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關(guān)鍵詞畜禽;免疫失?。晦r(nóng)村;原因;對策
中圖分類號S851.3文獻標識碼A文章編號 1007-5739(2013)12-0235-02
在當前動物疫病日益復雜化的背景下,畜禽的日常免疫工作顯得尤為重要,然而,免疫失敗成為畜禽疫病防控的突出問題。廣義上說,免疫失敗是機體在免疫過程中,由于某一種或幾種原因?qū)е聜€體或群體在接種疫苗后沒有達到預期的免疫效果,而出現(xiàn)一種不健康的表現(xiàn)形式。狹義上說,免疫失敗是接種過疫苗的動物機體免疫應(yīng)答顯著減弱或未產(chǎn)生相應(yīng)的免疫應(yīng)答,從而不能預防相應(yīng)的疫病。該文針對日常動物防疫工作中各種引起免疫失敗的原因進行了綜合分析,并提出了一些應(yīng)對策略,以供同行參考。
1農(nóng)村畜禽免疫失敗的表現(xiàn)形式
免疫失敗主要有以下幾種表現(xiàn)形式:接種疫苗后動物未出現(xiàn)臨床癥狀,未發(fā)生相應(yīng)疾病死亡,但體內(nèi)不能檢測到抗體或產(chǎn)生較低的抗體效價,從而不能有效預防疫??;接種疫苗后,動物仍發(fā)生相應(yīng)的疾?。唤臃N疫苗后,群體沒有出現(xiàn)明顯的疾病,但導致群體生產(chǎn)性能下降;接種疫苗后,動物沒有發(fā)生相應(yīng)的疾病,但導致機體抵抗力下降,使混合感染的疾病增多;隱性感染、持續(xù)感染和帶毒動物及垂直感染現(xiàn)象。
2畜禽免疫存在的主要問題
2.1免疫程序不合理
日常防疫工作中常出現(xiàn)不按免疫程序操作的情況。免疫過早易受母源抗體的影響,選擇在母源抗體水平較高時接種疫苗會有部分疫苗毒株被母源抗體中和,從而影響疫苗抗體的產(chǎn)生,并降低原母源抗體對動物機體的保護[1];免疫過晚,動物可能已感染疫病;農(nóng)村畜禽免疫中也有隨意增減免疫次數(shù)、疫苗種類及劑量的現(xiàn)象,任意增加免疫次數(shù)和免疫劑量可能致使動物機體產(chǎn)生免疫麻痹現(xiàn)象,倘若免疫次數(shù)和劑量不夠,都可能不能很好地刺激機體產(chǎn)生抗體,從而達不到應(yīng)有的免疫效果。
2.2疫苗保存運輸不當
在疫苗保存中,常可能出現(xiàn)疫苗存儲冰箱溫度尚未達到疫苗的保存要求,或?qū)σ呙绮话凑f明書上的溫度要求隨意儲存的情況;在采購和運輸前往養(yǎng)殖場進行注射的過程中,時而會出現(xiàn)沒有帶疫苗冷藏保溫箱,而將疫苗和冰塊一同裝進薄膜袋,到達目的地時冰塊融化的現(xiàn)象,這些都可能導致疫苗失效。
2.3準備工作不到位
在動物免疫工作中,準備工作是至關(guān)重要的,然而在免疫工作中,卻常常因為準備工作不到位而導致免疫失敗。如器械消毒不到位、疫苗檢查不仔細、疫苗使用前應(yīng)充分振蕩,使沉淀物混合均勻、疫苗回溫處理不夠、引起應(yīng)激反應(yīng)、疫苗在使用前未振搖均勻、稀釋后未及時使用等[2]。
2.4疫苗使用不當
