡萄糖能提高原生態(tài)復(fù)合菌的凈化能力，張海杰等[22]研究證實(shí)葡萄糖作為外加碳源時微生物的硝化率最高。本實(shí)驗(yàn)中對照組的氨氮含量一直呈上升趨勢，而處理組由于添加了葡萄糖作為細(xì)菌的碳源，氨氮因被細(xì)菌利用而含量出現(xiàn)不同程度的下降，且碳源濃度投放量高的處理組（組4、組5）氨氮濃度下降最為明顯。

向水體中添加葡萄糖等碳源后，水體中的氨氮濃度降低，氮源被細(xì)菌所利用變成細(xì)菌菌體的一部分，但是并沒有直接離開水體。那么，氮源會隨著細(xì)菌的代謝和死亡重新回到水體中嗎？有研究認(rèn)為細(xì)菌在生長過程中會分泌多糖、多肽、蛋白質(zhì)、脂類及其復(fù)合物等胞外產(chǎn)物，與水中的一些懸浮物質(zhì)通過微生物分泌的胞外產(chǎn)物產(chǎn)生正負(fù)電荷吸引中和會形成絮凝體[23]，絮凝體容易被過濾或沉淀而離開養(yǎng)殖水體。而且形成的絮凝體還可能被魚類、蝦類重新攝食，提高餌料的利用率和凈化水質(zhì)[16]。所以向?qū)ξr養(yǎng)殖水體中添加適量的葡萄糖等碳源有利于水質(zhì)凈化和對蝦健康養(yǎng)殖。

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秦皇島市近岸海域環(huán)境大幅改善 漁業(yè)生產(chǎn)保持穩(wěn)定增長態(tài)勢

第2篇：水產(chǎn)養(yǎng)殖弧菌的處理范文

1益生菌群的作用

1．1益生菌群是水體物質(zhì)循環(huán)的推動者

1．2益生菌群在水體污染中的指示作用

1．3益生菌可以凈化水體

1．4益生菌群作為餌料的作用

1．5益生菌群能防止病害

1．6益生菌群可以刺激提高免疫力

2益生菌的研究現(xiàn)狀

國內(nèi)對于水產(chǎn)動物病害的研究起步較晚。于占國等在論述異養(yǎng)菌于對蝦病的關(guān)系的研究時特別指明：弧菌喜歡在富營養(yǎng)環(huán)境生長，并已經(jīng)成為蝦池中的優(yōu)勢菌屬。它的數(shù)量與對蝦發(fā)病有著密切的關(guān)系。薛清剛還指出：在全世界主要對蝦養(yǎng)殖區(qū)，弧菌病到目前為止仍時對蝦危害最大、造成損失最嚴(yán)重的疾病之一，它影響著所有種類對蝦的幾乎所有發(fā)育期，在養(yǎng)殖條件下容易爆發(fā)性流行，且流行范圍已遍及全球。如不及時采取妥善治療措施，其危害后果是在短時間內(nèi)死亡率為100％，即使采取一些控制措施，也仍有很高的死亡率。許兵等（1993）曾對中國對蝦病原菌及其致病機(jī)理作過探討。孟慶顯在其論著中也記述了弧菌的危害。供給養(yǎng)殖生物一個包括有益微生物群落在內(nèi)的健康環(huán)境是很重要的。從養(yǎng)殖環(huán)境中除去細(xì)菌或使用抗微生物藥物控制細(xì)菌種群將會使生態(tài)平衡遭到破壞，因此，使用益生菌將具有很大的潛力。但在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中有效使用益生菌的證據(jù)還比較缺乏，而且其準(zhǔn)確的作用機(jī)理方式也不十分清楚，尤其是菌株體外抑菌物質(zhì)的產(chǎn)生或是競爭營養(yǎng)與其體內(nèi)益生菌效果的關(guān)系。益生菌在水生動物體內(nèi)與其他菌群的相互作用仍然需要闡明，益生菌的免疫刺激效果也值得進(jìn)一步研究。為了益生菌能應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，必須對其大規(guī)模生產(chǎn)條件下的生產(chǎn)工藝流程、多種菌的生產(chǎn)、保藏及確保其質(zhì)量方面進(jìn)行深入地研究。

3水生環(huán)境微生物的分離和鑒別

海洋細(xì)菌中普遍都存在著抗菌性。許多海洋抗菌微生物屬于假單胞菌或者是弧菌。淡水微生物群中也普遍存在著抗菌活性。某些乳酸菌也對魚類的病原菌有抵抗能力。在許多體外實(shí)驗(yàn)中，致病的弧菌和氣單胞菌都會被抑制。而且一些細(xì)菌對于濾過性細(xì)菌也具有一定的抵抗能力，因此它們可以作為濾過性細(xì)菌的生物防治劑。值得注意的是不但抗菌素具有抑制微生物病原菌的能力，其它一些物質(zhì)也具有相同的作用，如有機(jī)酸，過氧化氫，含鐵細(xì)胞等。這些物質(zhì)的抗菌能力很大程度上依賴于實(shí)驗(yàn)條件，而這些對于體內(nèi)和體外是不同的。因此，這些抗菌性菌株的在體外的實(shí)驗(yàn)是不足以作為篩選候選益生菌的唯一標(biāo)準(zhǔn)，也不能僅僅憑此來進(jìn)行菌株的篩選。在魚的幼苗和甲殼類動物中，通過解剖分開胃和腸道可以從消化系統(tǒng)分離出不同的微生物群。附著在上皮細(xì)胞上的微生物可以從其附著部分的黏液中分離得到。這種分離方法不適用于幼蟲狀態(tài)和活著的養(yǎng)殖餌料，但是可以用0.1％苯甲銨氯化物的鹽溶液來沖洗魚幼苗的外表來分離附著在表面的微生物，這些微生物也來自于通過它們腸道內(nèi)的排泄物。多數(shù)微生物可以用選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行分離篩選。然后可以通過一些常規(guī)方法對它們進(jìn)行鑒別。

4益生菌在水產(chǎn)動物中的應(yīng)用情況

益生菌的概念是在應(yīng)與于陸地生物的過程中發(fā)展起來的，對于水生生物卻還是有許多的不同之處，最基本的問題是益生菌在水體養(yǎng)殖環(huán)境中的應(yīng)用。人類和陸地生物經(jīng)歷了一個在胞衣中由胚胎發(fā)育的過程，然而大多數(shù)的魚和貝類在最初的個體發(fā)育階段都是在外部環(huán)境中進(jìn)行的。因?yàn)樗鼈兊挠紫x在消化系統(tǒng)還沒有完全發(fā)育好，而且免疫系統(tǒng)還不完善，此時就開始喂食，它們腸道內(nèi)相關(guān)微生物菌群混亂的情況會很大。因此，在幼蟲階段特別需要使用益生菌。在人類和陸地養(yǎng)殖動物的腸道微生物菌群中，格蘭氏陽性專一性活兼性厭氧性微生物占有優(yōu)勢地位。在人類排泄物中，主要的微生物群是類桿菌，格蘭氏陽性厭氧球菌，真菌和雙歧桿菌，而在豬的排泄物中其主要的微生物菌群是]鏈球菌和乳酸菌。大部分益生菌都屬于這些微生物群中的主要或者次主要種屬，如雙歧桿菌，乳酸菌和鏈球菌。在魚和貝類的消化道里格蘭氏陰性兼性厭氧菌占主要，而在某些食草的熱帶魚中，共生的厭氧菌占主導(dǎo)?；【图賳伟诩讱ゎ惿?，海魚和雙殼類生物中很普遍。在淡水魚中，氣單胞菌和腸桿菌占有優(yōu)勢。水體微生物群特性的一系列結(jié)果說明可以有效應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的益生菌與來自于陸地的種類有些不同。在人類和陸地家畜的腸道為生長于其中的微生物創(chuàng)造了一個公平穩(wěn)定的居住環(huán)境，它們由此受益。然而，在水生動物中，大部分的微生物群都是暫時的。這些動物都是變溫的，它們相關(guān)的微生物群會隨著溫度的變化而改變。鹽度的變化也會影響微生物群，而海魚不得不經(jīng)常的喝水以補(bǔ)充身體水分的損失。持續(xù)的水的進(jìn)入增強(qiáng)了周圍環(huán)境的影響能力，同時，根據(jù)觀察一些濾食動物如雙殼類，蝦幼蟲及其食物，我們也發(fā)現(xiàn)了這一點(diǎn)。對于幼蟲來說，由于缺少胃的保護(hù)作用，這些影響是很重要的。所以，水生動物腸道內(nèi)的微生物群會因?yàn)閬碜杂谒褪澄锏奈⑸锶憾l(fā)生很快的改變。在雙殼類生物中，其相關(guān)的微生物群和那些海水和沉淀物中的非常相似。在Penaeusjaponicus對蝦的內(nèi)臟和海水中也發(fā)現(xiàn)了相同的細(xì)菌，但是微生物群中正常的種群是通過食物引入的。在魚的幼蟲和幼苗階段，食物的影響是決定性的。而且，在第一次的喂食中，通過活的食物帶入的細(xì)菌的影響是非常顯著的。第一次用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的益生菌本來是設(shè)計給陸地動物使用的。一株分離自土壤的細(xì)菌孢子可以降低因感染愛德華氏菌日本鰻鱺的死亡率，相同的飼料添加物可以提高鯡魚的生長率。孢子可以很容易的混在復(fù)合食物中，但是還沒有有關(guān)它們在魚的消化道中生長繁殖的實(shí)驗(yàn)方面的報道。對于孢子在腸道內(nèi)的生長情況取決于停留的時間和養(yǎng)殖的溫度，這一點(diǎn)是值得去研究的。Kozasa使用的菌株在輪蟲中進(jìn)行了試驗(yàn)，可以提高大比目魚的生長速率，但是在其幼苗階段和輪蟲中都沒有發(fā)現(xiàn)這種微生物群。稍后，另一組實(shí)驗(yàn)使用了含有桿菌IP5832孢子的飼料添加物，通過計數(shù)和鑒別與用孢子飼養(yǎng)的輪蟲和大比目魚相關(guān)的細(xì)菌的特征來檢驗(yàn)其效果。實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)把孢子加入到水中一小時之后，其可以生長的菌株的數(shù)目急劇下降，大部分的桿菌孢子在不到一個半小時內(nèi)濾過吸收。這些孢子因此可以在輪蟲中復(fù)活生長，但是這段時間可能太短以至于益生菌還來不及發(fā)揮其作用。許多細(xì)菌可以產(chǎn)生抗生素，特別是在孢子形成階段，通過植物細(xì)胞的蛋白質(zhì)水解也可以生產(chǎn)抗生素。當(dāng)輪蟲用孢子飼養(yǎng)時，其弧菌的數(shù)目會降低，這可能是由于桿菌中產(chǎn)生了的抗菌素的緣故。以用孢子處理過的輪蟲為飼料發(fā)現(xiàn)大比目魚體中幾乎沒有可以復(fù)活的細(xì)菌。盡管這種處理方式增強(qiáng)了大比目魚幼苗對于病原菌的抵抗力，但是還不能說這就是使用了益生菌的直接作用的結(jié)果。在成品使用中，活的乳酸菌也被加入到比目魚幼苗的餌料中。通過這種方法，增加了輪蟲的產(chǎn)量和提高了大比目魚和日本比目魚的生長速度。某些乳酸菌的使用也限制了輪蟲中細(xì)菌的增殖，但是在這些研究中并沒有說明乳酸菌的生長情況]。其他一些鏈球菌制品可以提高以色列鯉魚的生長速度和飼料利用率。當(dāng)在鯉魚養(yǎng)殖中使用益生菌制品十四天后，埃希氏菌屬的大腸桿菌完全從其消化道微生物群中消失了。其開發(fā)者宣稱這種制品對鯉魚消化道中的上皮細(xì)胞具有很高的附著能力。對于陸生動物使用益生菌的實(shí)驗(yàn)顯示了其在水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料中的使用微生物添加劑的重要性，但是，在水生動物腸道內(nèi)可以存活的微生物群還不是太確定。現(xiàn)在的研究主要著重于從水生動物中尋找其自身的可以作為益生菌的微生物。

