化學(xué)滅活方法精選(九篇)

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第1篇：化學(xué)滅活方法范文

【摘要】 本研究探測在亞甲藍(lán)（methylene blue，MB）光化學(xué)法處理單份血漿過程中，加入維生素C （vitamine C，Vit C）是否影響病毒的滅活效果，是否對(duì)血漿蛋白活性成分具有保護(hù)作用。用水泡性口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV）作為指示病毒，在人血漿中加入不同濃度Vit C和終濃度為1 μmol/L的亞甲藍(lán)，應(yīng)用40 000 lx 熒光強(qiáng)度照射并于不同時(shí)間取樣檢測。以細(xì)胞病變效應(yīng)評(píng)價(jià)對(duì)VSV的滅活效果，用RT-PCR檢測病毒核酸的變化，并采用Clauss法﹑一期法和微量免疫電泳等方法對(duì)亞甲藍(lán)光化學(xué)法處理前后的血漿蛋白含量和活性進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，VSV血漿在加入240 μmol/L Vit C并經(jīng)MB-光照60分鐘后，病毒滴度下降﹥8 lgTCID50/ml； RT-PCR法也檢測不到病毒核酸；血漿中的纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ的回收率分別為83.55%和81.67%，與不加Vit C進(jìn)行亞甲藍(lán)光化學(xué)法處理結(jié)果相比有顯著提高（P＜0.05）；微量免疫電泳顯示，血漿中的大部分蛋白成分含量沒有明顯改變，免疫原性也未受到明顯影響。結(jié)論：血漿中加入一定量的Vit C不僅不影響亞甲藍(lán)光化學(xué)法對(duì)病毒的滅活效果，而且有效地保護(hù)了血漿蛋白活性成分，因此Vit C可作為亞甲藍(lán)光化學(xué)法處理血漿時(shí)的保護(hù)劑，能有效地提高單份新鮮冷凍血漿的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 病毒滅活

Protective Effect of Vitamin C on Protien Activity in Plasma

during Virus Inactivation

Abstract To determine whether addition of vitamin C (Vit C) to single-unit plasma could influence the efficacy of inactivating viruses and could maintain the activity of plasma proteins by methylene blue （MB）-light treatment.Vesicular stomatitis virus (VSV) Indiana strain was used as the indicating virus.Human plasma containing VSV was added with different concentrations of Vit C and final concentration 1 μmol/L MB and irradiated by fluorescence at an intensity of 40 000 lx，samples were collected at different times for detection.Cytopathic effect was used to test the effect of virus inactivation.A segment of the nucleic acid encoding capsid protein of VSV was amplified with RT-PCR.Some methods，such as the Clauss method，the one-stage method，microimmunoelectrophoresis，were used to investigate the changes of plasma components.The results showed that when the VSV plasma was added with 240 μmol/L Vit C and treated by MB-light irradiation for 60 min，the titer of VSV decreased by more than 8 lg TICD50/ml.Meanwhile，target segment amplification of VSV was also negative.The recovery rates of fibrinogen and coagulation factor Ⅷ (FⅧ:C ) were 83.55% and 81.67% respectively，which had significant difference comparing with the routine MB-fluorescent light treatment. Most of plasma proteins were not affected significantly.No change in immunogenicity of these proteins was observed by using microimmunoelectrophoresis. It is concluded that virus inactivation is not influenced and plasma proteins are effectively protected by Vit C. Vit C can be used as a protector and is beneficial to improving the quality of plasma subjected to MB-photodynamic treatment.

Key words vitamin C; methylene blue-light treatment; virus inactivation; plasma protein

為預(yù)防輸注血漿引起的HBV﹑HCV和HIV等病毒感染，現(xiàn)已研究出多種血漿病毒滅活方法，如有機(jī)溶劑加表面活性劑法﹑β-丙內(nèi)酯加紫外線滅活法等，雖然這些方法已較為成熟，但后處理復(fù)雜，必須通過昂貴的色譜柱除去血漿中殘留的有機(jī)物［1］。

到目前為止，對(duì)臨床單份新鮮冷凍血漿（fresh-frozen plasma，F(xiàn)FP）中病毒滅活的常用方法是亞甲藍(lán)光化學(xué)法[methylene blue（MB）-light treatment］，它在歐洲國家中應(yīng)用較為普遍［2］。該方法不但對(duì)經(jīng)血液傳播的脂包膜病毒具有滅活作用，而且對(duì)一些非脂包膜病毒如猿猴病毒40(Simian virus 40，SV40)、腺病毒也有滅活作用［3］。Mohr等［4］通過PCR技術(shù)檢測到該方法對(duì)人類細(xì)小病毒B19的核酸也有損傷作用。

亞甲藍(lán)光化學(xué)法在對(duì)病毒滅活的同時(shí)，也會(huì)對(duì)血漿蛋白的活性成分造成損傷，從而影響血漿的臨床適用范圍及應(yīng)用效果，尤其是血漿中的凝血類因子如纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)g )和凝血因子Ⅷ (coagulation factorⅧ，F(xiàn)Ⅷ )損失很大，高達(dá)25%-35%［5，6］。如何在滅活病毒的同時(shí)提高血漿的質(zhì)量呢？因此必須尋找一種既不影響病毒滅活，又能在一定程度上保護(hù)血漿蛋白活性成分的保護(hù)劑。由于MB在光照條件下產(chǎn)生自由基從而滅活病毒，同時(shí)，也損壞血漿蛋白。因此，利用生物抗氧化劑如維生素C（Vitamin C，Vit C)、α-生育酚、β-類胡蘿卜素、還原型谷胱甘肽等都可以清除體內(nèi)產(chǎn)生的氧自由基，切斷過氧化鏈反應(yīng)。王海華等［7］ 發(fā)現(xiàn)，Vit C清除羥自由基（·OH）的能力最強(qiáng)。Jaakko等［8］ 也認(rèn)為，在MB光化學(xué)法中，部分凝血因子損傷與Vit C濃度成負(fù)相關(guān)。因此，本研究選擇在血漿中加入一定量的Vit C，觀察MB光化學(xué)法對(duì)血漿中VSV（vesicular stomatitis virus，VSA）病毒的滅活效果及對(duì)血漿蛋白活性成分的影響。VSA病毒是一種具有脂包膜的RNA病毒。

材料和方法

材料

單份新鮮冷凍人血漿 （成都生物制品研究所）； 亞甲藍(lán)（Sigma公司產(chǎn)品）；維生素C（Roche公司產(chǎn)品）；RevertAidTM first strand cDNA Synthesis Kit（北京晶美生物工程有限公司產(chǎn)品）；兔抗人血清（北京邦泰生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品）；電子式緊湊型熒光燈（中山市歐朗光國際照明有限公司產(chǎn)品）；JD-3型數(shù)字式照度計(jì)(上海市嘉定學(xué)聯(lián)儀表廠產(chǎn)品)。

方法

VSV培養(yǎng)和病毒效價(jià)測定

VSV和非洲綠猴腎細(xì)胞 （Vero） 細(xì)胞均為本室保存的細(xì)胞。VSV用Vero細(xì)胞培養(yǎng)傳3代，收集培養(yǎng)上清液，用10倍連續(xù)稀釋法稀釋，加入培養(yǎng)有Vero細(xì)胞的96孔板中，每稀釋度分別接種4孔，5% CO2孵箱中培養(yǎng)3-4天，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞病變 （cytopathic effect，CPE），按Karber法計(jì)算病毒滴度。當(dāng) VSV滴度﹥8 lgTCID50/ml，置-20℃短時(shí)保存?zhèn)溆谩?/p>

MB光化學(xué)處理含Vit C的血漿

通過小量實(shí)驗(yàn)（5.0 ml）觀察MB/光化學(xué)法滅活VSV的效果。單份冷凍人血漿在27℃下水浴融解，分裝至培養(yǎng)管，每管5.0 ml，加入0.5 ml VSV，再加入0、240、480 μmol/L Vit C和終濃度為1 μmol/L MB。在4-6℃條件下充分混勻1小時(shí)，在25℃條件下經(jīng)40 000 lx熒光強(qiáng)度照射，分別在0﹑15﹑30﹑45﹑60分鐘取樣100 μl。用Karber法測定樣品中病毒滴度。將此實(shí)驗(yàn)確定的最適Vit C濃度和最適光照時(shí)間用于后述研究。

RT-PCR分析病毒核酸

取MB光化學(xué)法處理的血漿100 μl，加入1 ml TRIZOL試劑，按常規(guī)方法提取血漿總RNA，用RT-PCR分析病毒核酸。RT反應(yīng)按試劑盒說明操作，反轉(zhuǎn)錄出的cDNA直接用于PCR擴(kuò)增。根據(jù)GenBank號(hào)為J02428的VSV-Indiana株全基因組資料，選擇其核衣殼基因?yàn)閿U(kuò)增靶序列，用Primer Primier 5軟件隨機(jī)設(shè)計(jì)若干對(duì)候選引物，再根據(jù)引物設(shè)計(jì)原則進(jìn)行篩選比較，從中選出一對(duì)引物： P1 5’-ACG GCG TAC TTC CAG ATG G-3’；P2 5’-CTC GGT TCA AGA TCC AGG T-3’ 。由上海博亞生物技術(shù)有限公司合成。該對(duì)引物分別位于編碼VSV核衣殼蛋白基因的404-422位和802-820位，擴(kuò)增出的目的片段長度為417 bp。PCR反應(yīng)條件為：94℃變性45秒，55℃退火60秒，72℃延伸60秒，共31個(gè)循環(huán)。最后在72℃下延伸5分鐘。該實(shí)驗(yàn)用正常血漿（FFB組）作為陰性對(duì)照，含VSV未行病毒滅活處理的血漿為陽性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)組是用MB光化學(xué)處理含240 μmol/L Vit C的VSV血漿（FFB+Vit C+MB組），分別于光照15、30、45和60分鐘取樣檢測。

血漿生化指標(biāo)和生物學(xué)性質(zhì)測定

用全自動(dòng)生化分析儀測定不同處理組血漿中的總蛋白、白蛋白、葡萄糖、乳酸脫氫酶和膽固醇等生化指標(biāo)；用Clauss法測定纖維蛋白原含量，用一期法測定凝血因子Ⅷ活性，每樣品平行測定3次。該實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。以正常血漿為對(duì)照樣品。

血漿蛋白微量免疫電泳分析

用巴比妥緩沖液配制1% (g/ml) 瓊脂凝膠，均勻鋪板(10 cm×7.5 cm)。在距瓊脂板端2 cm處平均間距打直徑為3 mm的孔(共3孔)。并分別加入10 μl實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品，以5 V/cm端電壓電泳2小時(shí)。然后在板中2孔之間打1個(gè)5 cm長、3 mm寬的槽，加入兔抗人血漿蛋白的血清，37℃過夜。并分別用生理鹽水和蒸餾水浸泡瓊脂板以洗脫過剩的和非特異蛋白，再用0.2%氨基黑染色10分鐘，7%乙酸脫色至背景無色。觀察抗原抗體沉淀帶，判斷血漿蛋白的聚散變化。

轉(zhuǎn)貼于

結(jié)果

滅活VSV的效果

加入240 μmol/L Vit C與未加Vit C對(duì)照組相比較，MB光化學(xué)法滅活病毒動(dòng)力學(xué)曲線走勢基本一致，光照15分鐘內(nèi)病毒滴度急劇下降，到60分鐘時(shí)，滴度為0，﹥8 lg TCID50/ml VSV被完全滅活。再將VSV盲傳培養(yǎng)3代，結(jié)果都未見細(xì)胞病變。但是在含480 μmol/L Vit C的血漿中，病毒滅活的效果顯著下降，處理15分鐘時(shí)，病毒滴度下降至4.5 lg TCID50/ml，之后處于1個(gè)平臺(tái)期，到60分鐘時(shí)，滴度仍 > 4 lg TCID50/ml（圖1）。因此，在血漿中加入240 μmol/L Vit C經(jīng)MB光照60分鐘，能完全滅活VSV病毒。

光化學(xué)法處理對(duì)VSV核酸的影響

用RT-PCR檢測MB光化學(xué)法處理含Vit C血漿中的VSV衣殼蛋白基因，結(jié)果如圖2所示，陽性對(duì)照組在417 bp處出現(xiàn)明亮條帶，其片段大小與理論設(shè)計(jì)值相符（lane 1）；正常陰性對(duì)照血漿（lane 6）不能擴(kuò)增出該條帶，說明擴(kuò)增是特異性的。光照15-45分鐘時(shí)，能擴(kuò)增出417 bp（lanes 2-4）條帶，而且條帶亮度隨著時(shí)間的延長略有降低。只有照射到60分鐘時(shí)，擴(kuò)增結(jié)果為陰性（lane 5）。

血漿生化指標(biāo)和生物學(xué)性質(zhì)改變

MB光化學(xué)法處理前后血漿的總蛋白、白蛋白、膽固醇、甘油三酯、尿素氮和肌酐等含量稍有減少，天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶等酶活性也有不同程度下降，只有總膽紅素含量顯著降低了80%（表1未顯示全部指標(biāo)）。從總的趨勢來看，F(xiàn)FP+MB+Vit C組受損傷程度一般都要小于FFP+MB組。從血漿的凝血因子活性檢測結(jié)果來看，F(xiàn)FP+MB組Fg和FⅧ:C的回收率分別為68.49%﹑71.07%，而FFP+MB+Vit C組達(dá)到83.55%﹑81.67%，用方差分析的方法統(tǒng)計(jì)二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Table 1.Results of biochemical and biological tests of plasma （略）

血漿蛋白的抗原性和聚散程度

微量免疫電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)FP+MB組和FFP+MB+Vit C組與FFP組比較，血漿中白蛋白﹑球蛋白α1區(qū) ﹑α2區(qū)﹑β區(qū)和γ區(qū)抗原抗體形成的弧形沉淀線位置和形態(tài)基本相同（圖3），說明FFP+MB組和FFP+MB+Vit C組白蛋白和球蛋白分子的聚散程度和抗原活性都沒有明顯改變。

討 論

亞甲藍(lán)（MB）是吩噻嗪類化合物，在臨床上作為解毒藥用于治療氰化物與亞硝酸鹽引起的高鐵血紅蛋白血癥和抑郁癥。一次使用劑量為1-2 mg/kg［9］。MB光化學(xué)法中使用亞甲藍(lán)的劑量是1 μmol/L（320 μg/L），遠(yuǎn)低于臨床解毒用量，在這一濃度作用下，如果處理后不去除染料的話，對(duì)人體而言也是不會(huì)有毒性問題的。MB也是多靶點(diǎn)的光致敏劑，它在光照下產(chǎn)生自由基如超氧陰離子（O-2 ·）﹑過氧化氫（H2O2）﹑羥自由基（·OH）和單線態(tài)氧（1O2） 等，這些活性氧的作用機(jī)制可能是使核酸鏈上的鳥嘌呤形成8-羥鳥嘌呤（8-oxoguanine），引起脫嘌呤和核酸鏈的斷裂，也可能在蛋白質(zhì)之間，蛋白質(zhì)和核酸之間形成共價(jià)交聯(lián)；而且還可能結(jié)合病毒的脂雙層，造成病毒膜結(jié)構(gòu)的不可逆損傷［10，11］，從而導(dǎo)致病毒的滅活。