許多養(yǎng)殖戶或防疫員為貪圖方便,常將2種或2種以上疫苗混合接種,一次接種多種疫苗,使其對其中1種抗原的免疫應(yīng)答顯著降低,或細菌性疫苗與病毒性疫苗混用,由于病毒性疫苗在制造過程中含有一定量的抗生素,可抑制菌苗,從而降低細菌疫苗的效果。日常防疫中,也可能出現(xiàn)疫苗稀釋劑不對的情況[3]。采用飲水免疫時,飲水器沒有進行清洗、消毒,或飲水器中含有消毒藥、重金屬離子等。也可能使用過期疫苗,或?qū)⒁呙缭谌展庀轮鄙?,或疫苗取出時間過長、稀釋后或開啟后未用完等致使疫苗失效。在選擇中,使用疫苗血清型與動物感染病毒或細菌血清型不同,有的疫苗有幾個不同的品系,不同的品系毒力不同,若首免時選擇較強的品系不但起不到免疫保護作用,而且接種后還會引起發(fā)病。
2.5接種操作不規(guī)范,免疫劑量不準確
在免疫時接種針出現(xiàn)故障或打飛針等導致免疫劑量不足而影響效力;在免疫中,常有養(yǎng)殖戶或防疫員擔心效果不好而隨意加大劑量引起免疫耐受或免疫麻痹;日常免疫中亦有接種途徑不當?shù)臓顩r,如飲水免疫飲水器中水量過多或免疫前沒有對飲水量進行限制;在滴眼、滴鼻免疫時,疫苗沒能進入鼻腔、眼內(nèi);肌注時注入脂肪組織等。
2.6環(huán)境消毒不到位或應(yīng)激反應(yīng)
在飼養(yǎng)過程中,由于環(huán)境消毒不到位及管理不善,致使畜禽圈舍及其周圍有大量病原微生物,使動物在疫苗接種期間感染細菌、病毒。飼養(yǎng)環(huán)境出現(xiàn)寒冷、炎熱、潮濕、擁擠、通風不良、氣候驟變以及饑渴、轉(zhuǎn)群、突然更換飼料、長途運輸?shù)绕渌涣家蛩鼐蓪е旅庖呤 ?/p>
2.7飼料墊料霉變或用藥不當
飼喂變質(zhì)的飼料,且墊料發(fā)生霉變,常常產(chǎn)生大量的霉菌毒素,對雞的法氏囊、動物胸腺產(chǎn)生侵害,同時毒害巨噬細胞,降低畜禽的免疫能力。另外,在免疫接種期間,若使用具有免疫抑制作用的藥物性飼料添加劑或抗菌藥物等,可引起抗原受損或免疫抑制,如痢特靈、氯霉素、卡那霉素等。而且在使用弱毒活疫(菌)苗前后幾天,對畜禽進行飲水消毒、噴霧消毒均可導致免疫失效。
2.8畜禽發(fā)生疾病
畜禽感染免疫抑制性疾病,免疫系統(tǒng)遭到侵害,使動物免疫系統(tǒng)對疫苗的免疫應(yīng)答能力降低,使疫苗保護力下降。若免疫前已被野毒感染,如母豬持續(xù)感染帶毒免疫耐受,從而將疫病傳給子代。
3對策
3.1制訂合理的免疫程序
在制訂免疫程序過程中,首先需排除母源抗體的影響,確定首免日齡;在日常免疫中,及時規(guī)范免疫程序,嚴格按照免疫計劃規(guī)定的次數(shù)、疫苗種類及劑量進行。對于需要接種多種疫苗的,根據(jù)免疫程序先后順序進行免疫接種,確保異種疫苗免疫之間的時間間隔,注射2種不同的疫苗,應(yīng)間隔5~7 d,最好10 d以上。
3.2正確使用疫苗
根據(jù)病毒或細菌的流行血清型選擇相應(yīng)的疫苗,并根據(jù)免疫程序和計劃選擇疫苗品系。同時,使用前進行檢查,凡過時、變色、沉淀、瓶口漏氣的疫苗均不得使用;疫苗一經(jīng)稀釋,2 h內(nèi)必須用完;其他疫苗開啟后當天用完,否則廢棄[4-5]。廢棄的疫苗應(yīng)集中進行處置,假如是活苗則必須殺毒和銷毀。