5結(jié)論

5．1可以在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用益生菌，但是還需要更努力的研究。第一個問題就是益生菌在養(yǎng)殖水體和水生動物腸道中的生長繁殖的情況并不是太清楚，這一點(diǎn)在很多情況下都沒有得到解答。隨著免疫和分子探針的出現(xiàn)，這將為追蹤益生菌細(xì)胞提供一種有利的工具。對于益生菌的最好使用方式和最佳的劑量還需要進(jìn)一步的調(diào)查研究，同時也要解決一些技術(shù)問題，特別是要保持干藥球中益生菌的活力。

5．2細(xì)菌的孢子很容易添加到干燥的餌料中，這也是這些可能的候選益生菌的另一種優(yōu)勢。乳酸菌和酵母都是很好的選擇對象，應(yīng)該對它們進(jìn)行深入的研究。我們應(yīng)該進(jìn)行長期的調(diào)查研究以確認(rèn)這些細(xì)菌是無害的，而且不會出現(xiàn)任何可能有害的變異這種風(fēng)險。

第3篇：水產(chǎn)養(yǎng)殖弧菌的處理范文

關(guān)鍵詞: 副溶血性弧菌; 檢測; 基因; PCR技術(shù)

中圖分類號: S944.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼: A 文章編號:1009-8631(2010)04-0192-02

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP) 是革蘭氏陰性嗜鹽細(xì)菌, 隸屬弧菌科中的弧菌屬的一種人畜共患病菌。最早由Fujino等在1950年從日本1例食物中毒患者排泄物中初次分離得到,本菌呈弧型、桿型、絲狀等多形態(tài),菌體一端有單鞭毛,營養(yǎng)要求不高。副溶血性弧菌主要存在于近海岸的海水、海底沉積物和魚蝦、貝類等海產(chǎn)品中,是引起食源性疾病的主要病原之一。污染了大量該菌而又未經(jīng)良好加工處理的海產(chǎn)品被人類食用后, 會引發(fā)人突發(fā)性食物中毒,可導(dǎo)致患者出現(xiàn)腹瀉、腸痙攣、惡心、嘔吐、發(fā)燒等典型胃腸炎反應(yīng)。副溶血性弧菌還可導(dǎo)致海鯛、九孔鮑、斑節(jié)蝦、對蝦、牙鲆及文蛤等水產(chǎn)動物致病,間接影響人類的健康。

副溶血性弧菌在含3.5% NaCl培養(yǎng)基中最為適宜,無鹽則不能生長,但當(dāng)NaCl濃度高于8%時也不能生長。在鹽濃度不適宜的培養(yǎng)基中,細(xì)菌呈長桿狀或球桿狀等多形態(tài),無鹽蛋白胨水中生長很差或不生長。在硫代硫酸鈉檸檬酸膽鹽蔗糖培養(yǎng)基(thiosulfate-citrate-bile saltssucrose,TCBS)上副溶血性弧菌形成綠色菌落,能發(fā)酵葡萄糖、甘露醇產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,不發(fā)酵蔗糖和乳糖,分解色氨酸產(chǎn)生靛基質(zhì),神奈川試驗(yàn)(kanawaga phenomenen,KP)陽性。該菌不耐酸,不耐熱,在1%醋酸或50%食醋中1min死亡,90℃1 min即被殺死。在淡水中存活不超過2d,在海水中可存活50d。副溶血性弧菌在普通血平板(含羊、兔或馬等血液)上不溶血或只產(chǎn)生β-溶血。目前研究認(rèn)為與副溶血性弧菌致病力相關(guān)的主要毒力因子為溶血素類,包括耐熱直接溶血素(Thermostable Direct Hemolysin,TDH)、TDH-相關(guān)溶血素(TDH-related Hemolysin,TRH)和不耐熱直接溶血素(Thermolabile Hemolysin,TLH)。國家食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示,我國微生物性食物中毒的病原分布發(fā)生了顯著變化,特別是在沿海省份,副溶血性弧菌引起的食物中毒在發(fā)生規(guī)模及人群暴露規(guī)模呈明顯上升趨勢,已經(jīng)高居微生物性食物中毒首位。副溶血性弧菌檢測在水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病臨床診斷、流行病學(xué)調(diào)查、食品中微生物檢測、水產(chǎn)品進(jìn)出口檢測及醫(yī)院感染監(jiān)控等方面有著重要的作用。文章綜述了副溶血性弧菌的各種檢測技術(shù)手段。

一、常規(guī)方法

副溶血性弧菌的常規(guī)檢測方法是傳統(tǒng)的培養(yǎng)和生化鑒定方法。該方法也是目前食品中副溶血性弧菌檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T 4789.7-2003)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。該方法是通過細(xì)菌形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生理生化特征來鑒定,包括培養(yǎng)增菌、分離提純、鏡檢和生化試驗(yàn)及副溶血性弧菌的特有生化試驗(yàn)KP現(xiàn)象。具體的是采用氯化鈉結(jié)晶紫增菌液進(jìn)行增菌后、接種于氯化鈉蔗糖瓊脂和選擇性瓊脂平板使包括副溶血性弧菌在內(nèi)的嗜鹽性弧菌得以分離,可疑菌落經(jīng)氯化鈉三糖鐵斜面、革蘭氏染色和嗜鹽性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行初步判定,最后經(jīng)生化試驗(yàn)以及動物試驗(yàn)進(jìn)行確定其是否為副溶血性弧菌,此方法只能定性不能定量。目前廣泛使用的定量檢測方法是FDA細(xì)菌分析手冊中的最大可能數(shù)方法(Most Probable Number,MPN)。該方法將樣品勻漿后在堿性蛋白胨鹽增菌液(Alkaline peptone water,APW)增菌后,接種于TCBS分離該菌。但是最近Raghunath報道將以前方法改進(jìn)后用牛磺膽酸鈉培養(yǎng)(Sodium taurocholate,ST broth)檢測海產(chǎn)品中的副溶血性弧菌優(yōu)于APW法[1]。該方法耗時長,周期需要3~5d左右,操作繁瑣、工作量大、人力物力花費(fèi)大,給副溶血性弧菌的檢測、研究、進(jìn)出口貿(mào)易帶來不便,不能滿足食品衛(wèi)生快速反應(yīng)體系的需要。

二、免疫學(xué)檢測技術(shù)

(一)免疫酶技術(shù)

將抗原抗體的特異性反應(yīng)與酶的高效催化反應(yīng)有機(jī)結(jié)合起來,通過酶降解底物呈現(xiàn)的顏色反應(yīng)來指示特異性抗體的存在,根據(jù)反應(yīng)顏色的深淺指示抗原量的多少。在多種免疫酶技術(shù)中以間接ELISA、雙抗體ELISA以及Dot-ELISA法最為常用。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)與其他檢測方法相比,具有特異性強(qiáng)、敏感性高、檢測時間短、對設(shè)備的要求較低等優(yōu)點(diǎn),可以在短時間內(nèi)準(zhǔn)確地將副溶血性弧菌檢測出來。已有類似報道集中在實(shí)驗(yàn)室方法探索上,余俊紅等[2]建立間接EI1SA技術(shù)快速檢測花鱸的病原菌,用此方法對花鱸組織樣品,包括肌肉、鰓、腸、肝、腎等組織的檢測表明,陽性檢出率為76.1%,特異性較高。竇勇等[3]2008年報道利用間接競爭ELISA法檢測幾種水產(chǎn)動物中副溶血性弧菌,檢測下限為104 cfu/mL,與常規(guī)生化培養(yǎng)檢測法對比,常規(guī)生化培養(yǎng)無法檢測出的而ELISA 卻可以將其檢測出,檢測時間為8h。對鰻弧菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌及志賀氏菌等幾種常見食品致病菌菌株無交叉反應(yīng)。李國等[4]將ELISA法應(yīng)用于文蛤副溶血性弧菌檢測中。但是,若能進(jìn)一步優(yōu)化各項(xiàng)反應(yīng)條件,制備成快速檢測試劑盒,具有較高的實(shí)用和推廣價值,必將在水產(chǎn)養(yǎng)殖大量樣品的檢測中發(fā)揮重要作用。

(二)免疫熒光技術(shù)

免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique),又稱為熒光抗體技術(shù),是利用某些熒光素通過化學(xué)方法與特異性抗體結(jié)合制成熒光抗體,熒光抗體與被檢抗原特異性結(jié)合后,形成的免疫復(fù)合物在一定波長光的激發(fā)下可產(chǎn)生熒光,借助熒光顯微鏡可檢測或定位被檢抗原。所用的熒光素標(biāo)記抗體稱為熒光抗體,常用的熒光素如,異硫氰基熒光素(FITC)、羅丹明(RB200)、綠色熒光蛋白(GFP)等。免疫熒光技術(shù)是將免疫化學(xué)和血清學(xué)的高度特異性和敏感性與顯微術(shù)的高度精確性相結(jié)合,在水產(chǎn)副溶血性弧菌檢測上有大量的研究報道[5]。

免疫熒光技術(shù)的主要特點(diǎn)是:特異性強(qiáng)、速度快、靈敏度高。但也存在缺點(diǎn): 如非所以特異性染色問題難以完全解決;操作程序較繁瑣;需要特殊的昂貴儀器(熒光顯微鏡);染色標(biāo)本不能長期保存等。

(三)免疫印跡技術(shù)

免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Western blotting),是一種借助特異性抗體鑒定抗原的有效方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。將含有目標(biāo)蛋白(抗原)的樣品首先用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)或非變性電泳(Native-PAGE)等分離后,通過轉(zhuǎn)移電泳原位轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜或其它膜的表面,然后將膜表面的蛋白質(zhì)再用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行特異性檢測。例如,將經(jīng)SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)帶轉(zhuǎn)移到膜上后,膜用封閉液處理,然后與第一抗體反應(yīng),膜經(jīng)漂洗后再與偶聯(lián)辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸(酯)酶(AP)的第二抗體反應(yīng),加人生色底物反應(yīng)之后,即可顯示出目標(biāo)蛋白的位置。張曉華等利用Western 印跡法對13 株不同來源的副溶血弧菌的外膜蛋白及其抗原性進(jìn)行了比較研究,發(fā)現(xiàn)它們有相似的SDS-PAGE圖譜,其中一條44ku的免疫反應(yīng)帶幾乎是所有副溶血弧菌菌株共有的,推測極有可能與副溶血弧菌抗原的特異性有關(guān)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,其優(yōu)點(diǎn)是方法簡便、標(biāo)本可長期保存、結(jié)果便于比較,故廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)等領(lǐng)域,成為免疫學(xué)、微生物學(xué)及其他生命科學(xué)常用的一種研究方法。