Vit C作為自由基清除劑，是血漿中最主要的水溶性抗氧化分子，本身是人體每天所必需的。Vit C清除自由基的能力在光照射過程中隨自由基大量產(chǎn)生而得到發(fā)揮，故在光照前加入Vit C能更好地清除自由基，保護(hù)抗氧化酶的活性，使自由基與抗氧化系統(tǒng)達(dá)到一個(gè)新的平衡［12］ 。本實(shí)驗(yàn)在血漿中加入240 μmol/L Vit C時(shí)，不影響MB光化學(xué)法滅活病毒的效果，這可能是在此濃度下，Vit C對(duì)自由基的淬滅和MB光化學(xué)法使自由基的產(chǎn)生達(dá)到了較為理想的平衡狀態(tài)。而當(dāng)加入480 μmol/L Vit C，滅活病毒的能力反而下降，這可能是太高劑量的Vit C能還原亞甲基藍(lán)，從而減弱光化學(xué)效應(yīng)的強(qiáng)度；也可能是高劑量Vit C清除更多數(shù)量的1O2和一些自由基，從而影響了病毒滅活效果。

實(shí)驗(yàn)中，我們也用RT-PCR法擴(kuò)增VSV編碼核衣殼蛋白404-820位堿基，根據(jù)條帶有無及亮度差別，以推斷VSV的RNA含量。結(jié)果顯示，照射VSV血漿＜45分鐘，RT-PCR能擴(kuò)增出目的條帶，但是隨著時(shí)間延長，擴(kuò)增產(chǎn)物減少。照射60分鐘時(shí)，擴(kuò)增結(jié)果為陰性，完全不能檢出VSV的核衣殼基因。這一結(jié)果與細(xì)胞病變效應(yīng)結(jié)果一致。這也說明了MB光化學(xué)法對(duì)VSV的RNA具有損傷作用，這種損傷作用隨著滅活時(shí)間的延長而加大。這也進(jìn)一步提示了，VSV感染性的有無與核衣殼基因片段擴(kuò)增產(chǎn)物檢出與否存在平行關(guān)系。通過CPE法、一期法、微量免疫電泳法等證實(shí)，加入240 μmol/L Vit C處理組與未加Vit C對(duì)照組相比較，MB光化學(xué)法滅活病毒的效果基本一致，但是前者對(duì)Fg和FⅧ:C的保護(hù)作用卻顯著加強(qiáng)，確實(shí)起到了保護(hù)血漿蛋白的作用。

目前，血漿是一種臨床需求量大且病毒感染危險(xiǎn)性較高的一種制品，解決經(jīng)輸注血漿而引起的傳染病是個(gè)棘手的問題。除了加強(qiáng)篩選獻(xiàn)血者外，對(duì)血漿進(jìn)行病毒滅活處理是最有效的方法。將Vit C運(yùn)用于MB光化學(xué)法中消毒單份人血漿，在有效滅活病毒的同時(shí)，還能保護(hù)血漿蛋白成份。但是，還需進(jìn)一步闡明Vit C保護(hù)血漿蛋白成分的時(shí)限、機(jī)理，以便MB光化學(xué)滅活病毒法規(guī)?；瘧?yīng)用于采供血行業(yè)中。

參考文獻(xiàn)

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第2篇：化學(xué)滅活方法范文

【摘要】 目的：探討不同消毒方式對(duì)口腔器械的消毒效果。方法：配制HBsAg懸液金黃色葡萄球菌液，將人工污染后的口腔器械完全浸入不同的消毒液中或放入高壓蒸汽滅菌器中進(jìn)行消毒處理，進(jìn)行無菌檢查。結(jié)果：高壓蒸汽滅菌器6min可使人工污染過的口腔器械全部達(dá)到滅菌，對(duì)HBsAg抗原性滅活達(dá)100%，高壓蒸汽滅菌器效果比化學(xué)消毒劑的消毒效果好。結(jié)論：高壓蒸汽滅菌器是口腔科消毒器械的最佳選擇。

【關(guān)鍵詞】 口腔器械；消毒；滅菌；效果評(píng)價(jià)

近年來患者在看牙時(shí)感染其他疾病的病例不斷增多，如何控制口腔治療中的交叉感染問題逐漸被人們重視。我院口腔科嚴(yán)格執(zhí)行衛(wèi)生部下發(fā)的《醫(yī)療機(jī)構(gòu)口腔診療器械消毒技術(shù)規(guī)范》，對(duì)幾種不同的口腔器械作了臨床試驗(yàn)篩選出最佳消毒方法，現(xiàn)將臨床資料分析如下。

1 材料與方法

1.1 材料 采用目前臨床中使用較多的高速手機(jī)、潔牙手柄、脫冠器、車針、探針、鑷子、擴(kuò)大針口腔器械各20件作為試驗(yàn)器械。以2%戊二醛液、氧化電位酸化水、健之素液（有效含氯為40％，其成分為三氯異尿酸及其分解物、抗干擾劑等）作為試驗(yàn)用消毒劑，高壓蒸汽滅菌器作為消毒器械。

1.2 方法 （1）將純化20mg/mL HBsAg用含10%小牛血清PBS稀釋配制HBsAg懸液200μg/mL，取金黃色葡萄球菌用磷酸鹽緩沖液制備成含菌量為107～108cfu/mL的菌懸液。（2）吸取HBsAg懸液、葡萄菌懸液分別均勻涂布于經(jīng)滅菌的手機(jī)、潔牙手柄、脫冠器、車針、探針、鑷子、擴(kuò)大針器械前端5cm長范圍，1h后進(jìn)行試驗(yàn)。（3）將人工污染后的口腔器械完全浸入不同的消毒液中，浸泡30min后取出做無菌檢查；將人工污染后的口腔器械用雙層純棉布包好后放入高壓蒸汽滅菌器中進(jìn)行消毒處理，對(duì)滅菌后的口腔器械進(jìn)行無菌檢查。

2結(jié)果

2.1 不同消毒方式對(duì)HBsAg的滅活效果見表1。

表1 不同消毒方式對(duì)HBsAg的滅活效果（略）

2.2 不同滅菌方式對(duì)金黃色葡萄球菌的滅活效果見表2。

表2不同滅菌方式對(duì)金黃色葡萄球菌的滅活效果（略）

3 討論

通過人工污染口腔器械，觀察2%戊二醛液、氧化電位酸化水、健之素液、高壓蒸汽滅菌器對(duì)HBsAg、金黃色葡萄球菌的殺滅效果，試驗(yàn)結(jié)果表明高壓蒸汽滅菌器對(duì)口腔器械上污染的HBsAg病毒的滅活效果好，能夠徹底滅活HBsAg，明顯優(yōu)于化學(xué)消毒液。由于車針、探針、鑷子、擴(kuò)大針結(jié)構(gòu)簡單，被HBsAg污染的部位能夠充分暴露于消毒液中，滅菌效果比較好，達(dá)100%，而手機(jī)、脫冠器、潔牙手柄結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，消毒液與其污染的細(xì)菌不能充分接觸，滅菌效果不夠好。高壓蒸汽滅菌器對(duì)器械上污染的金黃色葡萄球菌的殺滅效果也明顯優(yōu)于化學(xué)消毒液，能夠達(dá)到100%。因車針、探針、鑷子、擴(kuò)大針結(jié)構(gòu)簡單，被細(xì)菌污染的部位能夠充分暴露于消毒液中，滅菌效果比較好達(dá)100%；而手機(jī)、脫冠器、潔牙手柄結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，消毒液與其污染的細(xì)菌不能充分接觸，滅菌不徹底。戊二醛、氧化電位酸化水、健之素一般浸泡30min，均可達(dá)到消毒效果、徹底滅活HBsAg抗原性需要高壓蒸汽滅菌器135℃ 6min。

口腔器械在臨床使用過程中直接接觸患者的唾液、甚至血液，污染嚴(yán)重。若消毒不徹底可成為傳播疾病的重要途徑，選擇適當(dāng)?shù)南痉椒ㄊ菧p少感染的重要環(huán)節(jié)。戊二醛普遍被認(rèn)為是一種高水平消毒和滅菌劑。特別是中性和堿性戊二醛，具有較好的滅菌和防腐性。在醫(yī)院內(nèi)被廣泛應(yīng)用，但因成本較高、滅菌時(shí)間長（需浸泡10h達(dá)到滅菌）且對(duì)皮膚黏膜有較強(qiáng)的刺激作用，浸泡后的醫(yī)療器械需用滅菌蒸留水充分沖洗后才能使用，所以不便于口腔科大量器械的反復(fù)使用。氧化電位酸化水長期使用無任何不良反應(yīng)，無毒、不致癌對(duì)皮膚黏膜無刺激使用時(shí)非常安全。氧化電位酸化水在完成口腔器械滅菌功能后，同陽光、空氣有機(jī)物結(jié)合后逐漸還原為普通水無污染，能夠消毒一些結(jié)構(gòu)簡單的口腔器械[1]。健之素其成分為三氯異尿酸及其分解物、抗干擾劑等，其可殺滅細(xì)菌繁殖體、細(xì)菌芽孢、乙型肝炎等病毒、真菌等微生物。將一粒健之素藥片溶于1L水中，用水溶液進(jìn)行消毒即可。健之素適用于物體表面、環(huán)境空氣、不耐高溫的器械等消毒。高壓蒸汽滅菌器是現(xiàn)代口腔科消毒器械的常規(guī)設(shè)備，它具有操作簡單、效果可靠、穿透力強(qiáng)、不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)，它可以殺滅一切微生物包括芽孢，特別適用于口腔科有齒槽、縫隙、軸節(jié)的器械消毒。這些器械經(jīng)塑封消毒后既干燥又避免了在運(yùn)送過程中的污染。高壓蒸汽滅菌器在目前口腔器械的滅菌中是切實(shí)可行的方法之一。口腔疾病診療中使用的器械易穿破入血，它的消毒質(zhì)量對(duì)人體的健康至關(guān)重要，選擇最佳的消毒方法是口腔消毒隔離的關(guān)鍵課題，我們以自己的臨床實(shí)踐為口腔科的消毒方式提供了可靠的臨床依據(jù)。

第3篇：化學(xué)滅活方法范文

關(guān)鍵詞：針桿藻；NaClO；KMnO4；滅活；光合活性

中圖分類號(hào)：X524文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：16744764（2015）03014209

Abstract：

The inactivation efficiencies of Synedra sp. by NaClO and KMnO4 oxidation were investigated. The results indicated that in the range of 0～5 mg/L in the neutral condition， the inactivation efficiencies increased with the increase of NaClO dosage and the optimun dosage was 3 mg/L. Meanwhile NaClO showed a better degradation ability in acidic condition. The degradation ability of KMnO4 was not significant， indicating that KMnO4 had no effect on inactivation. Chlorination was effective for Synedra sp. inactivation， and however led to cell disintegration and organic matter release， thus endangering the safety of drinking water.

Key words：Synedra sp.；NaClO；KMnO4；inactivation；photosynthetic activity

近年來，中國河流、湖泊富營養(yǎng)化情況嚴(yán)重，水華頻發(fā)。作為中國重點(diǎn)水域的三峽庫區(qū)，由于三峽工程的周期運(yùn)行使得庫區(qū)的水文、水環(huán)境等較蓄水前發(fā)生了巨大的變化，庫區(qū)支流河道型的硅藻“水華”現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，嚴(yán)重影響了供水安全[13]。硅藻的控制已經(jīng)成為一個(gè)亟待解決的熱點(diǎn)問題。與湖泊型水庫的典型的藍(lán)綠藻水華不同，三峽庫區(qū)多以硅藻水華為主，尤以硅藻屬的針桿藻水華最為嚴(yán)重，約占總數(shù)的85%。從藻類的生理結(jié)構(gòu)而言，硅藻為真核藻類，其細(xì)胞、細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)（外層為二氧化硅，內(nèi)層為果膠質(zhì)，對(duì)不利環(huán)境具有一定的抵御能力）、光合作用系統(tǒng)構(gòu)成上均與原核類的藍(lán)藻有著明顯的區(qū)別。而目前關(guān)于凈水廠滅藻技術(shù)的研究以藍(lán)綠藻為主[46]，如化學(xué)藥劑法、紫外線法、超聲波法等，硅藻在滅活機(jī)制和效能上可能有別于藍(lán)藻，因此，抑制硅藻類的活性并減少其對(duì)供水安全的影響具有重要的研究價(jià)值。

在各種滅藻技術(shù)中，預(yù)氯化是應(yīng)用最廣泛的方法，它能增強(qiáng)對(duì)藻類細(xì)胞的去除[7]。目前，對(duì)藍(lán)藻細(xì)胞的氯化效果已經(jīng)有很好的研究[810]。高錳酸鉀預(yù)處理能有效控制不好的氣味和味道并抑制生物生長，它還能提高混凝效果并且控制消毒副產(chǎn)物的生成[1112]，有學(xué)者對(duì)高錳酸鉀作為預(yù)處理藥劑對(duì)藻的去除進(jìn)行研究也得到了較為不錯(cuò)的結(jié)果[13]。有研究表明，NaClO、KMnO4會(huì)對(duì)藍(lán)藻的光合作用活性產(chǎn)生負(fù)面影響[14]，導(dǎo)致藍(lán)藻細(xì)胞的死亡。在過去的研究中已經(jīng)證實(shí)，脈沖調(diào)幅（PAM）熒光測定術(shù)能很好的檢測光合作用的PSII階段，表征藍(lán)藻細(xì)胞的光合作用活性[1516]，可以用來解釋藻細(xì)胞失活的內(nèi)在機(jī)制。目前的研究主要是針對(duì)藍(lán)藻，對(duì)硅藻的去除研究很少，鑒于常用化學(xué)藥劑對(duì)藍(lán)藻的去除效果好，本研究對(duì)比考察了NaClO、KMnO4在不同投加量和不同pH條件下對(duì)硅藻的滅活效果，旨在為硅藻滅活技術(shù)研究提供一定的參考。

1材料和方法

1.1試驗(yàn)材料和試劑

硅藻屬針桿藻 （Synedra sp.，F(xiàn)ACHB1296）購自中國科學(xué)院武漢水生生物研究所，采用AGP培養(yǎng)基[17] ，在恒溫光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。恒溫光照培養(yǎng)箱運(yùn)行參數(shù)：溫度為20.0±1.0 ℃；光照強(qiáng)度為2 500 Lx；光/暗周期為14 h∶10 h。實(shí)驗(yàn)中所使用的針桿藻初始濃度約為25～35×106 cell/L。