3.3規(guī)范存儲運輸
采取“苗隨冰行,苗完冰未化”的疫苗運輸原則,同時運輸途中避免陽光直射或高溫。凍干苗、滅活苗分別在 -10~20、2~8 ℃條件下進行保存,為疫苗保存提供必要的存儲條件。
3.4做好準備工作
免疫工作開展前做好消毒準備,將針頭、注射器、鑷子等事先清洗、消毒;細看瓶簽及使用說明,按要求劑量嚴格注射;詳細記錄注射劑量、日期、生產(chǎn)批號、疫苗產(chǎn)地等;疫苗注射前,油乳劑疫苗先從冰箱中取出放置一段時間,此過程中可輕搖數(shù)次使其均勻回溫,待其溫度恢復到室溫(25 ℃左右)時再使用。冬季可在25 ℃左右的空調(diào)房間或水浴中回溫,夏季因豬體的熱應(yīng)激,回溫更加重要;凍干苗稀釋液應(yīng)進行預冷。使用前輕搖,搖均后方可接種。
3.5選擇正確的稀釋劑和免疫接種劑量
飲水、氣霧免疫,用冷開水或蒸餾水進行稀釋,要求水體不能存在重金屬離子、免疫抑制劑、消毒劑等;凍干苗要求用配套的稀釋液,若沒有可用生理鹽水進行稀釋;配疫苗的飲用水加0.3%脫脂奶粉作保護劑穩(wěn)定病毒。同時2次或2次以上的免疫接種的份量應(yīng)高于前次份量,并嚴格按照免疫計劃和說明書進行。
3.6做好日常飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生工作
為畜禽提供良好的生活環(huán)境,杜絕飼喂變質(zhì)的飼料,勤換墊料。免疫接種前檢查動物健康狀況;若動物發(fā)生疾病,免疫接種時間應(yīng)適當延遲,免疫前后3 d內(nèi)不要給畜禽使用抗生素、腎上腺皮質(zhì)激素、驅(qū)蟲抗病毒等藥物;在不得不用的情況下,在使用后的3~7 d內(nèi)補種1次。同時,做好日常消毒滅原工作,在免疫前停止消毒。另外,還需要做好抗應(yīng)激工作,在免疫前后1~3 d內(nèi)減少應(yīng)激;若出現(xiàn)無法避免的應(yīng)激時,接種前后3~5 d內(nèi)在飲水中加入電解多維VC或VE等抗應(yīng)激劑,或飼喂在飼料中加入氯丙嗪、利血平、桿菌肽鋅等抗應(yīng)激藥物。
4結(jié)語
免疫失敗是由多種因素綜合作用的結(jié)果。在尋找免疫失敗的原因時,應(yīng)樹立多病因論的觀點,對畜禽的疫苗、免疫程序、營養(yǎng)、生理狀況、藥物與毒素、飼養(yǎng)管理、環(huán)境等多方面進行深入調(diào)查,并進行綜合分析,才能發(fā)現(xiàn)主要矛盾的所在,從而得到客觀、科學的解決辦法。
5參考文獻
[1] 雍永強,麥金麗.動物免疫失敗的原因及對策[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2009(16):312-314.
[2] 陳霞.動物免疫失敗的原因及對策[J].畜牧市場,2010(9):26-27.
[3] 吉寶蟬.動物免疫失敗的原因及對策[J].中國畜禽種業(yè),2010(12):50-52.