三、PCR檢測技術(shù)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)是美國Cetus公司的科學(xué)家Mullis于1983年發(fā)明的一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法。目前,國內(nèi)外學(xué)者已廣泛使用PCR技術(shù)研究食品中副溶血性弧菌的快速分型與檢測。PCR技術(shù)由于其高度的特異性、敏感性及快速、穩(wěn)定性好、檢測耗時短等特點(diǎn)在食品中副溶血性弧菌快速檢測方面展現(xiàn)了巨大的潛力。但其缺點(diǎn)是程序復(fù)雜,需要精密儀器設(shè)備,價格昂貴,不利于在基層推廣應(yīng)用,且可能出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物,假陽性結(jié)果。

1999 年,Yamaichi等[6]已經(jīng)完成副溶血性弧菌的基因組測序,VP的毒力基因序列得到進(jìn)一步確定。TRH、TDH、TLH及尿素酶是副溶血性弧菌的主要毒力因子,其中TDH是絕大多數(shù)副溶血性弧菌具有致病能力的毒力因子,TRH和尿素酶是少數(shù)臨床菌株特別是KP-菌株的毒力因子,TRH的毒力與尿素酶的活性有關(guān)。TRH與TDH的氨基酸序列有70%同源,編碼這2種毒素的基因trh和tdh的同源性為68.1 %,TRH與TDH的抗原性有部分交叉,兩者免疫原性相似。trh基因據(jù)其核酸序列的變化又可分為2 個亞組:trhl和trh2基因,兩者同源性為84%,分別編碼蛋白TRH1和TRH2。目前,建立的副溶血性PCR檢測技術(shù)是基于gyrase基因[7]、toxR基因[8,9] 、TLH和TDH[10,11]為靶基因設(shè)計引物探針進(jìn)行檢測。副溶血性弧菌PCR檢測技術(shù)有:隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA分析技術(shù)、重復(fù)序列PCR技術(shù)、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分析技術(shù)、多重PCR技術(shù)、實(shí)時PCR(real-time PCR,RT- PCR)等,其中RT- PCR技術(shù)近年來在副溶血性弧菌檢測上進(jìn)行了大量的研究。覃倚瑩等以 toxR基因?yàn)榘谢? 通過優(yōu)化反應(yīng)條件建立了快速檢測副溶血弧菌的TaqMan實(shí)時熒光PCR方法。靈敏度試驗(yàn)表明, 該方法最少可檢測到25 個拷貝的toxR基因重組質(zhì)粒, 對純培養(yǎng)物和模擬食品樣品直接檢測的靈敏度分別為21 cfu/mL和210 cfu/g;特異性試驗(yàn)表明, 該方法能選擇性檢測副溶血弧菌, 而與金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、單增李斯特桿菌等多種常見的食源性病原菌沒有交叉反應(yīng);重復(fù)性試驗(yàn)表明同一樣品于試驗(yàn)內(nèi)及試驗(yàn)間的變異系數(shù)分別為0.9%和1.3%;結(jié)果表明TaqMan實(shí)時熒光PCR方法具有特異性好、靈敏度高、重復(fù)性好的特點(diǎn), 能進(jìn)行定量檢測, 而且檢測時間從核酸抽提到出實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅需要3h, 是快速檢測副溶血弧菌的有效手段。Tyagi等用SYBR熒光染料建立了熱帶貝類實(shí)時熒光PCR方法,最小檢測范圍可以達(dá)到0.1 pg副溶血弧菌DNA。Kim等也建立了牡蠣實(shí)時熒光PCR方法。

四、小結(jié)

除了以上方法外,還有研究報道將核酸分子雜交、變性高效液相色譜技術(shù)(DHPLC)、膠體金免疫層析技術(shù)、基因芯片技術(shù)[16]等技術(shù)應(yīng)用于副溶血性弧菌檢測中。雖然許多學(xué)者研究了多種副溶血弧菌檢測技術(shù),但是筆者認(rèn)為副溶血弧菌檢測產(chǎn)品市場化方面的研究還比較欠缺,許多成果僅停留在實(shí)驗(yàn)室研究階段。目前市場上應(yīng)用的副溶血性弧菌(VP)核酸擴(kuò)增檢測試劑盒僅能應(yīng)用于進(jìn)出口檢疫、實(shí)驗(yàn)室研究和實(shí)驗(yàn)設(shè)備先進(jìn)的單位,基層養(yǎng)殖戶由于缺乏PCR儀和分子生物學(xué)技術(shù)無法此法進(jìn)行檢測。只有研究出適合于基層養(yǎng)殖場的快速粗略僅能定性的檢測試紙條,適用于中層檢測機(jī)構(gòu)效果好交叉反應(yīng)小的ELISA試劑盒和適用于進(jìn)出口和實(shí)驗(yàn)設(shè)備好的,以中國流行的致病性副溶血弧菌為主的核酸擴(kuò)增檢測試劑盒才能真正的解決我國副溶血性弧菌檢測市場化問題。

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第4篇：水產(chǎn)養(yǎng)殖弧菌的處理范文

1.合理和節(jié)約用水，保障重點(diǎn)水面用水。

（1）科學(xué)調(diào)度漁業(yè)用水，協(xié)調(diào)解決各行業(yè)用水矛盾。對于兼有灌溉功能的池塘和小型水庫，要積極協(xié)調(diào)好漁業(yè)生產(chǎn)和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的關(guān)系，制定科學(xué)的用水調(diào)度方案，必要時確定最低水位線，避免多重?fù)p失；有條件的地區(qū)，可采取“過塘水”，即先水過塘、再灌溉農(nóng)田的辦法，科學(xué)調(diào)配、充分利用有效的水資源。

（2）加強(qiáng)養(yǎng)殖用水調(diào)劑，保障生產(chǎn)正常開展。

干旱引發(fā)池塘水體蒸發(fā)，造成養(yǎng)殖密度增大，水質(zhì)惡化，給養(yǎng)殖生產(chǎn)帶來嚴(yán)重影響。一是要保障養(yǎng)殖用水。采取筑壩蓄水、疏浚溝渠、引水灌溉、泵站提水、打井抽水等有效辦法，最大限度地調(diào)度漁業(yè)生產(chǎn)用水，滿足養(yǎng)殖需要。在有條件的地方要大力推行“一塘一井”辦法，保證漁業(yè)生產(chǎn)正常進(jìn)行。

（3）本著科學(xué)合理用水，節(jié)約用水的原則，適當(dāng)減少換水頻率，提高水的利用率。對水源條件較好的養(yǎng)殖地段，做好池塘蓄水工作，保持較大的水容量。

（4）搞好池塘、養(yǎng)魚稻田的滲漏檢查和維修工作，發(fā)現(xiàn)滲漏情況及時進(jìn)行修閘堵漏，減少水的浪費(fèi)。

（5）修復(fù)、添置提灌設(shè)施，確保必要供水順暢。

（6）要優(yōu)先保證親魚和魚種池塘的用水。旱情嚴(yán)重的地方，應(yīng)采取并塘或轉(zhuǎn)移的方法，保存親魚和魚種。并塘或轉(zhuǎn)移時，要注意操作方法，盡可能減輕對魚體的損傷。運(yùn)輸時，盡量選擇在傍晚進(jìn)行。

2.想方設(shè)法增加池塘蓄水量，保障養(yǎng)殖生產(chǎn)。

（1）有條件的地方還需要采取臨時性打小型機(jī)井提水，組織排灌機(jī)械，加注新水，緩解供水矛盾。

（2）加深池塘水位，以改善水質(zhì)、降低水溫與水體載魚量。

（3）如不能加水，則協(xié)調(diào)養(yǎng)殖戶之間的關(guān)系，對即將干枯的池塘，將苗種集中轉(zhuǎn)移到水源較好的池塘?xí)吼B(yǎng)，待旱情解除后再放回原塘飼養(yǎng)。

（4）網(wǎng)箱養(yǎng)殖區(qū)將網(wǎng)箱移至較深水域。

3.充分利用有限水資源，加強(qiáng)水質(zhì)調(diào)控。

（1）控制水位。高溫季節(jié)易出現(xiàn)水溫分層、水質(zhì)惡化現(xiàn)象。故要將水位控制在1.2-1.5米，既有合適的水溫，又可穩(wěn)定水質(zhì)。

（2）干旱時期，旱災(zāi)未解除前，減少投喂量，及時清除殘餌、雜物，保持養(yǎng)殖水體環(huán)境良好，減少施肥量，保持良好的水質(zhì)。

（3）干旱期要清除池內(nèi)漂浮物，將未腐爛的雜質(zhì)撈起，以免引起水質(zhì)惡化。

（4）切忌池塘內(nèi)堆積綠肥和施用人畜糞尿、各種餅肥等高效有機(jī)肥。

（5）隨著氣溫逐漸升高，池水的蒸發(fā)嚴(yán)重，所以應(yīng)保證池水溶氧充足，及時開啟增氧機(jī)。遇陣雨或悶熱天氣適當(dāng)延長開機(jī)增氧時間，防止發(fā)生泛塘。

（6）采用生石灰調(diào)節(jié)和改善水質(zhì)。可每隔10-15天，每畝每米水深用生石灰15公斤，化水全池潑灑。

（7）采用微生物制劑調(diào)節(jié)和改善水質(zhì)。條件好的地方，可施用EM菌、活水寶、光合細(xì)菌、底改凈等有益微生物制劑和底質(zhì)改良劑來改善水質(zhì)及底質(zhì)。

（8）采用生物方法凈化水質(zhì)和降低水溫。外來水源有限的池塘，在保證基本養(yǎng)殖水位的前提下，可利用池塘面積的10%左右的水面設(shè)置浮床，移植種植紅菱、水浮蓮、水葫蘆、空心菜等浮性植物，以凈化水質(zhì)和降低池水溫度。

（9）備好增氧粉等急救物資，可以在發(fā)生嚴(yán)重缺氧浮頭、意外停電等情況使用。

（10）加強(qiáng)夜間的巡塘觀察，注意天氣變化，特別是雷陣雨強(qiáng)降溫、強(qiáng)對流可能對養(yǎng)殖魚類引起泛池要做好充分準(zhǔn)備。

二、科學(xué)投喂技術(shù)

在水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中，養(yǎng)殖效益的高低，餌料系數(shù)是關(guān)鍵因素之一。在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，飼料的費(fèi)用約占養(yǎng)殖成本的60%以上。飼料的正確使用及效果，將在水產(chǎn)品養(yǎng)殖的過程中起到舉足輕重的作用。只有充分發(fā)揮飼料的利用率，降低使用飼料的成本，以較低的餌料系數(shù)取得較高的產(chǎn)量，才能取得良好的經(jīng)濟(jì)效益。 針對今年干旱的反常氣候，許多地方缺少水源，魚類食欲減退，生長緩慢。因此我們應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，合理投喂飼料，減少不必要的浪費(fèi)， 主要采取的措施如下：

1.選擇優(yōu)質(zhì)飼料

投喂高質(zhì)量穩(wěn)定性好的配合飼料，不投劣質(zhì)和冰鮮飼料；飼料營養(yǎng)要全面，滿足能量、蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、必需氨基酸、必需脂肪酸、粗纖維及各種礦物質(zhì)和維生素等需要。特別注重蛋白質(zhì)營養(yǎng)，對于配合飼料來說，蛋白質(zhì)是魚類生長所必需的最主要營養(yǎng)物質(zhì)，蛋白質(zhì)含量也是魚飼料質(zhì)量的主要指標(biāo)。應(yīng)適當(dāng)降低放養(yǎng)密度，適當(dāng)投喂精料，增加蛋白質(zhì)營養(yǎng)。