試驗(yàn)中采用的NaClO溶液（w%：36.5%）和高錳酸鉀均為分析純。

1.2試驗(yàn)方法

試驗(yàn)采用同一培養(yǎng)階段的針桿藻，在不同的pH及NaClO/ KMnO4投加量下，分別檢測了其光合作用活性的變化，進(jìn)而表征氯化與KMnO4預(yù)氧化對(duì)針桿藻的滅活特性。大多數(shù)自然水體的pH在6.0～9.0之間，反應(yīng)藻液的pH分別采用0.1 mol/L 的鹽酸和NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié)，研究在酸性、中性、堿性（pH分別為5、7、9）水體中NaClO和KMnO4對(duì)硅藻光合活性的影響。硅藻在溫度15～25 ℃時(shí)生長較佳[18]，并且易在春季“爆發(fā)”[3]，因此，調(diào)節(jié)試驗(yàn)的反應(yīng)溫度始終維持在20.0±1.0 ℃（DC0510智能恒溫槽，寧波新芝生物科技股份有限公司）。反應(yīng)過程中，采用磁力攪拌器對(duì)藻液進(jìn)行攪拌，確保其各部分均勻。在預(yù)先設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣 ，并在樣品中加入一定量0.1 mol/L Na2SO3溶液，用于終止氧化反應(yīng)，隨即對(duì)樣品進(jìn)行分析。

1.3分析方法

針桿藻的PSII系統(tǒng)的光量子產(chǎn)量Y（反映實(shí)際光合效率），葉綠素a及快速光響應(yīng)曲線（rapid light curves，RLC）采用浮游植物分類熒光儀（PHYTOPAM，德國Walz公司）進(jìn)行測定?？焖俟忭憫?yīng)曲線的測量條件設(shè)定為：步長10 s，最大光照強(qiáng)度764 μmol?m-2?s-1。參數(shù)α、ETRmax由如下RLC 方程擬合得到[19]，見式（1）。

ETR=ETRmax×

（1-α×PAR/ETRmax）×e-β×PAR/ETRmax（1）

式中：ETR為相對(duì)電子傳遞速率；ETRmax為最大相對(duì)電子傳遞速率，反映最大光合速率；PAR為光強(qiáng)，μmol/（m2?s）；α為初始斜率，反映了光能的利用效率；試驗(yàn)中主要通過Y、α、ETRmax、葉綠素a值來反應(yīng)藻細(xì)胞的活性。pH 采用雷磁PHS3C型pH計(jì)測定。

NaClO的濃度采用哈希公司的余氯儀量進(jìn)行檢定。

2結(jié)果和討論

2.1NaClO對(duì)針桿藻的滅活特性研究

2.1.1NaClO投加量對(duì)針桿藻滅活效果的影響

當(dāng)NaClO投量分別為0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mg/L時(shí)，針桿藻光合作用活性隨時(shí)間的變化如圖1所示。從圖中可明顯看出，隨著NaClO投量（≤3 mg/L）的增加，各光合作用參數(shù)值的降解速率均隨之加快，而投量為5 mg/L對(duì)針桿藻光合作用活性的降解速率與3 mg/L的已無明顯差異。

如圖1（a）～（c）所示，當(dāng)NaClO投量為2.0 mg/L時(shí)，反應(yīng)2 min后針桿藻光能的利用效率緩?fù)桩岓蠂D緣繾喲遞速率rETRmax兩個(gè)參數(shù)值均迅速降為0，且其降解主要發(fā)生在最初的1 min內(nèi)；反應(yīng)5 min后光量子產(chǎn)量Y值也下降至0，且其下降主要在最初的2 min內(nèi)。這說明2.0 mg/L的NaClO能在短時(shí)間內(nèi)迅速抑制針桿藻的光合系統(tǒng)，抑制可能從破壞PSII系統(tǒng)電子傳遞鏈開始。

如圖1（d）所示，在NaClO的投加量小于1 mg/L條件下，60 min反應(yīng)時(shí)間內(nèi)葉綠素a無明顯降解；當(dāng)投量≥2.0 mg/L時(shí)，隨著投加量的增加，葉綠素a的降解速率逐漸增加，并且在0～10 min時(shí)間內(nèi)，葉綠素a值降解最為顯著， 30 min以后趨于平緩；并且圖中可見當(dāng)NaClO的投量為3.0和5.0 mg/L時(shí)，葉綠素a的降解效果已無明顯差異，增大投加量不能明顯提高其降解率。而郭建偉[20]的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)NaClO的投加量在3.75 mg/L時(shí)，銅綠微囊藻的葉綠素a在最初的1 min內(nèi)降解效果最為顯著。在本次試驗(yàn)中，當(dāng)NaClO的投加量為3 mg/L時(shí)30 min后葉綠素a的降解率為86.6%，而在相同投加量下的NaClO對(duì)銅綠微囊藻的葉綠素a降解率在30 min時(shí)僅為21.79% [21]，故NaClO對(duì)針桿藻的葉綠素a降解率雖然反應(yīng)初期較為緩慢，但后期的降解效果明顯好于銅綠微囊藻。歐樺瑟等[6]提出了氯化滅活銅綠微囊藻過程的三個(gè)步驟的假說，即：氧化劑滲透內(nèi)部降解細(xì)胞結(jié)構(gòu)解體。由于硅藻的細(xì)胞壁由外層二氧化硅和內(nèi)層果膠質(zhì)組成，而藍(lán)藻的細(xì)胞壁則由外層纖維素和內(nèi)層果膠質(zhì)組成，因此，細(xì)胞壁組成及結(jié)構(gòu)的差異導(dǎo)致NaClO能更快速地破壞并滲透進(jìn)入銅綠微囊藻細(xì)胞，而與其胞內(nèi)物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。另一方面，由于銅綠微囊藻屬原核生物，無核膜和葉綠體，其類囊體（膜上含有光合色素和電子傳遞鏈組分，為光合反應(yīng)中心）分散在細(xì)胞質(zhì)中；而針桿藻為真核生物，有核膜和葉綠體，其類囊體集中位于一個(gè)巨大軸生的葉綠體內(nèi)。因此，類囊體的相對(duì)集中，使得相同的反應(yīng)條件下NaClO對(duì)針桿藻中葉綠素a的破壞程度更大。

由圖1（a）和（b）比較看來，NaClO對(duì)Y、緩rETRmax值的降解主要發(fā)生在2 min內(nèi)，而對(duì)葉綠素a 的降解主要發(fā)生在10 min內(nèi)，葉綠素a的降解要明顯滯后。這可能是因?yàn)镹aClO需要依次滲透進(jìn)入硅藻細(xì)胞、葉綠體、類囊體才能與葉綠素a發(fā)生反應(yīng)或是NaClO直接與細(xì)胞解體后釋放的葉綠素a發(fā)生反應(yīng)。因此，對(duì)葉綠體的破壞要先于葉綠素a，而對(duì)葉綠體的破壞即可直接抑制針桿藻的光合系統(tǒng)。

但是，Ma等[7]試驗(yàn)表明，氯化損壞銅綠微囊藻的細(xì)胞膜，并導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)，如：毒素、K+， 葉綠素a的釋放。因此，NaClO滅活硅藻可能會(huì)造成細(xì)胞的解體，引起胞內(nèi)有機(jī)物的釋放，危及飲用水安全。

2.1.2NaClO對(duì)針桿藻的降解動(dòng)力學(xué)

由2.1.1節(jié)中可知，藻的光合活性Y值和葉綠素a值隨時(shí)間遞減，并且其降解趨勢呈現(xiàn)擬一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的特征。

圖2和表1顯示，NaClO投加量對(duì)針桿藻的降解影響是比較大的。當(dāng)NaClO投加量為0.5 mg/L時(shí)，Y值和葉綠素a值的降解速率常數(shù)k分別為0026和0.007 min-1，而投加量增加到3.0 mg/L時(shí)，k分別為0.967和0.167 min-1，影響非常大。

在逐漸減小，特別是當(dāng)投加量為5.0 mg/L時(shí)，其對(duì)葉綠素a的降解速率幾乎與3.0 mg/L投加量的相同，說明降解的程度已經(jīng)趨于飽和，因此從經(jīng)濟(jì)性的角度考慮認(rèn)為，NaClO降解針桿藻的最佳投加量為3.0 mg/L。

2.1.3NaClO在不同pH條件下對(duì)針桿藻滅活效果的影響

NaClO在不同pH條件下（pH=5、7、9）對(duì)針桿藻滅活效果的影響如圖4所示。針桿藻在不同pH條件下的滅活速率依次為：pH=5> pH=7 pH=9。這主要是因?yàn)?0℃時(shí)，當(dāng)pH=9.5時(shí)，在水溶液中NaClO以ClO-的形式存在；當(dāng)pH=7.5時(shí)，以ClO-及HClO各占50%的形式存在，而當(dāng)pH=5.0時(shí)，以HClO的形式存在。一方面，由于硅藻表面帶負(fù)電荷[23]，因此，分子態(tài)的HClO更接近硅藻表面并滲透進(jìn)入細(xì)胞。另一方面，HClO的氧化還原電位遠(yuǎn)高于離子態(tài)的ClO-。因此，NaClO在酸性條件下更能發(fā)揮對(duì)硅藻的滅活作用。

2.2KMnO4對(duì)針桿藻的滅活研究

2.2.1KMnO4投加量對(duì)針桿藻滅活效果的影響

當(dāng)KMnO4投量分別為0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、5.0 mg/L時(shí)，針桿藻光合作用活性隨時(shí)間的變化如圖5所示。從圖5（a）～（c）中可明顯看出，KMnO4對(duì)光合作用參數(shù)光量子產(chǎn)量Y值和光能利用率恢稻無明顯降解效果；而最大光合速率rETRmax值的變化趨勢與NaClO降解過程中該值的變化一致，在最初2 min內(nèi)電子傳遞速率迅速降低，說明KMnO4只抑制了電子的傳遞，減緩了針桿藻的光合系統(tǒng)PSII階段，但是并沒有從根本上對(duì)針桿藻的光合作用能力進(jìn)行破壞。

如圖5（d）所示，在KMnO4幾種投量條件下，60 min反應(yīng)時(shí)間內(nèi)葉綠素a均無明顯降解，而KMnO4氧化是優(yōu)先損壞藻細(xì)胞內(nèi)的色素 [14]，故可能是 KMnO4較難滲透進(jìn)入針桿藻的葉綠體，因此不易實(shí)現(xiàn)對(duì)葉綠素a的降解，對(duì)光合系統(tǒng)抑制不明顯。并且當(dāng)KMnO4的投加量≥1.5 mg/L時(shí)，水質(zhì)呈紅色，經(jīng)過1.5 h沒有褪色，可見較大的投加量會(huì)影響出水水質(zhì)。因此，從整體上看，在pH=7時(shí)投加KMnO4對(duì)針桿藻的活性影響不大。

而Fan等[24]研究指出，高錳酸鉀能有效降解微囊藻，并且在1～3 mg/L范圍內(nèi)能保持藻細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整[25]，明顯優(yōu)于對(duì)硅藻的滅活效果，可能是因?yàn)樗{(lán)藻和硅藻的細(xì)胞壁組成與結(jié)構(gòu)的差異。在本研究中明顯觀察到氯化對(duì)針桿藻的滅活效果要優(yōu)于高錳酸鉀對(duì)其的氧化作用，F(xiàn)an等[26]對(duì)藍(lán)藻的處理研究也報(bào)道了類似的意見。

2.2.2KMnO4在不同pH條件下對(duì)針桿藻滅活效果的影響

KMnO4在不同pH條件下（pH=5、7、9）對(duì)針桿藻滅活效果的影響如圖6所示。針桿藻在不同pH條件下的滅活速率依次為：pH=5> pH=7> pH=9。這主要是因?yàn)镵MnO4在酸性和堿性條件下其反應(yīng)式不同，在酸性條件下其標(biāo)準(zhǔn)氧化還原電位為E0=1.51 V，Mn能由+7價(jià)降低到+2價(jià)，而在中性和堿性條件下，其氧化還原電位低得多，分別只有E0=0.588 V和E0=0.564 V[27]，Mn各自只能降低到+4和+6價(jià)，說明其氧化性的順序?yàn)樗嵝?>中性>堿性。

如圖6（ac）所示，即使是pH=5時(shí)，在60 min后，其Y值也只降低到了0.4，降解率僅為37.5%。并且如圖6（d）中所示，3種pH條件下葉綠素a在60 min內(nèi)都沒有明顯的降解趨勢。因此，從整體上看，KMnO4對(duì)針桿藻沒有明顯的滅活效果。

3結(jié)論

1）NaClO對(duì)針桿藻的滅活效果顯著，其降解過程符合擬一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，投加量為3 mg/L時(shí)就能達(dá)到很好的滅活效果。但是氯化會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞分解，引起藻內(nèi)有機(jī)物的釋放，在后續(xù)試驗(yàn)研究中，可以探討胞內(nèi)有機(jī)物釋放對(duì)飲用水安全的影響。

2）酸性條件下NaClO能更好的發(fā)揮其氧化降解的作用。

3）KMnO4在投加量≤5mg/L時(shí)對(duì)針桿藻的滅活效果不明顯；更高劑量下可能會(huì)對(duì)針桿藻的滅活效果更明顯，但是會(huì)影響出水水質(zhì)。

4）酸性和堿性條件下KMnO4對(duì)針桿藻都沒有明顯的滅活效果。

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第4篇：化學(xué)滅活方法范文

【摘要】 針對(duì)18O同位素標(biāo)記反應(yīng)兩個(gè)重要影響因素——肽段分散度和胰酶滅活方法，進(jìn)行了標(biāo)記條件的改進(jìn)和滅活方法的優(yōu)化。在H218O中加入RapigestTM SF助溶劑并微波輔助加熱，使α-酪蛋白胰酶酶切肽段的標(biāo)記效率得到明顯改進(jìn)（18O/16O 峰面積比值>99%）。標(biāo)記后，對(duì)胰酶進(jìn)行還原烷基化化學(xué)修飾徹底滅活，使標(biāo)記后的肽段穩(wěn)定性顯著提高，放置6 d不發(fā)生回交反應(yīng)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)甲狀腺球蛋白酶切肽段混合物標(biāo)記后的質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：優(yōu)化的標(biāo)記方法能快速穩(wěn)定地標(biāo)記蛋白質(zhì)酶切多肽。

【關(guān)鍵詞】 18O同位素標(biāo)記；多肽；蛋白質(zhì)組

Abstract In order to optimize the18O labeling method，two key aspects，peptide dispersion and trypsin deactivation were discussed。The addition of RapigestTM SF in H218O and microwave heating enhanced labeling efficiency of α-casein digested peptides(18O/16O ratio >99%).Chemical modification with tris(2-carboxyethyl)phosphine(TCEP) and iodoacetamide(IAA) resulted in trypsin deactivated completely.No significant back-exchange from 18O to16O was observed after labeling in 6 days.The experiment result with peptide mixture from showed that the improved method could be effectively used to label protein and peptide.