2. 合理投飼

旱災(zāi)未解除前，減少投喂量，加強(qiáng)有氧投喂策略，干旱期間的日投喂量應(yīng)為正常投喂的70%-80%左右；調(diào)整投喂技術(shù)，做到早晚各投喂一次，并采用8分飽食投喂方法，減少飼料的浪費(fèi)和因飼料浪費(fèi)造成水質(zhì)污染，保持水質(zhì)清潔；養(yǎng)殖過程中應(yīng)及時清除殘餌，保持養(yǎng)殖水體環(huán)境良好。

3.加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

要堅(jiān)持“定時、定位、定質(zhì)、定量”的“四定”原則，要堅(jiān)持“看水溫、看水質(zhì)、看大氣、看攝食”的“四看”投餌方法，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。

一是掌握投喂標(biāo)準(zhǔn)，高溫期，日投喂量占魚類總體重的2％～4％，但應(yīng)防止剩料。

二是區(qū)別養(yǎng)殖種類。 合理放養(yǎng)密度，不同種類的魚，在干旱期間其潛在生長能力及生長所需營養(yǎng)要求各不相同，因此其投喂量與投餌料品種也應(yīng)有區(qū)別。

三是把握吃食時間。干旱期間原則上以喂七成飽為佳。選擇定點(diǎn)投喂觀察，一般以投喂后1小時～2小時吃食情況而定。1小時內(nèi)吃完表明要加料，2小時還沒吃完，要適當(dāng)減量。如果經(jīng)過較長時間正規(guī)投喂，魚類吃食時間突然減短至2小時，說明魚體已增重，應(yīng)調(diào)整投喂標(biāo)準(zhǔn)。

四是觀看池塘水色。一般肥水呈油綠色或黃褐色，上午水色較淡，下午漸濃。水的透明度在30厘米左右，表明肥度適中，可進(jìn)行正常投喂；透明度大于40厘米時，水質(zhì)太瘦應(yīng)增加投飼量；透明度小于20厘米時，水質(zhì)過肥，應(yīng)停止或減少投餌。水質(zhì)偏酸（pH值在6 . 5以下）應(yīng)酌量少投飼， 同時每畝水面用2 0 千克生石灰化水全塘潑灑， 將偏酸水質(zhì)調(diào)到微堿性（pH值在7以上）。

五是注意合理操作。投喂注意不可將飼料一次性倒入池中，以免營養(yǎng)成分溶解散失而造成浪費(fèi)或敗壞水質(zhì)。投喂飼料及馴化時應(yīng)把握“慢－快－慢”的節(jié)奏和“少－多－少”的投喂量，少量多次，以提高投喂效果。在陰天及梅雨季節(jié)等低溶氧時期盡量少投喂或不投喂，以防止泛塘或浪費(fèi)飼料。

六是注意天氣變化。魚類飼料投喂也應(yīng)隨天氣的變化而變化。在魚類生長期內(nèi)天氣正常，每日投喂兩次，一般是上午8-9時， 下午4-5時各投喂一次；天氣晴好，應(yīng)多投飼，陰雨天少投，大暴雨時不投，天氣悶熱、氣壓低及雷電大雨時不投。

七是加強(qiáng)巡塘，觀察魚體生長情況。在每天早晚巡塘?xí)r， 要仔細(xì)觀察魚類活動情況，如有輕微浮頭，應(yīng)減少投飼量；如嚴(yán)重浮頭，應(yīng)停止投喂并及時采取加注新水和增氧措施。定期檢查魚類生長情況調(diào)整投飼數(shù)量，發(fā)現(xiàn)魚類生長沒有達(dá)到應(yīng)有的規(guī)格或則個體懸殊較大，應(yīng)及時調(diào)整增加投喂量，補(bǔ)充營養(yǎng)確保其正常生長。

三、病害防控技術(shù)

由于今年干旱，造成養(yǎng)殖池塘水位低，養(yǎng)殖品種密度加大，魚類相互之間相互感染病原的機(jī)率增加，就會引起魚類抗應(yīng)激能力下降，造成魚類抗病能力降低，一旦發(fā)生病害，傳染速度就會加快，因此要特別防止爆發(fā)性魚病的發(fā)生。現(xiàn)在的魚病工作一定要貫徹“全面預(yù)防，積極治療”的正確方針，采取“無病先防，有病早治”的積極方法，才能達(dá)到減少或避免魚類因病死亡，保證養(yǎng)殖魚類的單位面積產(chǎn)量和質(zhì)量。而且魚病的發(fā)生不是一個孤立的原因，它是魚體、病原體和生活環(huán)境三者相互作用、錯綜復(fù)雜的體現(xiàn)，因此預(yù)防魚病不能只從某一方面考慮，而要從三方面著手，既要注意消滅傳染病的來源，盡可能切斷傳染和侵襲途徑，又要提高魚體的抗病力，還要改善生活環(huán)境，采取綜合性的預(yù)防措施，才能達(dá)到預(yù)期的防病效果。因此，在魚類養(yǎng)殖過程中，必需創(chuàng)造一個適宜的生態(tài)環(huán)境，并實(shí)施營養(yǎng)素（含營養(yǎng)素藥物）和有益微生物成為優(yōu)勢種群的調(diào)控技術(shù)管理，才能使之有利于增強(qiáng)魚類的抗病力而健康成長，而不利于病原微生物的增殖，才能達(dá)到病害防控、嚴(yán)防病害爆發(fā)的技術(shù)要求。

1.加強(qiáng)日常管理

干旱期間，是魚類病害高發(fā)期，各養(yǎng)殖戶要堅(jiān)持每日數(shù)次巡塘，注重日常管理，密切觀察養(yǎng)殖品種的變化，發(fā)現(xiàn)問題，正確應(yīng)對，巧妙渡過干旱高溫期，減少旱災(zāi)損失。在每日巡塘中應(yīng)注意觀察魚群的活動和吃食情況，發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象及時進(jìn)行魚病檢查和相應(yīng)的治療。同時，必須貫徹“以防為主，防重于治”的方針，定期對養(yǎng)殖水體潑灑生石灰、微生物水質(zhì)改良劑，增強(qiáng)魚類抗應(yīng)激能力，使用刺激性小的消毒劑對水體進(jìn)行消毒，避免造成養(yǎng)殖水體不穩(wěn)定，對養(yǎng)殖魚類造成新的應(yīng)激。

2.加強(qiáng)應(yīng)激管理

應(yīng)激（脅迫、緊迫）管理本身是健康養(yǎng)成最核心的技術(shù)，在干旱期間更應(yīng)加強(qiáng)應(yīng)激管理。爆發(fā)性魚類疾病一般都出現(xiàn)在環(huán)境惡變，出現(xiàn)應(yīng)激之后，特別是水質(zhì)不穩(wěn)定（水質(zhì)發(fā)生變化）、氣候環(huán)境很差、酸堿度變化大及溫差大等應(yīng)激強(qiáng)度較大時，養(yǎng)殖魚類最容易感染病患。其具體方法可全池潑灑三寶高穩(wěn)VC（150-250克/畝）、葡萄糖（2-3公斤/畝。米水深）、黃芪多糖（100克/畝），以增強(qiáng)養(yǎng)殖魚類的抗應(yīng)激能力。并在潑灑這些后4-6小時，應(yīng)用刺激性小的消毒劑進(jìn)行消毒（需注意消毒劑的選擇和使用問題），撲殺細(xì)菌和病毒，雙管齊下方能最有效控制水產(chǎn)養(yǎng)殖魚類疾病的爆發(fā)。

3.加強(qiáng)增氧措施

隨著養(yǎng)殖時間的增加，污物積累使池塘底部異養(yǎng)菌成為優(yōu)勢菌群，引起池塘底部嚴(yán)重缺氧，進(jìn)而造成亞硝酸鹽、氨氮因氧化不完全而蓄積（發(fā)生中毒），二是池底缺氧最嚴(yán)重的后果是致病菌-嗜水氣單胞菌的惡性增殖，兼之缺氧已經(jīng)顯著降低了養(yǎng)殖魚類的免疫力，這樣就極容易爆發(fā)疾病。為了把底部污物存量降至最低，溶氧必須達(dá)到足夠高，以實(shí)現(xiàn)驅(qū)除、氧化分解，并為生物降解污物提供廣泛接觸的條件，其中采取最有效的手段就是改善水體循環(huán)，消除底部缺氧，其方法是使用底層增氧機(jī)和在天氣悶熱、下雨天及平時晚上12-1點(diǎn)全池潑灑以過碳酸鈉為主要成分的片狀增氧劑200-300克/畝。

4.干旱期間在魚類養(yǎng)殖過程中應(yīng)加強(qiáng)危機(jī)管理

在干旱期間養(yǎng)殖魚類的養(yǎng)殖過程中，必須實(shí)施危機(jī)管理，以創(chuàng)造一個良好的生態(tài)環(huán)境，并實(shí)施營養(yǎng)素（含營養(yǎng)素藥物）和有益微生物成為優(yōu)勢種群的調(diào)控技術(shù)，使之有利于增強(qiáng)養(yǎng)殖魚類體質(zhì)的抗病力而健康成長，而不利于病原微生物的增殖。

環(huán)境惡變是養(yǎng)殖業(yè)最危險的敵人，通常在氣候變化特別是干旱季節(jié)池塘最容易缺氧引起致病菌的大量增殖而爆發(fā)疾病。對于病原體（細(xì)菌、病毒）爆發(fā)的條件是缺氧（低溶氧）和底質(zhì)污物蓄積（提供病原體營養(yǎng)和病原體），水體載菌（毒）量偏高，對養(yǎng)殖魚類產(chǎn)生應(yīng)激引起低抗力下降。對于這些因素我們應(yīng)根據(jù)天氣情況和養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)，提前實(shí)施危機(jī)管理，采取應(yīng)對措施：

（1）拌喂優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定VC（1-2克/公斤飼料），增強(qiáng)養(yǎng)殖魚類抗病和抗應(yīng)激能力；

（2）增加池底溶氧（半夜使用以過碳酸鈉為主要成分增氧劑200-250克/畝），利于增強(qiáng)養(yǎng)殖魚類活力，不利于細(xì)菌（如弧菌、嗜水氣單胞菌等）增殖；

（3）使用刺激性小的消毒劑以殺滅細(xì)菌和病毒，有利于保持水質(zhì)穩(wěn)定，這是養(yǎng)殖過程中最重要的一點(diǎn)；

（4）降低投餌量，減少殘餌和污物，降低病原菌的營養(yǎng)供給；

（5）若養(yǎng)殖魚類發(fā)生病害應(yīng)立即全池潑灑三寶高穩(wěn)VC（200克/畝），以提高養(yǎng)殖魚類的抗應(yīng)激能力，有利于養(yǎng)殖魚類的健康恢復(fù)和發(fā)揮消毒劑的消毒效果；

（6）如果使用好氧的有益微生物（如硝化細(xì)菌、芽孢桿菌等）改良水質(zhì)，需注意在使用微生物制劑前天晚上每畝用過碳酸鈉為主要成分的片狀增氧劑，并在使用前3-4小時使用一次快速增氧劑并持續(xù)開動增氧機(jī)，有利于發(fā)揮好氧微生物制劑的功效，達(dá)到改良養(yǎng)殖水質(zhì)的效果。