Keywords 18O stable isotope labeling；Peptide；Proteome

1 引言

定量蛋白質(zhì)組學(xué)通過批量觀察正常與疾病細(xì)胞或組織在蛋白質(zhì)表達(dá)譜上的差異，從整體水平上規(guī)模化篩選和發(fā)掘與疾病相關(guān)的蛋白，為致病機(jī)理研究和臨床應(yīng)用提供重要參考信息。18O同位素標(biāo)記技術(shù)是定量蛋白質(zhì)組的一種常用技術(shù) [1~5]。蛋白質(zhì)酶切后的肽段，在胰蛋白酶的催化下，C-末端的兩個(gè)16O原子被替換成18O原子，從而使質(zhì)譜檢測產(chǎn)生4 Da的質(zhì)量差異。通過比較標(biāo)記肽段和未標(biāo)記肽段的峰面積強(qiáng)度，得到一對(duì)蛋白樣本的相對(duì)定量關(guān)系。盡管該標(biāo)記反應(yīng)具有條件溫和，標(biāo)記前后肽段的理化性質(zhì)不發(fā)生改變，能和肽段的其它分離分析方法兼容等優(yōu)點(diǎn)，但卻由于反應(yīng)條件極難控制，反應(yīng)后標(biāo)記產(chǎn)物不穩(wěn)定而影響其在實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用。

本研究基于18O同位素的標(biāo)記原理，討論了肽段分散度和胰酶滅活兩個(gè)重要因素對(duì)標(biāo)記的影響，并據(jù)此對(duì)方法進(jìn)行了優(yōu)化。相比文獻(xiàn)[6]采用的水浴孵育標(biāo)記和沸水加熱滅活技術(shù)，本方法標(biāo)記時(shí)間短，標(biāo)記效率強(qiáng)，抑制回交反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，即便對(duì)于復(fù)雜的多肽混合物體系，采用本方法也能獲得高效的標(biāo)記結(jié)果（18O/16O峰面積比值>99%）。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

4800基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀（MALDI-TOF-TOF MS，美國Applied Biosystems公司）。

α-氰基4-羥基肉桂酸(CHCA)、甲狀腺球蛋白、α-酪蛋白（美國Sigma公司)；測序級(jí)胰蛋白酶(美國 Promega公司)；97% H218O(上?；ぱ芯克?；三(2-甲酰乙基)膦鹽酸鹽（TCEP，Sigma公司）；碘乙酰胺(IAA，美國New Jersey公司)；乙腈(J.T.Bake公司)；三氟乙酸(TFA，ACROS公司)；RapigestTM SF（美國Waters公司）。其它試劑為國產(chǎn)分析純。

2.2 蛋白酶切

牛甲狀腺球蛋白和α-酪蛋白蛋白用20 mmol/L NH4HCO3溶解后，加入RapigestTM SF（終濃度 0.1%）和TCEP（終濃度 5 mmol/L），在56 ℃還原1 h，再加入IAA （終濃度25 mmol/L）， 放置暗處還原1 h。加入胰酶-底物（1∶50，w/w）的Trypsin酶切過夜。

2.3 蛋白標(biāo)記和胰酶的滅活

將酶切后的肽段溶液冷凍干燥后直接加入H218O重溶，混勻后放入微波中反應(yīng)10 min。加入TCEP（終濃度100 mmol/L）滅活，37 ℃水浴孵育1 h后，微波反應(yīng)10 min。再加入IAA（終濃度100 mmol/L），于暗處放置1 h。

2.4 質(zhì)譜分析

基質(zhì)采用CHCA。儀器控制軟件為4800 ExplorerTM software，數(shù)據(jù)處理軟件為GPS ExplorerTM software 2.0。一級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集使用MS-1 kV反射模式，加速電壓20 kV，掃描范圍m/z 700~3500，激光能量4500，每張譜圖累加1500次。馬心肌紅蛋白胰酶酶切肽段作為標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)儀器進(jìn)行外標(biāo)校正，校準(zhǔn)至誤差≤0.1 Da，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤10×10－6。

3 結(jié)果與討論

3.1 增強(qiáng)蛋白質(zhì)酶切肽段的標(biāo)記效率

蛋白質(zhì)酶切肽段18O標(biāo)記方法的原理是基于胰蛋白酶催化產(chǎn)生的兩次酶-肽段復(fù)合物水解反應(yīng)。該反應(yīng)是快速的動(dòng)態(tài)可逆反應(yīng)。因此，經(jīng)常發(fā)生標(biāo)記效率不完全和標(biāo)記肽段發(fā)生回交的情況， 有效地控制標(biāo)記和回交抑制這兩個(gè)環(huán)節(jié)是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵[7，8]。

本實(shí)驗(yàn)通過改善肽段在反應(yīng)體系中的分散程度和輔助加熱，增加反應(yīng)效率來有效地提高標(biāo)記效率。肽段在體系中的分散程度增高后，有利于肽段C端的完全暴露，增加與胰酶和H218O的接觸機(jī)會(huì)。因此，改善肽段分散程度，能推進(jìn)標(biāo)記向正反應(yīng)方向進(jìn)行。在實(shí)驗(yàn)中，加入RapigestTM SF助溶劑，能增強(qiáng)蛋白質(zhì)及多肽的溶解性，提高分散程度，有利于H218O進(jìn)行C末端羧基的交換反應(yīng)。在α-酪蛋白酶切肽段18O標(biāo)記產(chǎn)物質(zhì)譜分析結(jié)果中，因?yàn)榧尤隦apigestTM SF助溶劑，m/z 1660，1267和2316的肽段的標(biāo)記效率明顯提高（圖1A和圖1D）。而未加入助溶劑組的3個(gè)肽段則標(biāo)記不完全，仍然存在大量未標(biāo)記的16O肽段（圖1C）。

圖1 α-酪蛋白酶切肽段18O標(biāo)記前后MALDI-TOF-TOF-MS質(zhì)譜圖（略）

Fig.1 MALDI-TOF-TOF-MS spectrum of tryptic digested peptides of α-casein

A.未標(biāo)記的α-casein酶切肽段質(zhì)譜圖(Spectrum of unlabeled peptide mixture)；B.m/z 1267，1660和2316的肽段標(biāo)記前質(zhì)譜圖(Spectrum of unlabeled peptides with m/z of 1267，1660 and 2316)； C.m/z 1267，1660和2316的肽段未加RapigestTM SF，孵育過夜標(biāo)記后的質(zhì)譜圖(Spectrum of labeled peptides with m/z of 1267，1660 and 2316 without RapigestTM SF，at 37 ℃ for 24 h)； D.m/z 1267，1660和2316的肽段加入RapigestTM SF，孵育過夜標(biāo)記后的質(zhì)譜圖(Spectrum of labeled peptides with m/z of 1267，1660 and 2316 with RapigestTM SF，at 37 ℃ for 24 h)； E.質(zhì)荷比為1267，1660和2316的肽段加入RapigestTM SF，微波加熱10 min標(biāo)記的質(zhì)譜圖(Spectrum of labeled peptides with m/z of 1267，1660 and 2316 with RapigestTM SF and Microwave heating for 10 min)。

常規(guī)方法中，18O標(biāo)記需要在37 ℃水浴中孵育24 h，以達(dá)到充分反應(yīng)的目的。但即便如此，溫和的反應(yīng)條件和較長的反應(yīng)時(shí)間也難以保證標(biāo)記完全。蛋白質(zhì)酶切加上標(biāo)記所耗費(fèi)的時(shí)間超過36 h，滯后了實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程。并且由于長時(shí)間置于水浴環(huán)境，容易因?yàn)槊芊獠粐?yán)等情況引入H216O，從而導(dǎo)致標(biāo)記不完全。本實(shí)驗(yàn)采用微波加熱的方式，不僅隔絕了潮濕的環(huán)境，而且只需要10 min即可標(biāo)記完全。質(zhì)譜結(jié)果見圖1D和圖1E。與傳統(tǒng)的水浴加熱方法相比，由于微波使肽段的受熱更為快速和均勻，因此能在很短時(shí)間內(nèi)達(dá)到理想的標(biāo)記效果。

3.2 標(biāo)記肽段回交的抑制

18O標(biāo)記反應(yīng)的另一個(gè)常見問題是標(biāo)記肽段容易發(fā)生回交。由于該標(biāo)記反應(yīng)是一種可逆反應(yīng)，因此如果將18O標(biāo)記完全的肽段溶于H216O中，仍能使18O標(biāo)記肽段回復(fù)到16O標(biāo)記狀態(tài)。胰酶是造成回交的主要因素，目前文獻(xiàn)報(bào)道抑制回交的方法有酸中止法、超濾胰酶法和微波胰酶滅活法，都不能完全抑制胰酶的活性，置于H216O中仍能發(fā)生一定程度的回交[7]。本研究采用化學(xué)滅活法，通過高濃度的還原試劑和烷基化試劑，對(duì)溶液中殘留的胰酶徹底滅活。如圖2所示，胰酶滅活后，18O標(biāo)記肽段在液相色譜流動(dòng)相（2%乙腈-98%水-0.5%甲酸）中保存6 d仍沒有觀察到明顯的回交產(chǎn)物，穩(wěn)定的標(biāo)記肽段能在液相色譜中進(jìn)行后續(xù)分離分析。

圖2 18O標(biāo)記后的α-酪蛋白酶切肽段在2%乙腈-98%水-含0.5%甲酸溶液中穩(wěn)定性考察（略）

Fig.2 Stability of labeled α-casein peptides in 2% ACN-98% water-0.5% formic acid(FA) solution

A． α-酪蛋白酶切肽段標(biāo)記后MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜圖(MALDI-TOF-TOF-MS spectrum of labeled α-casein)；α-casein酶切肽段m/z 1267，1660 和2316標(biāo)記后的MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜圖(After labeling MALDI-TOF-TOF-MS spectrum of labeled α-casein peptides m/z 1267，1660 and 2316) : B.0 d；C.1 d；D.3 d；E.6 d。

3.3 復(fù)雜肽段混合物標(biāo)記結(jié)果

牛甲狀腺蛋白分子量為660 kDa。酶切后MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜能檢測到其中24條肽段。將優(yōu)化后的方法用于該蛋白質(zhì)酶切肽段的標(biāo)記，以考察方法在復(fù)雜肽段混合物中應(yīng)用的有效性和耐受性。結(jié)果如圖3所示， 本方法對(duì)于復(fù)雜肽段混合物仍能產(chǎn)生令人滿意的標(biāo)記效率。

圖3 牛甲狀腺球蛋白酶切肽段18O標(biāo)記效率圖（標(biāo)記效率計(jì)算用18O標(biāo)記肽段的單同位素質(zhì)譜峰面積與16O肽段的單同位素峰面積比值）（略）

Fig.3 Labeling efficiency of thyroglobin peptides with 18O(18O incorporation efficiency was calculated by 18O/16O ratio of the first isotopic peak area)

3．4 小結(jié)

18O標(biāo)記反應(yīng)是定量蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用最為廣泛的同位素標(biāo)記方法之一。但由于該反應(yīng)是一種動(dòng)態(tài)可逆反應(yīng)，18O交換受到多種因素影響，標(biāo)記效率和抑制回交一直是實(shí)驗(yàn)過程中的棘手問題， 目前仍不能穩(wěn)定地在多個(gè)實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用[9，10]。本研究在標(biāo)記和抑制回交兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)上對(duì)18O標(biāo)記方法進(jìn)行了優(yōu)化。通過增強(qiáng)肽段的分散度，改變輔助加熱方式，結(jié)合化學(xué)方法徹底滅活胰酶，阻斷回交反應(yīng)的發(fā)生，減少了標(biāo)記時(shí)間，標(biāo)記效率顯著提高，增強(qiáng)了標(biāo)記產(chǎn)物的耐用性，滿足差異蛋白質(zhì)組分析的需要。

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第5篇：化學(xué)滅活方法范文

動(dòng)物模型和人研究顯示，WCV口服或胃腸外免疫均具有免疫原性，也具有預(yù)防呼吸道、腸道和全身性細(xì)菌感染的效力。雖然僅百日咳WCV被普遍應(yīng)用，但其他WCV也具有普遍應(yīng)用的潛力。本文報(bào)道了WCV研制的進(jìn)展，重點(diǎn)闡述了制備更優(yōu)質(zhì)菌苗制劑的可能性。

腸道菌苗

空腸彎曲菌

空腸彎曲菌是引起胃腸炎的主要原因，估計(jì)全世界每年發(fā)病4億多例。某些地區(qū)的罹患率高達(dá)2.5萬~4萬/10萬。這種病原菌感染的主要后遺癥是Guillain-Rarré綜合征。一種傳統(tǒng)的空腸彎曲菌菌苗已在動(dòng)物中進(jìn)行試驗(yàn)，這種菌苗（福馬林和加熱共同滅活，3劑）通過口飼給予小鼠，每劑間隔2天，并以大腸桿菌不耐熱腸毒素（LT，25μg）為佐劑。免疫后4周在口服攻擊模型中評(píng)估各種劑量的含和不含佐劑菌苗（105、107或109個(gè)細(xì)菌）的效力。用活空腸彎曲菌（108個(gè)細(xì)菌，100×半數(shù)定居量）攻擊動(dòng)物，并監(jiān)測排菌情況。最大劑量菌苗和較小劑量含LT菌苗能預(yù)防定居，含或不含佐劑的菌苗均能預(yù)防細(xì)菌全身播散。兩種配方的菌苗接種小鼠后，均檢得空腸彎曲菌特異性血清IgA和IgG升高，但僅在含LT菌苗免疫小鼠中檢得腸道IgA。

這種菌苗還在恒河猴中進(jìn)行試驗(yàn)。猴子間隔14天接種2劑1010空腸彎曲菌菌苗加0.5~1000μgLT，未見不良反應(yīng)。部分動(dòng)物在6周時(shí)接受1劑加強(qiáng)免疫。不管菌苗（福馬林滅活）是否含LT，接種者對(duì)空腸彎曲菌的特異性T細(xì)胞應(yīng)答均增強(qiáng)。由于初免程序后已獲得最大應(yīng)答，因此無需加強(qiáng)免疫。免疫后7天，IgA分泌細(xì)胞在含LT菌苗接種動(dòng)物中增多。

第2種空腸彎曲菌菌苗已產(chǎn)生，目前正在進(jìn)行Ⅱ期攻擊研究評(píng)估。這種菌苗是利用能生產(chǎn)“抗原增強(qiáng)”菌苗的營養(yǎng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（NST）技術(shù)制備的。制備菌苗所用的細(xì)菌是通過專門方法培養(yǎng)的，其對(duì)INT-407和Ca-Co-2人腸上皮細(xì)胞的粘附力和侵襲力均增強(qiáng)，并在福馬林滅活前與剛果紅的結(jié)合力提高。這些表型被認(rèn)為是空腸彎曲菌和其他腸道病原菌毒力和相關(guān)抗原表達(dá)的重要標(biāo)志。為了獲得這些特征，可將細(xì)菌置于含0.1%脫氧膽酸鈉的腦心浸液肉湯中，37℃、10%CO2條件下培養(yǎng)至穩(wěn)定期。