四、苗種補(bǔ)放技術(shù)

苗種是水產(chǎn)養(yǎng)殖的基礎(chǔ)，持續(xù)干旱影響水產(chǎn)親本和苗種生產(chǎn)，造成苗種供應(yīng)不足和質(zhì)量下降，嚴(yán)重影響漁業(yè)生產(chǎn)，主要表現(xiàn)在如下方面：

1.干旱困擾苗種生產(chǎn)，種苗供應(yīng)不足。春季是苗種繁殖的季節(jié)，由于早春缺水，親魚培育過程中水質(zhì)條件較差，親魚未經(jīng)過流水刺激，導(dǎo)致親魚性腺成熟差，懷卵質(zhì)量下降，繁殖過程中產(chǎn)卵率、受精率、孵化率均呈下降。一些苗種場因缺水處于半生產(chǎn)或未生產(chǎn)狀態(tài)，使得部分地區(qū)的苗種供應(yīng)告急。

2.干旱制約種苗投放，養(yǎng)殖周期縮短。冬春季節(jié)是漁業(yè)干塘整修、水利整險加固和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)用水高峰期，干旱造成湖泊水位低，溝渠和塘堰長時間干旱，水源異常緊張，許多地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖已無水可調(diào)，池塘無水或者蓄水嚴(yán)重不足，導(dǎo)致不能及時投放魚種，錯過了最佳放養(yǎng)季節(jié)，同時也縮短了養(yǎng)殖周期，部分魚池甚至至今都無法投放種苗。

為了應(yīng)對干旱災(zāi)害，可從調(diào)配親本和苗種資源、合理補(bǔ)充放養(yǎng)、異地或不同品種間的調(diào)配、提高生產(chǎn)技術(shù)等方面著手，減少災(zāi)害造成的損失。苗種生產(chǎn)應(yīng)對干旱災(zāi)害的技術(shù)措施如下：

1.做好親本調(diào)配和培育，確保苗種生產(chǎn)供應(yīng)

（1）查清親本存量。及時查清親本損失數(shù)量，根據(jù)親本標(biāo)準(zhǔn)及苗種生產(chǎn)計劃，及時補(bǔ)充、調(diào)運(yùn)親本。

（2）強(qiáng)化親本培育。加強(qiáng)親本飼養(yǎng)管理，加強(qiáng)營養(yǎng)，補(bǔ)充能量，促進(jìn)親本正常發(fā)育，確保用于繁育生產(chǎn)的親本數(shù)量和質(zhì)量。

（3）親本異地培育。如果持續(xù)干旱導(dǎo)致親本培育水面嚴(yán)重萎縮，對于一些能進(jìn)行轉(zhuǎn)移的親本，可進(jìn)行異地租賃水面進(jìn)行培育，將干旱地區(qū)的親本轉(zhuǎn)移至非干旱地區(qū)進(jìn)行保護(hù)和培育，來年再運(yùn)回當(dāng)?shù)剡M(jìn)行苗種生產(chǎn)。

（4）野生優(yōu)質(zhì)親本的利用。對于四大家魚、蝦類等以野生種為主要親本來源的種類，可以從當(dāng)?shù)鼗虍惖睾?、河流甚至溝渠等野外水域中收集野生親本，進(jìn)行一定時間的馴養(yǎng)和培育后用于苗種繁殖。

2.做好苗種繁育工作。

（1）改善池塘育苗硬件設(shè)施：加固池埂減少滲水量和滲水的重復(fù)利用：新開池塘和塌陷嚴(yán)重的池埂，滲透水量相對較多，需加寬池埂，并在池埂適當(dāng)部位開挖深溝，重新填埋泥土，堵住滲水。滲水比較分散的池埂，在池埂外側(cè)開挖淺溝，收集池埂滲水。收集的滲水可以用氯制劑消毒后重新注入池塘。水位降低后，葉輪式、水車式增氧機(jī)的增氧效果下降，要注意增加開機(jī)時間，或配備底層管道增氧設(shè)施，達(dá)到增加水體溶氧量的目的。

（2）組織專業(yè)技術(shù)人員，對苗種生產(chǎn)單位和個人，進(jìn)行育苗技術(shù)集中培訓(xùn)和現(xiàn)場指導(dǎo)，提高苗種繁育技術(shù)水平，提高苗種質(zhì)量，彌補(bǔ)苗種供應(yīng)不足。

（3）苗種異地培育。對于一些能進(jìn)行轉(zhuǎn)移的親本，可進(jìn)行異地租賃水面進(jìn)行培育，可將干旱地區(qū)的成熟親本轉(zhuǎn)移至非干旱地區(qū)進(jìn)行苗種繁育， 苗種育成后再運(yùn)回當(dāng)?shù)剡M(jìn)行放養(yǎng)。

（4）改進(jìn)苗種捕撈方式，節(jié)約用水。有些種類苗種捕撈時，部分傳統(tǒng)的方法是放水收集，水資源浪費(fèi)大。面對干旱，可改進(jìn)捕撈方式，盡量以拉網(wǎng)等方式進(jìn)行，節(jié)約用水。

3.做好親本和苗種調(diào)劑，補(bǔ)充放養(yǎng)以保證養(yǎng)殖生產(chǎn)需求。

有關(guān)管理部分可組織苗種生產(chǎn)單位做好親本和苗種的調(diào)劑、調(diào)運(yùn)工作，從異地調(diào)運(yùn)部分苗種補(bǔ)充放養(yǎng)，有些品種也可捕撈部分野生苗種補(bǔ)充放養(yǎng)，抓好苗種的調(diào)劑，互通有無，互補(bǔ)不足，以最大限度滿足災(zāi)后養(yǎng)殖戶對苗種的需求，使廣大養(yǎng)殖戶能夠在災(zāi)后及時補(bǔ)充投放苗種，將干旱對漁業(yè)生產(chǎn)的影響降低到最低限度。

五、抗旱管理技術(shù)

1.及時掌握旱情，早安排，早部署。密切注意氣象部門的旱情預(yù)報，提前作好應(yīng)急預(yù)案，準(zhǔn)備抗旱物資，全面安排部署水產(chǎn)養(yǎng)殖抗旱救災(zāi)工作。

2.成立技術(shù)服務(wù)專家組，主動做好技術(shù)幫扶工作。也可將專家組成員名單、聯(lián)絡(luò)方法通過各種方式告之養(yǎng)殖戶，保證養(yǎng)殖戶得到及時的技術(shù)指導(dǎo)。

3.增強(qiáng)水產(chǎn)品質(zhì)量安全意識，從水域環(huán)境監(jiān)控、產(chǎn)地環(huán)境、投入品、生產(chǎn)過程、市場準(zhǔn)入等環(huán)節(jié)加大水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管力度。建立《水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)記錄》《水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥記錄》和《水產(chǎn)品銷售記錄》，加強(qiáng)水產(chǎn)投入品監(jiān)管和水產(chǎn)品檢疫，嚴(yán)禁使用違禁藥物，確保水產(chǎn)品質(zhì)量安全。

4.加強(qiáng)生產(chǎn)管理，適當(dāng)減少養(yǎng)殖密度，科學(xué)投喂。旱情嚴(yán)重的地方，應(yīng)及時將商品魚捕撈上市或采取并塘、轉(zhuǎn)移等措施，降低養(yǎng)殖密度，緩解水體溶氧壓力。并塘或轉(zhuǎn)移時，要注意操作方法，盡可能減輕對魚體的損傷，盡量選擇在傍晚進(jìn)行。對于不能上市的魚種作好并塘或囤積處理，確保不能上市的魚種安全度過干旱。適當(dāng)減少每天投喂次數(shù)和投喂總量，盡量不施有機(jī)肥、少施無機(jī)肥。

5.加強(qiáng)水質(zhì)調(diào)控和疫病防控，確保水產(chǎn)品質(zhì)量安全。要求每天增加巡塘次數(shù)，注意日常管理，密切養(yǎng)殖品種的變化。干旱期要經(jīng)常清除池塘內(nèi)的漂浮物，將未腐爛的雜質(zhì)撈掉，以免引起水質(zhì)惡化。加強(qiáng)病害監(jiān)測，加大疫病防治，指導(dǎo)漁民科學(xué)用藥，發(fā)現(xiàn)問題，及時應(yīng)對。

6.及時修復(fù)養(yǎng)殖設(shè)施，做好苗種準(zhǔn)備工作。對已干枯的池塘，及時清除淤泥、消毒塘體，修補(bǔ)塘埂和溝渠，做好旱情緩解后恢復(fù)生產(chǎn)準(zhǔn)備工作。做好苗種儲備供應(yīng)和信息調(diào)度，組織干旱程度較輕的地區(qū)加大水產(chǎn)苗種生產(chǎn)力度，及時水產(chǎn)苗種供需信息，為恢復(fù)生產(chǎn)做好準(zhǔn)備。

第5篇：水產(chǎn)養(yǎng)殖弧菌的處理范文

通訊作者：李偉，男，教授，Tel: 0411-84763553；E-mail: aisingioro@hotmail.com。

韓歡，徐婧，孔亮，李偉*，董美玲，劉琪，王春龍

（大連海洋大學(xué)，遼寧 大連 116023）

摘要：對水產(chǎn)品等食品中磺胺類抗生素常用的分析方法和預(yù)處理方法進(jìn)行了綜述，歸納和比較了毛細(xì)管電泳法、微生物方法、液相色譜-質(zhì)譜法、免疫法、氣相色譜法、分光光度法、高效液相色譜法等特點(diǎn)。其中高效液相色譜法由于操作簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，是當(dāng)前檢測磺胺類抗生素的主要方法。同時，對包括固相萃取、分子印跡等預(yù)處理方法進(jìn)行了綜述。

關(guān)鍵詞 ：磺胺類抗生素；抗生素殘留分析；高效液相色譜法；分子印跡。

早在人類出現(xiàn)之前，細(xì)菌已經(jīng)在不同的生態(tài)位發(fā)揮著重要的作用。在細(xì)菌中有相當(dāng)小的比例是致病菌，它們能夠給人類和動物的健康帶來災(zāi)難性的影響。在治療細(xì)菌感染的歷史過程中，人類就發(fā)現(xiàn)了細(xì)菌和植物種類中有益的抗菌性，并開始利用具有抗菌活性的化合物來抑制細(xì)菌感染，而這些化合物大多是來自自然界。1929年，弗萊明在實(shí)驗(yàn)中偶然發(fā)現(xiàn)了青霉素，并且在牛津大學(xué)病理學(xué)教授弗洛里的進(jìn)一步系統(tǒng)研究之后，抗生素的發(fā)展得到了大力推動[1]。青霉素在首次臨床試驗(yàn)中，療效效果十分驚人，從此抗生素進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)及商品化使用，并且在畜牧、水產(chǎn)品養(yǎng)殖等行業(yè)大面積使用。但隨著抗生素商品化及平民化使用，過度及搭配不當(dāng)?shù)厥褂每股胤炊鴷＜叭思皠游锏纳踩瑫r也會造成環(huán)境污染。如：產(chǎn)生毒副作用[2]、致病菌產(chǎn)生耐藥性[3]、繼發(fā)性感染[4]、動物源性耐藥菌對人類的危害[5]、影響環(huán)境微生物[6]、食品安全[7]。