用上述細(xì)菌制備的NST菌苗在動(dòng)物中的免疫原性強(qiáng)于傳統(tǒng)方法制備的菌苗。NST菌苗免疫鼠腸道產(chǎn)生的抗原特異性IgA大于傳統(tǒng)菌苗免疫鼠。口服含LT nST菌苗的雪貂產(chǎn)生的血清IgG水平比含佐劑傳統(tǒng)菌苗免疫雪貂高15倍。用同源泉空腸彎曲菌口飼攻擊雪貂，17%的NST菌苗免疫動(dòng)物發(fā)病，而接受傳統(tǒng)菌苗的動(dòng)物的發(fā)病率達(dá)67%。

產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌

產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌（ETEC）是造成兒童嚴(yán)重脫水性腹瀉的最主要細(xì)菌，估計(jì)每年發(fā)病4億例，死亡70萬例。ETEC是造成旅游者腹瀉的主要原因，僅美國就影響800萬人。表達(dá)定居因子CFA/Ⅰ和CFA/Ⅱ的ETEC經(jīng)福馬林滅活制成的菌苗已在人中進(jìn)行評(píng)估。間隔2周口服3劑含或不含霍亂毒素B亞單位（CTB）的菌苗（1011個(gè)細(xì)菌/劑，5個(gè)菌毛型），免疫后7天檢測外周血抗體分泌細(xì)胞（ASC）。對(duì)CFA/ cFA/Ⅰ和CFA/Ⅱ抗原產(chǎn)生應(yīng)答的細(xì)胞主要是產(chǎn)生IgA的ASC，其次是IgM-ASC，IgG-ASC極少。2劑后的免疫應(yīng)答最強(qiáng)。CTB不能增強(qiáng)對(duì)CFA/Ⅰ和CFA/Ⅱ抗原的應(yīng)答。檢得對(duì)CTB產(chǎn)生應(yīng)答的IgA-ASC，IgG-ASC，未檢得IgM-ASC，盡管對(duì)CFA的局部IgA應(yīng)答極少與血清抗體水平的升高有關(guān)。在埃及進(jìn)行的ETEC/重組CTB菌苗的研究中，74名21~45歲成人間隔2周接受2劑菌苗或安慰劑。受試者對(duì)CTB、CFA/Ⅰ、CS4、CS2和CS1的外周血IgA b細(xì)胞應(yīng)答率顯著高于對(duì)照者。對(duì)滅活WCV產(chǎn)生強(qiáng)免疫應(yīng)答的發(fā)現(xiàn)是重要的，因?yàn)榭诜兓亩ň右蜃诱T發(fā)的免疫應(yīng)答微弱，且無保護(hù)作用。對(duì)菌苗的特異性T細(xì)胞應(yīng)答也進(jìn)行了評(píng)估。從接種者分離的人外周血單個(gè)核細(xì)胞中觀察到中等度的CFA依賴性體 外增殖應(yīng)答，用定居因子體外刺激應(yīng)答細(xì)胞可產(chǎn)生高水平的γ干擾素（IFN-γ），未檢得白細(xì)胞介素2（IL-2）。應(yīng)答細(xì)胞主要是CD4+T細(xì)胞，CD8+細(xì)胞較少。高水平IFN-γ的產(chǎn)生可能具有免疫學(xué)意義。IFN-γ能刺激B細(xì)胞分泌抗體，增加腸細(xì)胞分泌組分的表達(dá)。這種類型的應(yīng)答除產(chǎn)生IgA分泌細(xì)胞外，還能介導(dǎo)對(duì)ETEC攻擊的防御作用。

受試者還接種了由大腸菌素E2處理滅活的ETEC菌苗。這種滅活方法能殺死菌苗，且不為化學(xué)或加熱處理所改變。間隔1個(gè)月口服2劑此菌苗（3×1010個(gè)細(xì)菌）能在77%的接種者中誘導(dǎo)腸道抗CFA/ⅠIgA應(yīng)答，86%的接種者產(chǎn)生增強(qiáng)的抗LT igA應(yīng)答。接種者均能抵御同源和異源菌的攻擊。

李斯德菌

單核細(xì)胞增多性李斯德桿菌是一種食物傳播的病原體，人群罹患率較低，但在易感人群中的死亡率很高。最常影響的人群是孕婦或其他免疫損害者。

加熱滅活的菌苗已在小鼠中進(jìn)行評(píng)估。觀察到的保護(hù)性免疫應(yīng)答的標(biāo)志是誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞和IFN-γ。在具有或缺少CD4+細(xì)胞的動(dòng)物中均可誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，通過有免疫力動(dòng)物CD8+細(xì)胞的導(dǎo)入可把免疫力移至無免疫力動(dòng)物。菌苗是用在胰酷胨豆胨培養(yǎng)液中培養(yǎng)過夜、經(jīng)70℃、60分鐘加熱滅活的細(xì)菌制備的。

沙門菌

在空腸彎曲菌檢測前，沙門菌是美國引起胃腸炎的主要細(xì)菌，腸炎沙門菌仍是重要的病因。傷寒桿菌是傷寒的主要病因，全世界每年發(fā)病3000萬例，死亡50多萬例。加熱滅活的鼠傷寒桿菌菌苗已在小鼠中進(jìn)行試驗(yàn)，細(xì)菌在盧氏肉湯中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，用沸水浴加熱45分鐘進(jìn)行滅活。菌苗可經(jīng)腹腔（ip）或皮內(nèi)（id）途徑給予。ip接種鼠的淋巴細(xì)胞增殖應(yīng)答強(qiáng)于id接種鼠，但在免疫后42天降至相同水平。ip接種鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生的IL-4和IL-2水平亦較高。此外，T細(xì)胞免疫印跡檢測顯示，ip接種動(dòng)物能對(duì)不同分子大小的抗原產(chǎn)生應(yīng)答，而id接種鼠主要對(duì)＜18kDa的抗原產(chǎn)生應(yīng)答。

福馬林、酚、丙酮滅活的鼠傷寒桿菌菌苗也在小鼠、大鼠和小牛中進(jìn)行試驗(yàn)，小鼠免疫丙酮滅活的WCV產(chǎn)生抗脂多糖（LPS）和全菌體（WC）抗體。小鼠免疫野型光滑株或粗糙突變株（不能產(chǎn)生O抗原）制備的菌苗所獲得的保護(hù)作用無差異。抵御致死攻擊的短期保護(hù)作用與WC凝集滴度密切相關(guān)，而長期保護(hù)作用與之無關(guān)。大鼠免疫福馬林滅活的菌苗能產(chǎn)生抗鼠傷寒桿菌抗體，且能抵御低水平的攻擊，但無胸腺大鼠卻不能，且能抵御低水平的攻擊，但無胸腺大鼠卻不能。用免疫動(dòng)物的血清被動(dòng)免疫無胸腺大鼠無效，而將免疫動(dòng)物的脾細(xì)胞移給無胸腺大鼠則產(chǎn)生保護(hù)作用。這些研究提示，對(duì)菌苗的細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答在抵御攻擊時(shí)起重要作用。

志賀菌

志賀菌引起的痢疾在全世界均有發(fā)生，估計(jì)每年發(fā)病2.5億例，死亡65萬例。幾項(xiàng)早期研究報(bào)道，一種滅活WCV能預(yù)防志賀菌病。有關(guān)這些菌苗組分的資料極少，但需口服大劑量才能奏 效。其他途徑免疫有反應(yīng)原性，且保護(hù)作用極小。在痢疾爆發(fā)地區(qū)給予人群口服免疫，并在這些現(xiàn)聲研究中比較免疫人群與未免疫人群的罹患率。雖然這些研究沒有很好的對(duì)照組，但顯然菌苗有一定的保護(hù)作用。菌苗效力不佳部分由于這些口服WCV中并不存在高水平的相關(guān)抗原和難以刺激對(duì)死菌的口服免疫應(yīng)答。

目前已制成NST福氏志賀菌菌苗，并在小鼠鼻攻擊模型中進(jìn)行試驗(yàn)。與制備傳統(tǒng)菌苗的細(xì)菌相比，制備種菌苗的NST細(xì)菌具有對(duì)人腸道細(xì)胞更強(qiáng)烈的粘附和侵襲力，能產(chǎn)生較高水平的毒力相關(guān)蛋白，且與剛果紅的結(jié)合水平提高。這種菌苗由福氏志賀菌2457T株構(gòu)成，2457T株被培養(yǎng)于含0.1%脫氧膽酸鈉的腦心浸液肉湯中，于37℃培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長早期，然后經(jīng)福馬林滅活。在凝集測定時(shí)，用NST培養(yǎng)的福氏志賀菌免疫家兔制備的兔超免疫抗血清能與同樣培養(yǎng)的宋內(nèi)志賀菌發(fā)生交叉反應(yīng)。在小鼠模型中含LT的NST菌苗與EcSf2a-2減毒活菌苗的效力相同，且比傳統(tǒng)方法制備的WCV更有效。

霍亂弧菌

霍亂是由霍亂弧菌引起的，主要特征是嚴(yán)重的脫水性腹瀉，估計(jì)每年發(fā)病700萬例，死亡10萬多例。

已在動(dòng)物和人中對(duì)霍亂WCV進(jìn)行了大量 的研究，用堆亂WCV+CTB胃腸外免疫小鼠能抵御霍亂毒素（CT，2.25~3LD50）的攻擊，這與免疫CVD103-Hg減毒活菌苗的結(jié)果相同：分別有100%和70%的小鼠能抵御2.25和3LD50的CT攻擊。小鼠口服CT能誘生產(chǎn)生IgA應(yīng)答的外周血淋巴細(xì)胞（PBL）。胃腸外免疫2劑類毒素或滅活菌苗的家兔能抵御活菌的攻擊。胃腸外和口服途徑一同給予類毒素和WCV均有協(xié)同作用和保護(hù)作用。

接種者間隔2周口服3劑菌苗（含加熱滅活的稻葉型和小川型霍亂弧菌、福馬林滅活的稻葉型和小川型ElTor弧菌各2.5×1010，有時(shí)含CTB），菌苗可被很好耐受，無副作用報(bào)告?？诜?劑菌苗能誘導(dǎo)相似的IgA和IgG抗毒素和殺弧菌抗體應(yīng)答。

用1×106個(gè)霍亂弧菌攻擊，64%的WCV+CTB接種者獲得保護(hù)，56%的WCV接種者獲得保護(hù)，而對(duì)照組則90%發(fā)病。此外，發(fā)病的接種者的癥狀減輕。在孟加拉國的一項(xiàng)WCV現(xiàn)場研究中，2年內(nèi)WCV的有效率為60%。在免疫成人中，3年中預(yù)防古典型霍亂的有效率為58%~76%，預(yù)防EITor型霍亂的有效率為48%~64%。菌苗在2~5歲兒童中的有效率為40%~56%，但預(yù)防ElTor型霍亂的效果較差。免疫接種后亦可觀察到死亡率降低。霍亂菌苗含有與其他致病性弧菌發(fā)生交叉反應(yīng)的抗原，但接種霍亂菌苗不能預(yù)防非霍亂弧菌感染，盡管接種組的罹患率較低。在CTB+霍亂弧菌全菌體（WC-BS）菌苗的現(xiàn)場試驗(yàn)中，免疫接種后能短期預(yù)防ETEC引起的腹瀉。接受WC-BS菌苗的旅游者亦能預(yù)防ETEC引起的腹瀉及ETEC與其他病原體的混合感染。

還對(duì)口服霍亂菌苗的免疫應(yīng)答進(jìn)行了評(píng)估。在瑞典志愿者中，在67%的口服單劑WC-BS菌苗者的腸灌洗液樣本中檢得升高的抗毒素IgA抗體，在93%的血清樣本和64%的唾液樣本中檢得升高的抗毒素抗體，接種者對(duì)菌苗的應(yīng)答情況與恢復(fù)期病人相仿。在孟加拉國現(xiàn)場試驗(yàn)期間，WCV和WCV+CTB接種者的殺弧菌抗體滴度升高1.3~2.1倍，免疫后7個(gè)月滴度有所回落，但保護(hù)作用可持續(xù)3年。接受1劑和3劑者的抗體滴度相近，但僅接受3劑者獲得保護(hù)。接受CTB+WCV接種者的抗毒素滴度升高2.5~4.5倍。在其他研究中，在接受WCV者中，71%的接種者的殺弧菌抗體、57%的接種者的抗LPS和外膜蛋白（OMP）抗體、43%的接種者的抗血凝素抗體滴度升高4倍以上。在接受WC-BS者中，89%的接種者的殺弧菌抗體、68%的接種者的抗LPS和OMP抗體、32%接種者的抗毒素滴度升高4倍以上。在5~64歲接種者中，WCV+CTB均能顯著提高IgG和IgA抗毒素和殺弧菌抗體滴度，而在4~12歲的接種者中僅抗毒素滴度升高?？诜臀改c外接種WC-BS菌苗均能誘生抗霍亂毒素的各類IgG和IgA1抗體，與恢復(fù)期病人產(chǎn)生的抗體相仿。反復(fù)免疫能誘生高水平的抗毒素IgG4抗體。免疫后檢測接種者的PBL顯示，口服免疫后的PBL主要產(chǎn)生IgA抗體，而胃腸外免疫后則主要產(chǎn)生IgG抗體應(yīng)答，免疫后1年，接種者中存在產(chǎn)生抗毒素的PBL，且能產(chǎn)生以IgA和IgM同型為主的回憶應(yīng)答。

霍亂弧菌滅活菌苗的制備方法可按NST空腸彎曲菌菌苗的制備方法加以改進(jìn)。將霍亂弧菌569B株培養(yǎng)于含膽汁或脫氧膽酸鈉的 蛋白胨牛肉浸膏培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長早期，即其對(duì)人腸道細(xì)胞的粘附水平較高時(shí)，提示粘附素產(chǎn)生增加。此外，應(yīng)用能構(gòu)建超表達(dá)重要毒力相關(guān)抗原的菌株來制備福馬林滅活的菌苗是極有希望的，在越南現(xiàn)場試驗(yàn)期間，用表達(dá)毒素共調(diào)節(jié)菌毛的霍亂弧菌制備WCV顯示有效。

參考文獻(xiàn)

1 Pace JL et al.Vaccine，1998;16(16):1563-1574

第6篇：化學(xué)滅活方法范文

一、夏季動(dòng)物免疫

1.免疫病種

有國家強(qiáng)制免疫的和江蘇省新增加的，如：豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、口蹄疫、高致病性禽流感、新城疫、豬鏈球菌病、羊痘、狂犬病等。

2.免疫對(duì)象

指轄區(qū)內(nèi)所有新補(bǔ)欄的或超過免疫保護(hù)期的健康畜禽。

3.免疫程序與方法

（1）高致病性禽流感a.對(duì)轄區(qū)內(nèi)所有雞全部用重組禽流感H5N1亞型，Re-4株+Re-6株二價(jià)苗，胸部肌注。對(duì)首次免疫的種（蛋）雞3～4周后再進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫。b.肉雞7～14日齡時(shí)，用重組禽流感H5N1亞型，Re-4株+Re-6株二價(jià)苗免疫一次，每只0.3ml。c.對(duì)種（蛋）鴨、種（蛋）鵝，用H5N1亞型（Re-6株）禽流感滅活苗免疫。對(duì)新生雛鴨或雛鵝14～21日齡時(shí)初免，每只0.5ml，間隔3～4周，再進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，每只1ml.d.肉鴨（鵝），7～10日齡用H5N1亞型（Re-6株）禽流感滅活苗進(jìn)行免疫，肉鴨免疫一次即可，每只0.5ml，肉鵝須間隔3～4周，再進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，每只1ml。e.對(duì)轄區(qū)內(nèi)所有雞只全部集免疫，其它禽參照雞的免疫程序進(jìn)行。

（2）牲畜口蹄疫：豬用O型口蹄疫滅活苗強(qiáng)制免疫，牛、羊用O型-亞洲I型口蹄疫二價(jià)苗強(qiáng)制免疫，對(duì)奶牛、種公牛還要使用A型口蹄疫疫苗強(qiáng)制免疫。a.豬用O型口蹄疫滅活苗，對(duì)新生仔豬以及雖已免疫但已過保護(hù)期（一般4個(gè)月左右）的豬進(jìn)行免疫，新生仔豬一般在28～35日齡時(shí)首次免疫，每頭肌注1ml，間隔1個(gè)月后進(jìn)行一次強(qiáng)化免疫。每頭肌注2ml。b.對(duì)新生羔羊、犢牛以及雖已免疫但已過保護(hù)期（一般4個(gè)月左右）的羊、牛，使用O型-亞洲I型口蹄疫二價(jià)滅活疫苗進(jìn)行免疫，對(duì)新生羔羊在28～35日齡、新生犢牛在90日齡左右進(jìn)行初免，每頭肌注1ml，間隔1個(gè)月后進(jìn)行一次強(qiáng)化免疫，每頭肌注1ml。c.對(duì)奶牛、種用公牛，在使用O型-亞I型口蹄疫二價(jià)滅活疫苗免疫的基礎(chǔ)上，間隔1個(gè)月，還需用A型口蹄疫疫苗進(jìn)行免疫，程序同O型-亞I型口蹄疫疫苗。d.對(duì)所有散養(yǎng)豬、牛、羊用相應(yīng)疫苗進(jìn)行一次免疫。

（3）豬瘟：對(duì)所有豬用豬瘟疫苗強(qiáng)制免疫。a.新生仔豬以及雖已免疫但已過免疫保護(hù)期的豬用豬瘟活疫苗免疫，對(duì)新生仔豬在25～35日齡時(shí)初免，每頭肌注1ml，60～70日齡加強(qiáng)免疫1次，每頭肌注1ml。b.所有散養(yǎng)豬進(jìn)行1次免疫。

（4）高致病性豬藍(lán)耳?。荷唐坟i、種母豬用高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗強(qiáng)制免疫，種公豬用藍(lán)耳病滅活苗強(qiáng)制免疫。a.新生仔豬斷奶前后使用弱毒苗初免，每頭肌注1ml，四個(gè)月后免疫一次，每頭肌注1ml。b.種母豬70日齡前免疫程序同商品豬，以后每次配種前使用弱毒苗加強(qiáng)免疫1次，每頭肌注1ml。c.種公豬使用滅活苗進(jìn)行免疫，斷奶后初免，初免一個(gè)月后加強(qiáng)免疫一次，以后每間隔4～6個(gè)月免疫1次。每頭每次2ml.d.散養(yǎng)豬進(jìn)行一次免疫。

（5）新城疫：對(duì)所有雞進(jìn)行新城疫全面免疫。a.規(guī)模養(yǎng)殖場（戶）自行根據(jù)免疫程序、飼養(yǎng)周期開展相應(yīng)免疫。b.所有散養(yǎng)雞用弱毒苗飲水免疫。

4.免疫接種不良反應(yīng)的預(yù)防與處理

（1）不良反應(yīng)的預(yù)防：a.免疫接種前對(duì)接種動(dòng)物進(jìn)行健康檢查；b.選正規(guī)廠家的疫苗（注射前對(duì)疫苗的質(zhì)量，保質(zhì)期進(jìn)行檢查）；c.氣候突變，暫緩接種；d.大群接種時(shí)應(yīng)先從小群試驗(yàn)；e.接種器械要清洗消毒，注射部位要準(zhǔn)確，接種劑量要適當(dāng)；f.接種后要就地觀察，防止出現(xiàn)應(yīng)激或不良反應(yīng)。

（2）不良反應(yīng)的處理：a.對(duì)正常反應(yīng)不予處理；b.對(duì)局部出現(xiàn)炎癥反應(yīng)應(yīng)消炎、消腫、止癢等；c.對(duì)血管、肌肉受損傷病例應(yīng)采用理療、藥療和手術(shù)處理等方法；d.對(duì)嚴(yán)重反應(yīng)的病例要進(jìn)行抗休克、抗過敏、抗炎癥?？垢腥?、強(qiáng)心補(bǔ)液、鎮(zhèn)靜解痙等急救措施，同時(shí)弄清反應(yīng)基本情況，如癥狀、病變、反應(yīng)面、數(shù)量、反應(yīng)率、死亡率疫苗種類、廠家、批號(hào)等并向上級(jí)報(bào)告，對(duì)合并癥病例用抗生素治療。

5.加強(qiáng)防疫監(jiān)督檢查

實(shí)施強(qiáng)制免疫的豬牛羊使用主管部門統(tǒng)一采購的疫苗，免疫密度、耳標(biāo)佩戴率、信息上傳率均達(dá)100%，建立免疫檔案，實(shí)施可追溯管理；對(duì)拒不實(shí)施強(qiáng)制免疫的畜主要進(jìn)行查處；免疫效果監(jiān)測實(shí)行送檢與隨機(jī)抽檢結(jié)合，及時(shí)查漏補(bǔ)缺，確保免疫效果。

二、夏季消毒滅源

1.消毒滅源的對(duì)象與方法

采用統(tǒng)一藥品、統(tǒng)一時(shí)間、統(tǒng)一指導(dǎo)，按規(guī)模場、散養(yǎng)戶不同飼養(yǎng)方式選擇不同的消毒方法（定期消毒與集中消毒相結(jié)合），對(duì)規(guī)模場、散養(yǎng)戶畜禽圈舍、用具、環(huán)境、定點(diǎn)屠宰場、農(nóng)貿(mào)市場先清掃，沖洗再噴霧消毒；其方法有機(jī)械消毒、煮沸消毒、陽光、紫外線消毒、化學(xué)消毒（包括刷洗、浸泡、噴灑或噴霧、熏蒸）等。

2.消毒藥選擇與配制

根據(jù)消毒實(shí)際，嚴(yán)格按消毒對(duì)象、目的選擇消毒藥物，宜選廣譜、高效、低毒、價(jià)廉，易于操作的，如：生石灰、漂白粉、百毒殺、二氯異氰尿酸鈉、過氧乙酸等。根據(jù)不同的消毒對(duì)象，按消毒藥使用說明書配制不同濃度。

3.消毒注意事項(xiàng)

一是根據(jù)不同的消毒對(duì)象選擇合適的消毒方法和消毒劑，消毒劑必須符合國家標(biāo)準(zhǔn)，在有效期內(nèi)，二是消毒藥與消毒對(duì)象有足夠的接觸時(shí)間，三是消毒場所要清掃沖洗，四是消毒液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，五是選擇兩種或兩種以上的消毒藥交替使用。

三、小結(jié)

1.夏季免疫能提高動(dòng)物免疫抗體水平，防止因高溫季節(jié)動(dòng)物出現(xiàn)免疫空檔期。

2.夏季免疫是對(duì)春、秋防疫的有效銜接，使動(dòng)物處于高免狀態(tài)，免遭外來疫病的侵襲。

第7篇：化學(xué)滅活方法范文

關(guān)鍵詞：生活飲用水；消毒技術(shù)；消毒副產(chǎn)物；聯(lián)合消毒；飲用水質(zhì)量 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類號(hào)：R123 文章編號(hào)：1009-2374（2016）26-0043-03 DOI：10.13535/ki.11-4406/n.2016.26.021

清潔飲用水是人類生活的一個(gè)根本要求，可是隨著人類人口不斷大量的增長，人類對(duì)水資源的需求量也開始不斷擴(kuò)增，導(dǎo)致生活飲用水日益短缺這個(gè)問題漸漸變得十分嚴(yán)峻起來。采用安全、高效的飲用水消毒方法是維護(hù)人類健康的根本前提。未來生活飲用水消毒技術(shù)的發(fā)展既要保證對(duì)飲用水的消毒效果，也應(yīng)該最大化減少化學(xué)藥劑的使用與投放，最大程度使得有害消毒副產(chǎn)物的產(chǎn)生得到減少。傳統(tǒng)的飲用水消毒是氯消毒，始于19世紀(jì)初。它可以十分有效地殺滅水體中病原微生物，能夠使人們感染傷寒、霍亂等水傳播疾病的概率最大程度降低?？墒菑?0世紀(jì)70年代起，由于氯消毒過程中產(chǎn)生的三鹵甲烷（THMs）消毒副產(chǎn)物不斷被檢出，THMs有致癌作用，對(duì)人體的健康影響非常大，因此氯消毒的安全性受到了質(zhì)疑。同時(shí)氯消毒對(duì)隱孢子蟲、賈第鞭毛蟲等病原體是低效甚至無效的，于是其他消毒技術(shù)開始逐漸得到了應(yīng)用和發(fā)展，主要包括化學(xué)消毒法、物理消毒法以及聯(lián)合消毒法。

1 化學(xué)劑消毒法

1.1 ClO2消毒

由于ClO2具有很強(qiáng)的氧化性，所以它對(duì)微生物的細(xì)胞壁有著十分強(qiáng)的吸附和穿透能力，能夠非常有效地將細(xì)胞內(nèi)含硫基的酶給氧化，十分迅速地控制微生物蛋白質(zhì)的合成進(jìn)而阻礙微生物的生長繁殖，從而完成消毒殺菌的目的。近些年來，研究發(fā)現(xiàn)ClO2不僅能殺滅水中病毒、鐵細(xì)菌、細(xì)菌、硫酸鹽還原菌、藻類、真菌及浮游生物甚至包括抗逆性最強(qiáng)的芽孢，而且對(duì)新國標(biāo)中的“兩蟲”（隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲）也可以達(dá)到滿意的滅活效果。自20世紀(jì)90年代以來，我國開始向美國自來水廠學(xué)習(xí)，在一些中小型自來水廠中應(yīng)用ClO2來對(duì)飲用水進(jìn)行滅菌殺毒處理。如果和氯消毒技術(shù)做比較的話，使用ClO2來消毒生活飲用水的時(shí)候，即使不太可能會(huì)產(chǎn)生鹵乙酸、三鹵甲烷等這種有強(qiáng)致癌作用的消毒副產(chǎn)物，但還是會(huì)生成氯酸鹽、亞氯酸鹽等這種無機(jī)的并且有毒有害的消毒副產(chǎn)物。另外，ClO2不宜在水中保存和運(yùn)輸，一般采用現(xiàn)場制備的方式，對(duì)某些中小型水廠較為合適，但是對(duì)某些大型的水廠，因?yàn)槿藶橥都覥lO2的量很大，那么在現(xiàn)場制備ClO2的產(chǎn)量也隨之相應(yīng)不斷增大，所以使用這種方式進(jìn)行消毒就顯得非常不合適?？傊覀儾粩嗟貙ふ褻lO2既經(jīng)濟(jì)且適用的制備方法，它已經(jīng)成為了相關(guān)研究的熱點(diǎn)。

1.2 氯胺消毒

氯胺作為一種新型飲水消毒劑，其優(yōu)點(diǎn)在于產(chǎn)生少量的三鹵甲烷以及能維持很長時(shí)間的消毒效果。由于單獨(dú)使用氯胺的消毒效果較差，往往采用聯(lián)合應(yīng)用將氯胺作為末端消毒劑來使用到生活飲用水的殺毒滅菌中來。最主要的原因還是相對(duì)于飲用水中的游離的氯，氯胺在水體中呈現(xiàn)出更加良好的穩(wěn)定性，可以在飲用水體中保存停留很長的一段時(shí)間，使得水體中能夠保持一定量的余氯，這樣能夠防止水體再次受到污染。由于氯胺在消毒飲水方面有很多可取之處，因此在我國不少水廠已經(jīng)開始采用氯胺消毒工藝。

1.3 臭氧消毒

O3一直是屬于非常高效的消毒劑的范疇，對(duì)各種各樣的微生物都能夠十分有效地殺死滅活，O3氣體或者將它溶在水溶液中都會(huì)產(chǎn)生十分強(qiáng)大的殺滅許多微生物的作用，并且相對(duì)于有效氯而言，臭氧殺死多種微生物的速度要比其他消毒劑快且快數(shù)百倍。臭氧正是靠著它強(qiáng)大的氧化能力，不僅能夠殺滅生活飲用水體中絕大多數(shù)的細(xì)菌、病毒、包囊、芽孢，還能夠破壞大部分微生物內(nèi)部的有機(jī)物，同時(shí)臭氧還可以起到去臭、脫色作用。臭氧的消毒效果比氯消毒好太多了，如果控制水溫越低，臭氧的消毒效果就會(huì)越來越好。

臭氧消毒的不足之處在于：第一，O3氣體的穩(wěn)定性太差、水溶性十分小，對(duì)生活飲用水充分徹底地消毒后，無法在水體中保持余留量，并沒有持續(xù)的殺菌滅毒效果；第二，臭氧被用作在生活飲用水中的消毒劑，雖然在殺菌滅毒過程中不會(huì)生成氯化消毒副產(chǎn)物，但有很大的可能性它會(huì)在水體中生成溴酸鹽、醛類和過氧化物等一類具有高度潛在危險(xiǎn)和毒性的副產(chǎn)物，其中溴酸鹽被國際癌癥研究機(jī)構(gòu)定位2B級(jí)潛在致癌物。臭氧在殺滅生活飲用水菌體的過程中，影響它產(chǎn)生和生產(chǎn)溴酸鹽的因素復(fù)雜得簡直令人不可思議，它不僅受到生活飲用水體中溴化物含量的重大影響，還會(huì)受到O3氣體的濃度、接觸生活飲用水體的時(shí)間、生活飲用水體的ORP電位等很多因素的影響，因此必須有效地控制溴酸鹽的產(chǎn)生。