1磺胺類藥物殘留的檢測分析方法

磺胺類藥物（Sulfonamides，SAs）是比較常見的合成抗菌劑，普遍用于漁業(yè)養(yǎng)殖生產(chǎn)，主要有：磺胺嘧啶（Sulfadiazine，SDZ）、磺胺甲基嘧啶（Sulfamerazine，SM1）、磺胺二甲嘧啶（Sulfadimidine，SM2）、磺胺甲基異惡唑（Sulfamethoxazole，SMZ）等。它們主要用于治療魚類的赤皮病、腸炎、鏈球菌病、弧菌病、細(xì)菌性豎鱗病、赤鰭病、爛鰓病、鞭毛蟲病、弧菌病、腸炎等等[8-9]。SAs的廣泛應(yīng)用，使魚病的感染和傳染方面得到了有效的控制。但是人們在享受著抗生素帶給人們方便的同時，許多新的問題也伴隨而來。像毒性反應(yīng)、二重感染以及細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性等，尤其是在濫用的情況下能夠產(chǎn)生排尿和造血紊亂等副作用[10]。因此大多數(shù)國家包括我國農(nóng)業(yè)部、日本、歐盟、歐美和國際食品法典委員會（CAC）等都陸續(xù)規(guī)定了食品以及飼料中SAs的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)[11-12]。其中日本規(guī)定SM1為0.02 mg/kg，磺胺二甲氧嘧啶（Sulfadimethoxine，SDM）為0.04 mg/kg，SM2為0.01 mg/kg，其它按一律標(biāo)準(zhǔn)為0.01 mg/kg[13]。聯(lián)合國食品法典委員會（CAC）、歐盟和歐美等國家規(guī)定水產(chǎn)品中磺胺類藥物殘留量不得超過0.1 mg/kg[14]。 我國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《NY 5070—無公害食品水產(chǎn)品中漁 藥殘留限量》中規(guī)定，SAs在水產(chǎn)品組織中的最高殘留總量限量為100 μg/kg。另外我國檢測SAs標(biāo)準(zhǔn)還有SN0221-92，SN0208-93，GB/T20759-2006等。

目前，SAs殘留的檢測方法很多，主要有微生物方法、高效液相色譜法（HPLC）、毛細(xì)管電泳法、液相色譜-質(zhì)譜法(HPLC-MS)、免疫法、氣相色譜法（GC）、分光光度法等。其中高效液相色譜法簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)是當(dāng)前檢測SAs的主要方法。表1為近年來常用的抗生素分析方法。

1.1微生物方法

微生物方法是應(yīng)用較為廣泛的一種檢測方法，尤其是在牛乳中抗生素殘留的檢測。微生物檢測方法分為紙片法、亮黑還原法、TTC法、CHARM抑制法等[15]。該方法具有可直觀、儀器設(shè)備成本和檢測成本較低，但該方法的靈敏度和特異性與其它方法對比相對較低。其中酶標(biāo)抗體檢測法是目前一種趨向靈敏、準(zhǔn)確、快速的新型微生物檢測方法[16]。

1.2高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）

高效液相色譜法（HPLC）是色譜法中一個重要的分支，也是目前應(yīng)用最廣泛的檢測抗生素的方法。HPLC因載液流速快，固定相和流動相可以自主選擇，所以具有分析速度快、分離效率高的特點(diǎn)，可以檢測近70%的化合物?？股貧埩粼谏V分析時最常用的檢測方式有紫外-可見檢測器（UV-Vis）電化學(xué)檢測器（ECD）、熒光檢測器（FLD）和二極管陣列全波長檢測器（DAD）等。如劉勇[17]、ayas-Blanco[18]、Kunihiro Kishida[19]、方炳虎[20]等分別應(yīng)用反相高效液相色譜法檢測分析牛奶中SAs的殘留，并采用乙腈提取SAs殘留，獲得了良好的分析效果。劉振偉等[21]以乙腈進(jìn)行提取，HLB小柱凈化，采用紫外-可見檢測器在270 nm處進(jìn)行檢測，檢測低限能夠達(dá)到5 μg/kg，線性在25～300 μg/kg范圍內(nèi)良好。該類方法具有準(zhǔn)確度高、精密度好、檢測限低的特點(diǎn)。

1.3毛細(xì)管電泳法（Capillary Electrophoresis，CE）

毛細(xì)管電泳法也是一種液相分離的技術(shù)，再用紫外-可見檢測器掃描成電泳譜圖，相對于高效液相色譜來說，CE的柱效更高，對于離子型化合物具有很好的分離效果，并提高了樣品檢測的分辨率。目前由于毛細(xì)管電泳和高靈敏度檢測器的聯(lián)用，靈敏度有了極大的提高[22-25]。如Ackermans等建立了毛細(xì)管帶電泳法檢測磺胺噻唑（Sulfathiazole，ST）、磺胺甲噁唑（Sulfamethoxazole，SMO）等15種SAs的殘留分析方法[26]。但CE最大的不足是進(jìn)樣量過低，造成分析誤差升高，并且進(jìn)樣的待測物受到限制，很難應(yīng)用于痕量分析。

1.4液相色譜-質(zhì)譜法(HPLC-MS)

液相色譜-質(zhì)譜法是液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜作為檢測系統(tǒng)的一種結(jié)合方法。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢的互補(bǔ)，提高了對復(fù)雜樣品的分離分析能力。HPLC-MS有如下幾個特點(diǎn)：（1）分析范圍廣泛，可以檢測絕大多數(shù)的化合物；（2）分離能力強(qiáng)，通過MS，能夠按照特征離子質(zhì)量可以將色譜中沒有徹底分開的混合物進(jìn)一步進(jìn)行分離，并可以定性、定量分析；（3）檢測限低；（4）分析時間快；（5）自動化程度高。如Casetta等建立了HPLC-MS/MS法測定了蜂蜜中SAs的方法[27]。

1.5免疫學(xué)方法

免疫分析方法包括放射免疫分析法（Radioimmunoassay，RIA）、酶聯(lián)免疫分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）、固相免疫傳感器、免疫親和色譜（Immunoaffinity Chromatography，ICA）等。免疫學(xué)方法具有操作簡便、分析成本低、靈敏度極高等優(yōu)點(diǎn)。其中酶聯(lián)免疫分析法更是由于特異性強(qiáng)、操作簡便的特點(diǎn)使其成為最為常用的方法之一[28-30]。但由于免疫測定法大多數(shù)是以生物物質(zhì)作為分子檢測識別原件，這些物質(zhì)不易長期保存，并且操作穩(wěn)定性差，容易出現(xiàn)假陽性，因此不適合作為確證試驗(yàn)。

1.6氣相色譜法（Gas Chromatography，GC）

氣相色譜在早期SAs分析中應(yīng)用較多。GC可以使用的檢測器通常有火焰電離檢測器（FID）、電子捕獲檢測器（ECD）、熱導(dǎo)檢測器（TCD）等。其中FID、TCD檢測的范圍廣泛，其它的檢測器因檢測化合物的范圍較窄而鮮有應(yīng)用。GC具有分析速度快、效率高、操作簡單、選擇性較好、低檢測限等優(yōu)點(diǎn)。由于GC/ECD可以作為GC/MS的補(bǔ)充可以測定動物性食品等樣品[31]，所以分析SAs時氣相色譜法主要為GC/ECD。但同時GC只能適用于低沸點(diǎn)、易揮發(fā)但不分解的物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析，因此在很多實(shí)際分析檢測中，GC受到了一定的限制，需要對樣品預(yù)處理、色譜條件、流動相的選擇進(jìn)行改善等優(yōu)化。

1.7分光光度法

分光光度法有紫外可見分光光度計、原子熒光分光光度計和原子吸收分光光度計，同樣它們在食品領(lǐng)域中已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用[32-33]。雖然常規(guī)的光譜學(xué)儀器應(yīng)用廣泛、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，但受到線性范圍、準(zhǔn)確度及精密性等性能參數(shù)的制約，從而影響到解決食品中實(shí)際樣品檢測問題。Gala B等建立了停止與流動技術(shù)與T型熒光分光法結(jié)合的方法同時測定出牛奶中氨芐青霉素和四環(huán)素[34]。

表1常用的抗生素分析方法

2針對抗生素分析的樣品預(yù)處理方法

由于食品中富含脂肪、蛋白質(zhì)、糖、維生素及氨基酸等基質(zhì)，而且食品中存在大量的干擾物質(zhì)，待測物含量非常低，規(guī)定的濃度量級基本為mg/kg、μg/kg、ng/kg，甚至更低。因此在檢測食品樣品中需要大量而且細(xì)致的分離純化和富集過程。樣品預(yù)處理是其中必不可少的步驟，也是最關(guān)鍵的步驟。由于樣品預(yù)處理可以減少雜質(zhì)對目標(biāo)物的干擾程度，以及可以對試樣中的痕量組分進(jìn)行預(yù)富集，所以是整個檢測分析過程中誤差的主要來源和分析時間快慢的決定步驟[35]。預(yù)富集能力越強(qiáng)、富集成分越單一，檢測靈敏度就越高。而且無論是HPLC還是GC等的檢測方法通常是需要對樣品中的抗生素殘留進(jìn)行預(yù)處理，如分離、純化等步驟。因此，發(fā)展新型快速的樣品預(yù)處理方法對于建立食品中抗生素的檢測方法也是非常重要的。目前磺胺類抗生素檢測分析樣品預(yù)處理方法主要有液-液萃取法、固相萃取法、微波輔助萃取法、超臨界流體萃取、分子印記法等。表2為近年來常用的抗生素分析的樣品預(yù)處理方法。

2.1液-液萃取

液-液萃取是SAs殘留分析中的一種常用的經(jīng)典提取方法，是早期樣品凈化方法中最常用的方法，一般應(yīng)用于樣品中被測物質(zhì)與基質(zhì)的分離。其原理是根據(jù)組分在溶劑中的不同溶解度而達(dá)到分離或提取目標(biāo)化合物的目的。張偉紅等先將水產(chǎn)品酸化處理，再用乙腈做萃取溶劑，經(jīng)正己烷脫脂后，蒸發(fā)濃縮，最后用HPLC-MS/MS內(nèi)標(biāo)法測定了水產(chǎn)品中18種SAs殘留量[36]。液-液萃取方法雖然操作簡便，但是存在處理過程引起的誤差較大、可控性較差等不足，除雜效果有限。

2.2固相萃取（Solid Phase Extraction，SPE）

固相萃取主要應(yīng)用于樣品的分離、濃縮和純化。固相萃取方法具有如下優(yōu)點(diǎn)：(1) 富集倍數(shù)高，由于使用的是固相萃取柱富集樣品，所以富集倍數(shù)可以高達(dá)數(shù)十倍，甚至是數(shù)百倍；(2) 分離雜質(zhì)效率高，固相萃取可以有針對性地選擇SPE吸附劑，從而有效地分離干擾組分；(3) 有機(jī)溶劑消耗量低，僅需少量的洗脫劑就能把待測分析組分洗脫下來；(4)易于收集、操作快捷方便等優(yōu)點(diǎn)，因此目前廣泛應(yīng)用于食品化學(xué)成分、農(nóng)獸藥殘留、環(huán)境污染物等方面的檢測。