1.4 NaClO消毒

NaClO一般情況下是可以直接將其投加到生活飲用水中進(jìn)行殺毒滅菌的，這樣做的目的是既可以避免Cl2投加到生活飲用水中所出現(xiàn)的審批問題，又可以避免投加二氧化氯到生活飲用水中時(shí)不可避免所帶來的消防安全問題，因此次氯酸鈉殺毒滅菌在某種程度上具有投加非常方便、審批非常簡單、較低的安全要求等許許多多的優(yōu)點(diǎn)，從這方面看，次氯酸鈉相對(duì)其他消毒劑而言，算是很好的生活飲用水消毒替代方式?？墒荖aClO溶液也存在明顯的不穩(wěn)定性，隨著放置空氣中時(shí)間的延長，其消毒效果會(huì)越來越差。為了盡量解決NaClO的不穩(wěn)定、易降解的特點(diǎn)，建議在現(xiàn)場制備使用此種方式時(shí)解決此問題。同時(shí)，NaClO如果和液氯方式進(jìn)行對(duì)比，由于次氯酸鈉的消毒滅菌原理與液氯殺毒滅菌原理基本相同，因此在某種意義上，次氯酸鈉殺毒滅菌也會(huì)存在對(duì)“兩蟲”（包括隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲）等殺毒效果非常差勁以及會(huì)產(chǎn)生消毒副產(chǎn)物的問題，所以需要將其和其他消毒方法（紫外線等）進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用，以達(dá)到更好的消毒效果。

1.5 高鐵酸鹽消毒

高鐵酸鹽作為一種綠色、無機(jī)、多功能強(qiáng)氧化劑越來越受到國內(nèi)外普遍關(guān)注。它具有氧化、吸附、絮凝、殺菌、消毒等多功能性質(zhì)，操作方便且殺菌力強(qiáng)。高鐵酸鹽在氧化消毒過程中產(chǎn)生的還原產(chǎn)物Fe（OH）3不僅安全性較高，而且它作為助凝劑也是十分良好的。高鐵酸鹽在去除有害細(xì)菌和病毒的同時(shí)可有效去除水中的懸浮物及重金屬離子，因此高鐵酸鹽這種安全無任何毒副作用的多功能高效水處理藥劑，在飲用水殺菌消毒領(lǐng)域中具有重要的研究開發(fā)和應(yīng)用前景。

2 物理消毒方法

2.1 紫外線（UV）消毒

將紫外線消毒應(yīng)用于生活飲用水殺毒滅菌，具有消毒十分徹底、快速、便捷并且不會(huì)污染生活飲用水質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)，最重要的是操作起來十分簡便、使用和維護(hù)的費(fèi)用很低等。紫外線殺菌的原理是利用紫外線光量子的能量使與之接觸的微生物體的核酸結(jié)構(gòu)受到破壞，微生物最終失去復(fù)制以及繁殖的能力。紫外線消毒是一種比較環(huán)保的技術(shù)，具有無需化學(xué)藥劑添加、無消毒副產(chǎn)物形成以及成本經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，在水質(zhì)凈化領(lǐng)域中的使用方面是非常廣泛且普遍的。

雖然對(duì)絕大多數(shù)的病原體來說，紫外線的消毒滅菌的效果非常好，但是到現(xiàn)在為止，市場上普遍的紫外消毒滅菌的系統(tǒng)都是為燈管浸沒式，這種燈管存在下列非常普遍的問題：更換紫外燈管十分困難，石英的管壁需要經(jīng)常的維護(hù)和清洗，紫外線利用的效率非常低，同時(shí)能耗很高，如果將紫外線直接浸沒在水中，紫外燈中的汞不僅對(duì)環(huán)境，而且對(duì)人體的健康都存在很大潛在的威脅，因此一種高效且非?？煽康墓饫w傳導(dǎo)紫外光消毒技術(shù)就出現(xiàn)在市場上。該技術(shù)的基本原理就是利用光學(xué)聚焦系統(tǒng)將光源產(chǎn)生的紫外光匯聚于一點(diǎn)，然后通過石英光纖再將其導(dǎo)入水中，并在光纖散光點(diǎn)處均勻地透射，從而滅活水中生存的微生物。

紫外線消毒滅菌的最大的缺點(diǎn)就是無法具有可持續(xù)性，不能絕對(duì)保證輸送和配送水管網(wǎng)內(nèi)各類微生物的滅活穩(wěn)定性，所以通常需要聯(lián)合常規(guī)消毒方式實(shí)現(xiàn)持續(xù)消毒效果。此外，生活飲用水體中的懸浮顆粒物、有機(jī)物COD及氨氮（NH3-N）都會(huì)在紫外線的傳播過程中帶來許許多多的干擾，進(jìn)而十分影響消毒滅菌的效果，所以紫外線處理水要求水體具備很高的透明度。

2.2 超聲波消毒

超聲波輻射技術(shù)是一項(xiàng)非常好的水處理技術(shù)，它具有很好的發(fā)展前景，它在浮游生物的滅活、過濾膜及陶瓷濾芯的清洗等方面已有應(yīng)用。從相關(guān)文獻(xiàn)得知，高頻率超聲的主要作用就是將水體中的菌膠團(tuán)解聚，然而對(duì)于細(xì)菌的滅活的效用并不是太好，低頻率的超聲波才真正地具備有消毒滅菌的效果，可是如果只想單純地依靠超聲波消毒，我們又會(huì)面臨可能出現(xiàn)的能耗較高的問題。因此往往將超聲波與紫外線聯(lián)合應(yīng)用進(jìn)行消毒，這樣不僅比單純的超聲波或紫外線消毒工藝節(jié)約能耗，而且能產(chǎn)生很好消毒效果。

2.3 TiO2光催化消毒技術(shù)

TiO2光催化反應(yīng)的基本原理就是利用具有強(qiáng)氧化性的活性自由基（羥基自由基）參與到生活飲用水體中的各種化學(xué)反應(yīng)，由于羥基自由基具有很強(qiáng)的氧化性能，能夠?qū)⒔^大多數(shù)水體中的有機(jī)物氧化分解并且最終將其礦化為水和二氧化碳等無機(jī)小分子。此外，TiO2光催化消毒技術(shù)具有很大的殺菌消毒的功效，TiO2作為催化劑本身不會(huì)溶解于水，沒有毒性，且不會(huì)對(duì)生活飲用水體產(chǎn)生污染，非常適用在飲用水方面進(jìn)行消毒滅菌。近些年，正是由于TiO2光催化消毒技術(shù)在其性能上具有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢，其光催化殺毒滅菌機(jī)理及TiO2在生活飲用水消毒滅菌領(lǐng)域中的廣泛應(yīng)用，所以TiO2光催化消毒技術(shù)逐漸成為各國科學(xué)家的研究熱點(diǎn)。

2.4 膜消毒

膜技術(shù)是20世紀(jì)60年代后迅速崛起的一門分離技術(shù)。它去除水中雜質(zhì)的主要原理是機(jī)械篩分，膜技術(shù)應(yīng)用于飲水消毒具有水質(zhì)優(yōu)良、操作簡單、占地小等優(yōu)點(diǎn)，已成為人們提高水質(zhì)的一項(xiàng)重要措施。在國外，膜技術(shù)用于飲用水消毒的研究十分多且復(fù)雜，用膜對(duì)病毒、致病細(xì)菌以及賈第蟲和隱孢子蟲這“兩蟲”消毒滅菌，能夠有很好的去除效果。

3 聯(lián)合消毒方式

3.1 “紫外線+氯（氯胺）”聯(lián)合消毒

在飲用水處理中，紫外線消毒對(duì)微生物滅活特性與氯（氯胺）消毒相比較是正好相反的。其中紫外線對(duì)原生動(dòng)物和細(xì)菌的滅活效果最好，而氯消毒則是對(duì)大多數(shù)的病毒和細(xì)菌滅活效果最好，可是對(duì)“兩蟲”（賈第蟲和隱孢子蟲）效果較差。因此采用“液氯和紫外線（氯胺）”聯(lián)合的消毒滅菌技術(shù)，不僅可以滿足實(shí)現(xiàn)新國標(biāo)里面對(duì)病原微生物指標(biāo)控制的要求，還可以為生活飲用水提供很多級(jí)別的滅菌消毒的安全保障。

在實(shí)際工程中，由于紫外線對(duì)各類水體中微生物滅活效率很高，因此我們通常利用這一特點(diǎn)，在最開始的凈水工藝流程中，我們就是采用紫外線消毒滅菌來作為消毒的主工藝，必須充分保證對(duì)微生物的滅活效果，隨之僅使用少量余氯就可以非常有效抑制微生物的復(fù)活，不僅可有效減少后續(xù)氯的投加使用量，從而減少消毒副產(chǎn)物的產(chǎn)生，因此紫外線與氯（氯胺）消毒工藝相結(jié)合，將會(huì)對(duì)處理飲用水具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。

3.2 紫外線+超聲波+氯（氯胺）聯(lián)合消毒

超聲波和紫外線聯(lián)合起來對(duì)水體進(jìn)行消毒的效果在某種意義上肯定會(huì)優(yōu)于這二者單獨(dú)作用于生活飲用水中的消毒效果，如果單獨(dú)采用超聲波進(jìn)行預(yù)處理，我們可以將水中比較大粒徑的懸浮顆粒和菌膠團(tuán)進(jìn)行徹底擊碎、完全分散。我們?cè)谧贤饩€消毒的過程中，紫外線也將能夠更容易接觸到各類微生物及懸浮顆粒，從而可以不斷加強(qiáng)紫外線的殺菌滅菌的效果，提高紫外線的消毒效率。如果我們采用超聲波對(duì)水體進(jìn)行一定程度上的預(yù)處理，我們只會(huì)需要很短的輻射時(shí)間就能把紫外線的消除效率進(jìn)行顯著地提高，同時(shí)所用的能耗并沒有增加太多，因此我們將超聲波與紫外線進(jìn)行聯(lián)合作用。這樣我們不僅能夠減少末端投加消毒劑（液氯或氯胺）所產(chǎn)生消毒副產(chǎn)物帶來的影響，同時(shí)一定程度上還可以抑制水體中微生物的復(fù)生現(xiàn)象，從而滿足新國標(biāo)中對(duì)病原微生物指標(biāo)嚴(yán)格控制的要求。這種殺菌消毒技術(shù)在國內(nèi)某些企業(yè)中正在被研究應(yīng)用，并且已經(jīng)取得了初步的研究

成果。

除了以上消毒技術(shù)，還有高級(jí)氧化技術(shù)、水力空化、銀法+紫外、磁化法、靜電法、微電解法等新型消毒技術(shù)，這些新型消毒技術(shù)的研究大多只局限于理論研究階段，缺乏規(guī)?；膽?yīng)用實(shí)驗(yàn)研究。由于飲用水消毒關(guān)系到人們的健康，開發(fā)發(fā)展新的消毒技術(shù)還需要長期的應(yīng)用研究。

4 展望

今天我們身處全世界在進(jìn)行城市化這個(gè)龐大的背景之下，因?yàn)槲覀內(nèi)祟惉F(xiàn)在十分關(guān)注環(huán)境與安全方面所暴露出來的問題，當(dāng)人們面臨用消毒劑處理飲用水問題時(shí)，人們不僅對(duì)化學(xué)消毒劑的安全使用提出了一定的要求，而且對(duì)政府監(jiān)督也提出了更高的要求。由于當(dāng)前我國飲用水的水源水質(zhì)相對(duì)于國外的飲用水質(zhì)來說，不僅更為復(fù)雜，而且處理起來更加困難，最重要的是和國情與發(fā)達(dá)國家相比，現(xiàn)在我國的經(jīng)濟(jì)狀況和他們有著非常龐大的差距，這也導(dǎo)致我國在供水方面和排水等方面與發(fā)達(dá)國家的水平存在著相當(dāng)大的差距。與此同時(shí)，國內(nèi)目前還沒有研究出一種能夠完全滿足人們要求的消毒殺菌劑，我們只能按照消毒的對(duì)象和消毒目的來進(jìn)一步確認(rèn)選擇不僅經(jīng)濟(jì)且適用的消毒劑。每一種消毒技術(shù)都存在優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，我們知道傳統(tǒng)的消毒工藝需要改進(jìn)，那么生活飲用水聯(lián)合消毒的工藝就值得大量推廣和應(yīng)用，如紫外線-氯（氯胺）消毒工藝等。在實(shí)際的生產(chǎn)生活中，應(yīng)該花大力去開發(fā)新型的消毒技術(shù)以及物美價(jià)廉性價(jià)比更高的新型消毒劑，之后再結(jié)合我們國家的飲用水水源水質(zhì)，還有最重要的經(jīng)濟(jì)狀況也必須考慮其中，第一步就是將消毒工藝進(jìn)行不斷地優(yōu)化，在保證水的質(zhì)量的前提下，我們應(yīng)該盡量降低和減少最后一道消毒工藝的處理污染負(fù)荷，切實(shí)地縮小和降低運(yùn)行成本，以便獲得最好的處理效果，這樣我們就能夠得到最優(yōu)質(zhì)的飲用水。

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第8篇：化學(xué)滅活方法范文

[關(guān)鍵詞]血液質(zhì)量；安全隱患；防范

血液質(zhì)量是血站系統(tǒng)的生命，是輸血事業(yè)永恒的主題。廣義上的質(zhì)量除產(chǎn)品質(zhì)量外還應(yīng)包含過程質(zhì)量、服務(wù)質(zhì)量和工作質(zhì)量。然而，輸血是一項(xiàng)包括產(chǎn)品質(zhì)量及供、受血者安全與服務(wù)的復(fù)雜過程，它涉及從獻(xiàn)血者血管到受血者血管的所有環(huán)節(jié)，其中任何一環(huán)節(jié)發(fā)生質(zhì)量差錯(cuò)都將對(duì)病人造成嚴(yán)重甚至致命的后果。因此，必須將輸血風(fēng)險(xiǎn)最小化，主動(dòng)防范和加強(qiáng)預(yù)防來全面提高質(zhì)量意識(shí)。

1血液來源

血液制品是治病救人的特殊醫(yī)療用品，在其替代品尚未出現(xiàn)之前，血液唯一的來源是健康人體，健康的獻(xiàn)血者是保證臨床用血安全的首要環(huán)節(jié)。早在1997年世界衛(wèi)生組織便推出了完全自愿性無償獻(xiàn)血的政策，中國在促進(jìn)無償獻(xiàn)血方面取得了很大進(jìn)展，據(jù)世界衛(wèi)生組織最新數(shù)據(jù)顯示，從1998～2005年，我國完全自愿性無償獻(xiàn)血者的比例已從22％上升到94.5％。雖然完全自愿性無償獻(xiàn)血者通常不會(huì)隱瞞自己的病情和病史，有利于保障血液供應(yīng)的安全，但實(shí)際工作中也不免出現(xiàn)一些漏洞，如冒名頂替、獻(xiàn)血間隔時(shí)間不夠或體檢不合格者再次獻(xiàn)血等，給輸血安全帶來隱患。計(jì)算機(jī)指紋識(shí)別系統(tǒng)將遏制不符合獻(xiàn)血要求者無償獻(xiàn)血，杜絕血液質(zhì)量隱患，為確保血液安全提供了科學(xué)保障。

2血液制品

有文獻(xiàn)報(bào)道，獻(xiàn)血者中有15%的HCV可能處于窗口期而不易被發(fā)現(xiàn)［1］，這是因?yàn)樵诓《靖腥镜某跗?，人體尚未產(chǎn)生相應(yīng)抗體或相應(yīng)抗體水平甚低（窗口期感染），以及受實(shí)驗(yàn)方法、試劑的敏感性和準(zhǔn)確性限制，人為差錯(cuò)等方面的影響，使一些低水平的肝炎、HIV攜帶者或抗體效價(jià)低于檢測閾值的早期傳染病獻(xiàn)血者的血液難以檢出。目前，世界上任何先進(jìn)的檢測設(shè)備和試劑，都不可能完全避免輸血傳播病毒的危險(xiǎn)。