SPE可以根據(jù)抗生素化學(xué)性質(zhì)采用不同類型的SPE柱進(jìn)行固相萃取。其中，用于分析動物源性食品中SAs的SPE柱主要分以下幾種：(1) C18 SPE柱；包艷萍等采用C18 SPE柱凈化蔬菜中SAs，凈化效果良好，回收率為50.80%～98?90%[37]。(2) 堿性氧化鋁SPE柱；王欽暉等、李俊鎖等分別在測定蜂蜜、雞肝組織中SAs殘留量時，采用堿性氧化鋁SPE-Pak柱凈化樣品，樣品用乙腈淋洗后售價并分析，結(jié)果表明干擾被測樣品中的雜質(zhì)能夠被去除，該方法操作簡單[31,38]。 (3) Oasis HLB SPE柱；李存等將樣品加入到Oasis HLB SPE柱中進(jìn)行分離預(yù)處理，結(jié)果表明，該預(yù)處理方法去除雜質(zhì)效果較好，定量曲線線性良好[39]。(4) Oasis MCX SPE柱；熊芳等采用Oasis MCX SPE柱對動物肝臟中的4種SAs進(jìn)行萃取[40]。該方法操作簡便，凈化效果好，能夠滿足分析的需要。(5) 硅膠SPE柱；董丹等采用硅膠SPE柱對雞肉中的17種SAs進(jìn)行凈化，方法回收率為52.30%～124.90%，提高了樣品中被測物質(zhì)的檢測靈敏度[41]。(6) DVB型全自動固相萃取小柱；何桂花等運(yùn)用全自動固相萃取小柱富集凈化動物臟器組織中的SAs。使用二氯甲烷提取，正己烷除脂。萃取柱經(jīng)甲醇和5%的乙酸溶液處理活化，然后上樣，采用5%的乙酸-甲醇(1:1, v/v)進(jìn)行洗脫收集后進(jìn)行分析，結(jié)果表明處理效果較好[42]。由于SPE具有效率高、重復(fù)性好、處理速度快等特點(diǎn)，目前已經(jīng)成為抗生素殘留分析預(yù)處理方法的一個發(fā)展方向。

2.3微波輔助萃?。∕icrowave Aided Extraction，MAE）

MAE具有回收率高、萃取時間較短等優(yōu)點(diǎn)，其具體表現(xiàn)為：不僅可以加快樣品中基質(zhì)、大分子物質(zhì)的分離，還可以通過添加極性溶劑吸收微波能來提高溶劑的提取效能；MAE能夠在高溫和高壓下加快分子運(yùn)動速度，繼而提高了微波萃取的速率。曾慶磊建立了微波輔助水蒸氣萃取的方法提取動物飼料中磺胺類抗生素，能夠快速、高效率地提取飼料中磺胺類抗生素，并減少了樣品中其他雜質(zhì)的提取，達(dá)到了較高的回收率[43]。

2.4超臨界流體萃取（Supercritical Fluid Extraction，SFE）

當(dāng)某一物質(zhì)高于本身的臨界溫度和壓力后，該物質(zhì)物理狀態(tài)處于既不會是液體也不是氣體的狀態(tài)，我們稱之為超臨界流體（Supercritical Fluid，SF）。SF由于其獨(dú)特的性質(zhì)而能夠溶解很多物質(zhì)，SFE正式利用這一超臨界流體作為溶劑，因此壓力和溫度都會對流體的溶解能力產(chǎn)生很大的影響。并且SF的表面張力較小，使其能夠快速滲透到樣品中，因此其萃取速度要比普通溶劑的萃取速度快很多。由于這些性質(zhì)使超SFE要比溶液萃取的效果好得多[44]。SFE具有廣泛的實(shí)用性、萃取效率高，尤其是不產(chǎn)生污染、節(jié)省能源等優(yōu)點(diǎn)，特別適合于熱敏性天然產(chǎn)物和生理活性物質(zhì)的萃取分離[45]。

2.5免疫親和色譜法（Immunoaffinity chromatography，IAC）

免疫親和色譜法是一種操作簡便、分離效果理想且精密度高的樣品前處理中方法。IAC有可以對復(fù)雜基質(zhì)中痕量組分進(jìn)行選擇性吸附和富集的特點(diǎn)，檢測線非常低，而且免疫吸附柱經(jīng)適當(dāng)處理后可以重復(fù)使用，目前是殘留分析中比較有效的凈化方法之一，已經(jīng)被應(yīng)用于多種藥物殘留的測定。李俊鎖等、Sheth H B等分別建立了免疫親和色譜法測定獸藥和蜂蜜中SAs的殘留[46-47]。

2.6分子印跡法（Molecular Imprinting）

表2抗生素分析中常用的樣品預(yù)處理方法

分子印跡技術(shù)最早是由Pauling提出以抗原為模板合成抗體的理論為啟發(fā)[48]，直到1972年由德國Wulff等研究小組才人工合成出對糖類化合物具有較高選擇的共價型分子印跡聚合物[49]。到1993年Mosbach等在Nature上發(fā)表了非共價型分子印跡聚合物合成及其仿生免疫分析應(yīng)用的文章后[50]，分子印跡技術(shù)得到了迅猛發(fā)展。分子印跡技術(shù)通常來講是指通過加入模板分子能夠形成對某一特定的分子具有特異性選擇的聚合物，并且當(dāng)模板分子去除后，聚合物中形成與模板分子空間結(jié)構(gòu)相匹配的空穴，從而這個空穴對模板分子具有高度的選擇識別性。分子印跡技術(shù)具有構(gòu)效預(yù)定性（predetermination）、特異識別性（specific recognition）、廣泛實(shí)用性（practicability）、穩(wěn)定性好、使用壽命長等特點(diǎn)[51]。在以磺胺類作為模板分子的整體柱報道中，劉祥軍等以SMO作為模板分子，四乙烯基吡啶（4-vinyl pyridine，4-Vpy）為功能單體，采用了原位聚合法在色譜柱中直接制備了SMO分子印跡整體柱，并顯示出良好的識別能力。

中國加入世界貿(mào)易組織之后，各國政府使用貿(mào)易保護(hù)政策來維護(hù)本國的經(jīng)濟(jì)利益，而食品安全問題已經(jīng)成為影響貿(mào)易的關(guān)鍵因素，各國對食品中SAs的殘留量制定了嚴(yán)格的控制標(biāo)準(zhǔn)。近年來，由于水產(chǎn)養(yǎng)殖病害多發(fā)，不規(guī)范用藥情況依然存在。另外，由于水產(chǎn)養(yǎng)殖的集約化，飼料藥物添加劑和亞治療量的各類抗生素在生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用，以及不合理用藥等因素，使水產(chǎn)品藥物殘留問題日益突出。我國由于出口產(chǎn)品SAs殘留超標(biāo)，造成了外貿(mào)受阻，給我國的經(jīng)濟(jì)和形象帶來了嚴(yán)重影響。因此無論是從產(chǎn)品的本身需求方面，還是為相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行提供科學(xué)技術(shù)依據(jù)，提高并完善檢測包括水產(chǎn)品在內(nèi)的食品中SAs殘留的技術(shù)都是至關(guān)重要的。

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第6篇：水產(chǎn)養(yǎng)殖弧菌的處理范文

關(guān)鍵詞：寡糖；提取；純化；應(yīng)用

中圖分類號：S646.099文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2013）07-0141-05

寡糖又稱低聚糖，由不同的五碳糖和六碳糖通過糖苷鍵連接形成?？茖W(xué)界對“寡”的數(shù)目并沒有嚴(yán)格的規(guī)定。1959年，Jhone建議將9個以下的單糖殘基低聚物稱為寡糖[1]。寡糖及其衍生物是一類重要的生物活性物質(zhì)，能促進(jìn)雙歧桿菌生長，激活植物的自我防衛(wèi)系統(tǒng)，還具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用。寡糖類物質(zhì)可通過天然提取、降解和人工合成等方法獲得，其中天然提取的方法具有方法簡單、能耗小、污染低等優(yōu)點(diǎn)。玄參科、菊科植物和食藥用菌因其含有較多的功能性寡糖和未知寡糖，已成為天然寡糖的主要研究對象。食藥用菌含有的聚糖類物質(zhì)尤為豐富，繼活性多糖后食藥用菌寡糖的研究將成為糖工程研究的又一熱點(diǎn)。

1寡糖的分布

寡糖類物質(zhì)的分布廣泛，多數(shù)植物的根莖、果實(shí)和種子中均含量豐富。王照波等[2]、王江浪等[3]從雪蓮果、蘋果中提取出大量寡糖類物質(zhì)，陳[4]采用水提醇沉去多糖法從洋根中提取的低聚果糖含量高達(dá)53.72%。生地黃中已知的寡糖種類有水蘇糖、棉子糖、甘露三糖、毛蕊四糖等[5，6]。據(jù)報道，營養(yǎng)豐富的食藥用菌也富含寡糖類物質(zhì)。姜瑞芝等[7，8]從猴頭菌浸膏中分離得到猴頭菌二糖、三糖和四糖。馬紅霞等[9]從樹舌靈芝中分離得到了非還原性二糖。此外，也有從藻類、菊芋、大豆等[10～12]植物中獲得寡糖類物質(zhì)的報道。

2寡糖的分類

到目前為止已確定的寡糖有上千種。寡糖的分類有以下3種方法[13]：①根據(jù)寡糖的單糖組成可分為同寡糖和雜寡糖；②根據(jù)寡糖分子中是否存在游離的半縮醛羥基，分為還原性寡糖和非還原性寡糖；③根據(jù)生物學(xué)功能可分為普通寡糖和功能性寡糖，前者可被機(jī)體消化吸收，產(chǎn)生能量，后者具有特殊的生理學(xué)功能但不被腸道吸收。此外，寡糖還存在許多經(jīng)過化學(xué)基團(tuán)修飾生成的衍生物，如糖醛酸、胺基糖、脫氧糖、糖醇等[14]。

3天然寡糖的提取方法

天然提取寡糖與降解或合成寡糖的方法相比，雖不易擴(kuò)大到工業(yè)化生產(chǎn)，但工藝簡便，涉及化學(xué)藥品少，對寡糖的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)活性影響小，有利于研究未曾發(fā)現(xiàn)或認(rèn)知的新型寡糖。常見的提取方法有以下幾種：

3.1水提法

水提法是自天然材料中提取糖類物質(zhì)的常用方法。為了減少雜質(zhì)，可先用低極性溶劑去除親脂性的成分，然后再用水浸提。趙貴興等[12]以脫脂豆粕為原料，采用水提法制備大豆低聚糖漿，為大豆的綜合利用提供了新途徑。

3.2有機(jī)溶劑抽提法

糖類是多羥基的化合物，極性大，易溶于極性溶劑，因此，可利用相似相容原理，選擇合適極性的溶劑反復(fù)抽提。趙益斌等[15]對青陽參乙酸乙酯提取物進(jìn)行研究，分離得到4種新寡糖。信維平[16]分析了乙醇甲醇法和乙醇法兩種提取方法對胡蘿卜寡糖提取率的影響并確定了最佳提取工藝。

3.3微波提取法

近幾年來，微波提取法已廣泛應(yīng)用于藥用植物化學(xué)成分提取方面。其原理[18，19]是利用微波能的加熱效應(yīng)加速對目標(biāo)化合物的提取，并利用空間電場和磁場的高頻振蕩，加速目標(biāo)化合物的擴(kuò)散速率，從而提高提取效率。王章存等[19]利用500 W的微波在近中性的條件下處理30 min，可顯著提高大豆低聚糖的含量且更利于脫鹽。

3.4射頻法

與微波加熱同屬介電加熱的射頻技術(shù)，射頻頻率在10～300 MHz，由于其波長最多可達(dá)微波波長的360倍，穿透深度（幾十厘米）遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過微波[20]。同時由于射頻的能量更加集中，不像微波是漫散射，因此設(shè)備放大后也不存在泄露問題。高虹等[21]探討了射頻技術(shù)在香菇多糖提取中的應(yīng)用，優(yōu)化了射頻輔助提取工藝，與傳統(tǒng)方法相比得率有較大提高。

3.5超聲波提取法

超聲波法提取糖類化合物的主要原理是由于超聲波產(chǎn)生的空化效應(yīng)能產(chǎn)生強(qiáng)大的沖擊波，促使細(xì)胞內(nèi)含物釋放到溶劑中，從而加速了整個萃取過程[22]。劉立洋等[23]探究了超聲波技術(shù)在提取大豆低聚糖工藝中的應(yīng)用效果，并摸索出一整套提取、檢測的方法。

4寡糖的分離和純化

寡糖的分離和純化是寡糖研究的關(guān)鍵步驟，是指將不同種類寡糖進(jìn)行分離，得到單一寡糖的過程。目前，常用的分離技術(shù)有以下幾種：

4.1層析技術(shù)

4.1.1薄層層析薄層層析是在紙層析的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，在玻璃板上涂一層支持劑，通過流動劑的推動使一端樣品得到分離的物理方法。常用的支持劑有硅膠G、氧化鋁、纖維素、硅藻土、交聯(lián)葡聚糖凝膠等[24]。此方法優(yōu)點(diǎn)是分辨效率高，簡便易行，可同時分析多個樣品。Betty等[25，26]確定了殼寡糖的薄層色譜分析條件：乙酸乙酯∶乙醇∶水∶氨水（V/V）=5∶4∶4∶0.3，殼寡糖溶液上行展距為8 cm。

4.1.2色譜柱分離法色譜柱分離法是一種便于工業(yè)化生產(chǎn)、操作簡單的方法。當(dāng)樣品溶液通過色譜柱中的固定相后，不同組分即可得到分離。色譜柱中的填充料以離子交換樹脂、大孔樹脂和聚酰胺為主。下面簡單介紹幾種色譜柱分離方法：

①活性炭柱層析：活性炭柱層析是利用樣品中各組分在活性炭上的吸附能力不同來進(jìn)行分離的?；钚蕴勘缺砻娣e大，吸附量大，分離效果較高，與等量的天然硅藻土混合使用，是分離寡糖液常用的填充材料?；钚蕴恐鶎游龇椒ǖ膬?yōu)點(diǎn)是分離容量大，分離效率高，適用范圍廣，并不受洗脫液組成、糖液濃度改變（1%～10%）或無機(jī)鹽存在的影響[27]。車今智等[28]采用活性炭柱層析對芙蓉菊寡糖進(jìn)行分離，獲得了不同分子量的寡糖片段。

②凝膠柱層析法：凝膠柱層析法已廣泛應(yīng)用在寡糖的分離與純化過程中，其優(yōu)點(diǎn)是高效、易操作、重復(fù)性好。主要原理是利用立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多孔性凝膠作為篩子，如葡聚糖凝膠（商品名為Sephadex G）、聚丙烯酰胺凝膠（商品名為Bio-Gel P系列）等。當(dāng)糖溶液流經(jīng)凝膠柱后，洗脫時不同相對分子質(zhì)量的糖可以得到分離。小分子糖易于擴(kuò)散，洗脫時路徑長，后被洗下。郝林華[29]采用SePhadexG-50葡聚糖凝膠柱層析分離純化牛蒡寡糖，得率為77.12%。Harry等[30]采用Bio-Gel P-2凝膠柱層析技術(shù)分離得到帶阿拉伯糖基的低聚木糖。

③離子交換色譜法：在纖維素層析成功分離糖類的基礎(chǔ)上，人們將纖維素改性，使離子交換與纖維素層析結(jié)合制成一系列的離子交換纖維素，應(yīng)用于糖類的分離并取得了較滿意的效果。常見的陽離子交換纖維素有CM-Cellulose、P-Cellulose等；陰離子纖維素有DEAE- Cellulose、ECTEOLA- Cellulose等，可以分離酸性、中性多糖和黏多糖。用離子交換樹脂分離糖類，可有效地除去樣液中的酸、堿成分及無機(jī)離子，但應(yīng)注意不宜用強(qiáng)堿性與強(qiáng)酸性樹脂[1]。劉元召[31]在研究真菌壁寡糖的過程中，采用強(qiáng)陽離子交換層析介質(zhì)分離寡糖、蛋白及肽類物質(zhì)。

4.2膜分離技術(shù)

膜分離是利用半透膜作為選擇障礙層，依據(jù)膜孔徑大小達(dá)到分離目的的一門新技術(shù)，其優(yōu)點(diǎn)是操作簡便、產(chǎn)物活性高和生產(chǎn)過程無污染等。膜分離技術(shù)可分為以下幾種：反滲透、透析、電滲析、納濾、超濾、微濾等，其中反滲透和納膜過濾最有望用于分離純化功能性寡糖[32]。杜昱光等[33]建立了一種酶解殼聚糖與膜分離偶合生產(chǎn)殼寡糖的方法。陳勉等[34]采用超濾的方法制備出聚合度為6～8的殼寡糖。

4.3其它分離方法

紙色譜、紙電泳、氣相色譜、石墨化碳柱高壓液相色譜[35]、高效毛細(xì)管電泳法[36]等技術(shù)也常用于檢測和分離寡糖。隨著各項(xiàng)分離、分析檢測技術(shù)的日趨成熟，各種方法間的混合使用已成為研究寡糖的最新趨勢。

5寡糖生物活性的應(yīng)用

5.1寡糖在農(nóng)作物抗病方面的應(yīng)用

寡糖既可自身抑菌抗病，又可作為誘導(dǎo)子誘導(dǎo)植物體提高抗病性，與此同時還可作為營養(yǎng)成分調(diào)節(jié)作物生長發(fā)育[37]，從而提高農(nóng)作物的產(chǎn)量及商品性狀。許多報道顯示，寡糖類物質(zhì)對多種真菌性病害均有很好的防治作用[38～42]。徐大明等[43]發(fā)現(xiàn)殼寡糖液濃度在0.5×10-5μg/ml以內(nèi)時，對煙草花葉病毒（TMV）有明顯的鈍化作用。

5.2寡糖在飼料業(yè)中的應(yīng)用

寡糖類物質(zhì)具有調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)、促進(jìn)雙歧桿菌生長、提高動物的免疫能力及生產(chǎn)性能、避免耐藥性等功效[44，45]。憑借獨(dú)特的生物學(xué)活性，寡糖類物質(zhì)已成為新型飼料添加劑研發(fā)的熱點(diǎn)。邢廣林、李啟琳等[46，47]的研究結(jié)果顯示甘露寡糖能夠代替抗生素藥物添加到飼料中，提高肉雞抗氧化能力、成活率和日增重，降低料重比。王彬等[48]研究顯示，育肥期基礎(chǔ)日糧添加0.1%的半乳甘露寡糖，可以顯著促進(jìn)育肥豬的生長，減少育肥豬的采食量，增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。陳麗等[49]研究發(fā)現(xiàn)褐藻寡糖對嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）、白色念珠菌（Candida albicans）和鰻弧菌（Vibrio anguillarum）3種水產(chǎn)致病菌有很好的抗性，是一種高效、無毒副作用的水產(chǎn)養(yǎng)殖用飼料添加劑。

5.3寡糖在醫(yī)療保健方面的應(yīng)用

5.3.1降血糖、血脂作用寡糖降血糖、血脂的生物活性已成為研發(fā)的新方向。據(jù)報道[50，51]，地黃寡糖具有降低ALX糖尿病大鼠血糖、增加血清胰島素濃度及肝糖原含量的作用，昆布寡糖對2型糖尿病大鼠具有明顯的治療作用。張婷婷等[52]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，5～10 ku的甲殼低聚糖對油脂、脫氧膽酸鈉、?；悄懰徕c和膽固醇的吸附率分別為5.3%、90.0%、71.1%和87.5%。

5.3.2提高免疫能力寡糖可通過多種途徑提高生物體免疫力，如促進(jìn)細(xì)胞免疫和體液免疫。據(jù)報道[53，54]，甘露寡糖能夠提高大西洋鲇嗜中性粒細(xì)胞的吞噬活性，對環(huán)磷酰胺制造的免疫低下小鼠也有較好的提高免疫力功效。此外，許多寡糖還具有增強(qiáng)造血功能、抗腫瘤、抗抑郁、治療心血管疾病的功效[55～57]。

5.4寡糖在果蔬保鮮方面的應(yīng)用

寡糖類物質(zhì)在果蔬保鮮上的應(yīng)用近幾年屢見不鮮[58，59]，其主要的作用機(jī)理有以下幾點(diǎn)：①在果蔬外形成半透膜，減少蒸騰作用造成的水分損失；②起到類似于氣調(diào)包裝的效果，維持較高的CO2、較低的O2和乙烯濃度；③阻止存儲果蔬期間糖分和含酸量的下降；④降低存儲期間果實(shí)的脂氧合酶（LDX）的活力，防止細(xì)胞的脂膜過氧化及內(nèi)容物的滲漏；⑤通過提高果蔬中超氧化物歧化酶（SOD）的活力，延緩細(xì)胞衰老；⑥通過誘導(dǎo)一系列防御反應(yīng)機(jī)制阻礙病原菌侵襲，如堵塞皮孔、產(chǎn)生植保素、果實(shí)細(xì)胞壁加厚等。鄧麗莉等[60]研究發(fā)現(xiàn)1.5%殼寡糖處理可以有效延長柑桔貯藏時間。

5.5寡糖在食品加工方面的應(yīng)用

某些寡糖具有低甜度、較好的水活性、保濕性、穩(wěn)定性以及黏度等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于食品和飲料加工。李曉東等[61]研究表明添加大豆低聚糖可延長點(diǎn)心面包的保質(zhì)期。金橋等[62]研究發(fā)現(xiàn)在傳統(tǒng)酸菜腌漬過程中添加殼寡糖可以有效抑制發(fā)酵初期腐敗菌的生長并且還能提高酸菜的感官質(zhì)量。此外，寡糖類物質(zhì)應(yīng)用于乳品、新鮮奶酪及保健飲料中的報道也不少[63～65]。

6結(jié)論與展望

隨著人們對寡糖各方面性質(zhì)和生理功能的不斷認(rèn)識，寡糖的應(yīng)用已在食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域取得了一些成績。食藥用菌卓越的保健功效與其含有豐富的聚糖類物質(zhì)是分不開的。目前，食藥用菌多聚糖已開展了廣泛研究，但在寡糖類物質(zhì)上的研究，尤其是天然寡糖的提取研究還較少。因此食藥用菌寡聚糖的研究開發(fā)對進(jìn)一步提高食藥用菌的綜合開發(fā)價值有著重要意義。隨著各種自動化分析儀器、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與糖化學(xué)研究的緊密結(jié)合，寡糖類物質(zhì)的研究開發(fā)具有廣闊的前景。

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