2.1白細(xì)胞濾除現(xiàn)代輸血學(xué)研究表明，輸血不良反應(yīng)中有90%以上是與輸入異體血液的白細(xì)胞相關(guān)。白細(xì)胞導(dǎo)致的輸血反應(yīng)主要有非溶血性發(fā)熱反應(yīng)（FNHTR）、HLA同種免疫引起的血小板輸注無效、輸血相關(guān)移植物抗宿主?。═A-GVHD）等［2］，同時(shí)，白細(xì)胞還是巨細(xì)胞病毒（MCV）、人類T淋巴細(xì)胞白血病病毒（HTLV-Ⅰ/Ⅱ）和人類免疫缺陷病毒（HIV）等嗜白細(xì)胞病毒的載體，因此，血液中非治療性成分―白細(xì)胞就成為一種“污染物質(zhì)”，我們?cè)趦?chǔ)存血液及血液成分前將白細(xì)胞濾除，將減少病毒經(jīng)血液傳播的機(jī)會(huì)，使患者避免許多不良反應(yīng)的發(fā)生，對(duì)輸血安全及臨床治療都具有十分重要的意義。

2.2病毒滅活血漿病毒滅活的方法有很多，其中亞甲藍(lán)+可見光照射（MB-P）破壞病毒核酸及病毒包膜法，達(dá)到了國際公認(rèn)的血漿病毒滅活有效性指標(biāo)，進(jìn)行了病毒滅活的血漿總蛋白回收率平均達(dá)90%，各項(xiàng)凝血因子活性保有率均＞70%，其中凝血因子Ⅷ平均保有率＞70%。既保證了血漿蛋白的免疫原性，又減少了血源性疾病感染的機(jī)會(huì)，降低了輸血風(fēng)險(xiǎn)。

2.3射線輻照預(yù)防輸血后移植物抗宿主病的最有效地方法是血液輻照。γ射線輻照能有效地滅活血液中免疫活性淋巴細(xì)胞的增殖能力。實(shí)驗(yàn)證明，白細(xì)胞濾除與γ射線輻照聯(lián)合應(yīng)用是預(yù)防TA－GVHD最有效、可靠的方法。

美國、日本等許多發(fā)達(dá)國家，早在10年前就已應(yīng)用白細(xì)胞濾除技術(shù)，目前已有95%以上的血液及血液制品進(jìn)行濾白和輻照處理；病毒滅活血漿在歐共體國家也已廣泛得到應(yīng)用。

3臨床用血

輸血實(shí)際上是一個(gè)組織移植過程，同種異體移植會(huì)產(chǎn)生一系列的免疫反應(yīng)，臨床科學(xué)合理用血是保障血液安全的又一重要環(huán)節(jié)?，F(xiàn)代輸血管理模式已由傳統(tǒng)的業(yè)務(wù)單一的血庫，轉(zhuǎn)變?yōu)檩斞芾砦瘑T會(huì)指導(dǎo)和監(jiān)督下開展多項(xiàng)診療業(yè)務(wù)的專業(yè)科室。

成分輸血是當(dāng)前輸血技術(shù)發(fā)展的總趨勢，已作為衡量醫(yī)療技術(shù)水平和現(xiàn)代輸血醫(yī)學(xué)的標(biāo)志之一。成分血是用物理或化學(xué)方法經(jīng)提純得到的高純度、高效價(jià)、容量小的血液制品，由于全血成分復(fù)雜，目前尚不能既對(duì)全血做病毒滅活處理又保持其中各有效成分的功能，但對(duì)某些成分制品則完全能夠進(jìn)行病毒滅活處理。采用成分輸血，可避免輸入不必要的血液成分所致的輸血反應(yīng)，減少了感染病毒的機(jī)會(huì)，既節(jié)省了寶貴的血液又減輕了病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

加強(qiáng)臨床用血同血站備血之間的信息互通：質(zhì)量管理體系是指把影響質(zhì)量的技術(shù)、管理、人員、資源等諸多因素綜合在一起，相互配合而達(dá)成一個(gè)共同的目標(biāo)。輸血質(zhì)量管理體系在保證血液質(zhì)量的同時(shí)也要向臨床用血管理方面延伸，否則從血管到血管的這一采供血過程將得不到全程監(jiān)控，臨床和血站的相關(guān)工作人員之間缺乏互動(dòng)溝通，血液質(zhì)量信息得不到有效反饋，在很大程度上也就增加了臨床輸血風(fēng)險(xiǎn)。血液質(zhì)量的要求不僅局限于血站工作的范圍內(nèi)，還應(yīng)配合醫(yī)院輸血科建立相應(yīng)的臨床用血質(zhì)量管理體系，如輸血科要收集臨床提供的輸血反應(yīng)回報(bào)單，按月統(tǒng)報(bào)醫(yī)務(wù)科及當(dāng)?shù)匮?，及時(shí)反映血液質(zhì)量狀況，對(duì)出現(xiàn)嚴(yán)重輸血反應(yīng)的，應(yīng)馬上協(xié)助調(diào)查，是否由于特殊血型及抗體或其他輸血并發(fā)癥等原因所引起。醫(yī)院與血站進(jìn)行良好的溝通，建立和諧、互動(dòng)、雙贏關(guān)系，是現(xiàn)代輸血醫(yī)學(xué)的需求，有助于持續(xù)改進(jìn)血液制品質(zhì)量，為輸血醫(yī)學(xué)的發(fā)展提供可靠的臨床依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

第9篇：化學(xué)滅活方法范文

關(guān)鍵詞：臭氧；強(qiáng)氧化；消毒；水處理

1 臭氧的性質(zhì)

臭氧是一種強(qiáng)氧化劑，氣態(tài)臭氧厚層帶藍(lán)色，有刺激性腥臭氣味，濃度高時(shí)與氯氣氣味相像；液態(tài)臭氧深藍(lán)色，固態(tài)臭氧紫黑色。另外，臭氧為純凈物。在常溫下，易分解，生成氧氣和氧原子，所以臭氧在工作中沒有二次污染產(chǎn)生，這是臭氧技術(shù)應(yīng)用的最大優(yōu)越性。在標(biāo)準(zhǔn)壓力和常溫下，它在水中的溶解度是氧氣的13倍，是空氣的25倍。與氧氣比，臭氧比重大、有味、有色、易溶于水、易分解。臭氧是已知最強(qiáng)的氧化劑之一，臭氧由于其在水中有較高的氧化還原電位僅次于氟。

2 臭氧消毒的機(jī)理

臭氧是僅次于氟的第二強(qiáng)氧化劑，菌過程屬生物化學(xué)氧化反應(yīng)。臭氧消毒機(jī)理可分為兩類：

2.1 臭氧殺菌機(jī)理

以氧化作用破壞微生物膜的結(jié)構(gòu)實(shí)現(xiàn)殺菌作用。臭氧首先作用于細(xì)胞膜，使膜構(gòu)成成分受損傷導(dǎo)致新陳代謝障礙，臭氧繼續(xù)滲透穿透膜而破壞膜內(nèi)蛋白質(zhì)和脂多糖，改變細(xì)胞的通透性，導(dǎo)致細(xì)胞溶解、死亡。臭氧能氧化分解細(xì)菌內(nèi)部葡萄糖所需的酶，使細(xì)菌滅活死亡。并且講死亡菌體內(nèi)的遺傳基因，寄生菌種，寄生病毒粒子，噬菌體，支原體及熱原（內(nèi)毒素）等溶解變性死亡，臭氧滅菌屬于溶菌劑，即可以達(dá)到徹底，永久的消滅物體內(nèi)部所有微生物。

2.2 臭氧滅活病毒機(jī)理

以氧化作用直接破壞其核糖核酸RNA或脫氧核糖核酸DNA物質(zhì)而完成的。

臭氧水滅菌情況有些不同，其氧化反應(yīng)有兩種，微生物菌體既與溶解水中的臭氧直接反應(yīng)，又與臭氧分解生成的羥基OH的間接反應(yīng)，由于羥基OH為極具氧化性的氧化劑，因此臭氧水的殺菌速度極快。

3 臭氧消毒于水處理消毒優(yōu)缺點(diǎn)

3.1 臭氧消毒滅菌的優(yōu)點(diǎn)

臭氧滅菌屬溶菌級(jí)，殺菌徹底，無殘留，殺菌廣譜，可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌，并可破壞肉毒桿菌毒素，且反應(yīng)快，投量少；臭氧消毒的適應(yīng)能力強(qiáng)，在pH為5.6-9.8、水溫0-37℃的范圍內(nèi)消毒性能受影響很??；不產(chǎn)生持久性殘余，無二次污染；與氯消毒劑聯(lián)用可大幅度減少氯使用量。

由于氯消毒會(huì)產(chǎn)生具有致癌性的THMs（三鹵甲烷），臭氧消毒后補(bǔ)加少量氯消毒劑，可大幅減少THMs的產(chǎn)生；臭氧消毒后增加污水的絮凝沉降性能。而傳統(tǒng)的滅菌消毒方法，無論是紫外線，還是化學(xué)熏蒸法，都有不徹底、有死角、工作量大、有殘留污染或有異味等缺點(diǎn)，并有可能損害人體健康。如用紫外線消毒，在光線照射不到的地方?jīng)]有效果，有衰退、穿透力弱、使用壽命不長等缺點(diǎn)?；瘜W(xué)熏蒸法也存在不足之處，如對(duì)抗藥性很強(qiáng)的細(xì)菌和病毒，則殺菌效果不明顯。

3.2 臭氧用于污水回用和飲用水消毒的缺點(diǎn)

臭氧不易溶于水，且不穩(wěn)定；污水消毒時(shí)受水質(zhì)的影響較大，所含有少量的有機(jī)物會(huì)增大臭氧消耗量，消毒成本增加；當(dāng)臭氧接觸時(shí)間不足時(shí)，有機(jī)物不完全氧化產(chǎn)生醛、酮類等有毒有害物質(zhì)。臭氧消毒作為氯消毒的替代方法，在飲用水處理中被越來越多地應(yīng)用。

試驗(yàn)表明，臭氧幾乎對(duì)所有細(xì)菌、病毒、真菌及原蟲、卵囊都具有明顯的滅活效果。但是臭氧氧化含有溴離子的原水時(shí)會(huì)產(chǎn)生溴酸根。溴酸根已被國際癌癥研究機(jī)構(gòu)定為2B級(jí)潛在致癌物，WHO建議飲用水的最大溴酸根含量為25μg/L，美國環(huán)保局（USEPA）飲水標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定溴酸根的最高允許濃度為10μg/L。臭氧氧化過程中溴酸鹽的生成有臭氧氧化和臭氧/氫氧自由基氧化兩種途徑，控制溴酸鹽可以從控制其形成和生成后去除兩個(gè)方面進(jìn)行。降低pH、添加氨氣、氯-氨工藝和優(yōu)化臭氧化條件是控制溴酸鹽形成的方法，溴酸鹽生成后則可以利用物理、化學(xué)和生物方法去除。因此要實(shí)現(xiàn)臭氧、致病菌與溴酸鹽三者的平衡需進(jìn)一步探討臭氧滅菌機(jī)理及溴酸鹽控制方法。

4 臭氧技術(shù)在水處理中的應(yīng)用

臭氧作為強(qiáng)氧化劑用在凈水過程中的各階段，主要為預(yù)臭氧化、中間臭氧化和最終的消毒。預(yù)臭氧化可部分降解天然有機(jī)物和非活性微生物，以提高絮凝、沉淀等后續(xù)工藝去除濁度和除色、 去異味、去臭的效率；中間臭氧化主要為降解有機(jī)微污染物，去除三鹵甲烷前體物和提高可生物降解性能；而臭氧用于最終的消毒可去除凈水過程中的殘余微生物及減少消毒副產(chǎn)物的形成。

4.1 去除無機(jī)物

預(yù)臭氧化階段可去除原水中無機(jī)物質(zhì)， 如鋅、鎳、銅、鉻、鎘五類重金屬物質(zhì)和鐵、錳等，金屬離子可由于氧化作用形成難溶物而去除。同理，氨型氮可被臭氧緩慢氧化為硝酸根離子而通過后序的生物硝化去除。

4.2 氧化天然有機(jī)物

去除色度，臭氧對(duì)色基具有特別活性，能將其中的碳 -碳雙鍵破壞，產(chǎn)生相應(yīng)的含氧有機(jī)化合物達(dá)到脫色的目的；去除異味、 臭味； 提高有機(jī)物的生物可降解性能臭氧可以將一些大分子難降解有機(jī)物氧化成易被細(xì)菌降解利用的小分子有機(jī)物，提高有機(jī)物的生物可降解性；減少 T OC 和 DOC；控制氯化消毒副產(chǎn)物，預(yù)加臭氧不會(huì)產(chǎn)生三鹵甲烷，并能有效去除原水中大量的三鹵甲烷前體物，使濾后水再經(jīng)氯化（消毒）時(shí)生成三鹵甲烷的幾率大大減少。

4.3 消毒作用

臭氧具有很強(qiáng)的殺菌消毒能力，不易引起二次污染，作為飲用水的消毒殺菌劑在歐洲許多國家得到了廣泛的應(yīng)用。臭氧的殺菌機(jī)理是臭氧對(duì)細(xì)菌直接作用，氧化分解葡萄糖氧化所必需的酶。

5 結(jié)語

消毒劑的選擇一直是廣大水處理工作者討論的焦點(diǎn)。隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和環(huán)境污染的日趨加劇，尤其是氯化消毒副產(chǎn)物的發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)的常規(guī)水處理工藝已經(jīng)不能滿足要求，許多新技術(shù)新工藝新藥劑在水處理中得以應(yīng)用。臭氧氧化技術(shù)因?yàn)榫哂醒趸芰?qiáng)、反應(yīng)速度快、不產(chǎn)生污泥、無二次污染等優(yōu)點(diǎn)，它的高氧化還原電位決定它對(duì)氧化、脫色、除味方面的廣泛應(yīng)用，有人研究指出，臭氧溶解于水中，幾乎能夠殺水中一切對(duì)人體有害的物質(zhì)，比如鐵、錳、鉻、硫酸鹽、酚、苯、氧化物等，還可分解有機(jī)物及滅藻等。逐漸成為人們研究的熱點(diǎn)。而且，隨著近年來臭氧發(fā)生儀器設(shè)備性能的提高，在水處理中逐漸呈現(xiàn)出廣闊的前景。

參考文獻(xiàn)

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2. 王永祥，陳洪斌，阮久麗 《污水和再生水臭氧消毒的研究和應(yīng)用》 2010

3. 張紅專，高乃云，張永明 《臭氧技術(shù)在飲用水處理中的應(yīng)用和研究現(xiàn)狀》 2014