一、調(diào)查方案
1、調(diào)查地點:駟馬鎮(zhèn)輝煌村、得勝鎮(zhèn)平江村、西興鎮(zhèn)馬鞍村。
2、調(diào)查范圍:畜禽散養(yǎng)農(nóng)戶各10戶,豬場、羊場、雞場大戶各1個。
3、調(diào)查方式:問卷調(diào)查、現(xiàn)場查驗、檔案追溯。
二、免疫失敗的原因分析
(一)免疫程序不合理。一是母源抗體干擾,導致初生動物的免疫失?。寒斈冈纯贵w滴度高時,對初生動物實施免疫接種,是導致仔豬、犢牛、羔羊免疫失敗最常見的因素;二是未按規(guī)定程序接種:一些養(yǎng)殖大戶(特別是雞場)對免疫程序不夠重視,往往認為某種疫苗接種過一次后,就萬事大吉,結(jié)果,當抗體水平下降后又沒及時加強免疫,達不到應(yīng)有的保護效果而發(fā)病,如雞新城疫;三是免疫程序不適合本場戶實際:一些養(yǎng)戶沒有根據(jù)本場的實際,生搬硬套教科書上的免疫程序或其它場戶的免疫程序,而出現(xiàn)免疫失敗。
(二)疫苗運輸、保存、使用不規(guī)范 。
1、疫苗的質(zhì)量問題:如個別鄉(xiāng)鎮(zhèn)疫苗運輸時間長、疫苗冷凍或冷藏保存不當;如村級防疫員疫苗取出后在免疫接種前受到日光的直接照射,或取出時間過長,或疫苗稀釋后未在規(guī)定時間內(nèi)用完,影響疫苗的效價甚至失效;如疫苗過期失效、疫苗瓶蓋松動,真空狀態(tài)破壞后,沒認真校對而開展免疫注射等。
2、疫苗選擇不當:如肉雞場肉仔雞生長快、抵抗力相對較弱,應(yīng)選用一些中等毒力的疫苗,而個別養(yǎng)殖場忽視這一特點,卻選擇中等偏強毒力的傳染性法氏囊病疫苗、新城疫Ⅰ系疫苗飲水,這不僅起不到免疫的作用,相反造成病毒毒力增強和病毒擴散。
3、操作不規(guī)范:一種情況是將多種疫苗同時接種:隨意將兩種或兩種以上疫苗同時接種,機體就可能對其中一種抗原的免疫應(yīng)答顯著降低,從而影響這些疫苗的免疫接種效果。如新城疫和傳染性支氣管炎,新城疫和傳染性法氏囊病等。二種情況是疫苗稀釋劑不當:如使用未經(jīng)消毒或受到污染的稀釋劑;如雞場飲水免疫中飲水器未消毒、清洗,或飲水器中含消毒藥等都會造成免疫不理想或免疫失敗。三種情況是接種劑量不準確:如個別防疫員接種時打飛針或未注足劑量,又礙于面子不補注,從而使動物機體不能夠獲得堅強的免疫力。反之,個別獸醫(yī)操作沒有調(diào)準注射器計量桿,劑量過大,又會抑制機體產(chǎn)生抗體,甚至出現(xiàn)免疫麻痹,并可致動物出現(xiàn)臨床癥狀而發(fā)病。
4、疫苗接種途徑不當:特別是個別雞場,未按規(guī)定途徑接種疫苗,而是想當然,圖方便。如滴鼻、滴眼免疫時,疫苗未能進入眼內(nèi)、鼻腔;或飲水免疫時,免疫前未限水或飲水器內(nèi)加水量太多,使配制的疫苗未能在規(guī)定時間內(nèi)飲完而影響劑量。使接種的疫苗起不到應(yīng)有的免疫效果。
5. 飼養(yǎng)管理不當。一是消毒衛(wèi)生制度不健全:個別場和農(nóng)戶環(huán)境衛(wèi)生差,圈舍及周圍環(huán)境中存在大量的病原微生物,在用疫苗接種期間,使動物受到病毒或細菌的感染,導致免疫失?。欢敲棺兊娘暳匣驂|料發(fā)霉: 霉菌毒素可侵害動物胸腺及雞的法氏囊,毒害巨噬細胞而使其不能吞噬病原微生物,從而引起嚴重的免疫抑制;三是強烈刺激: 接種疫苗前后,動物受到強烈刺激,就可能激發(fā)腎上腺釋放皮質(zhì)激素,使機體產(chǎn)生免疫抑制,從而達不到應(yīng)有的免疫效果;四是接觸到有害的化學物質(zhì): 許多重金屬(鉛、鎘、汞、砷)和某些化學物質(zhì)(鹵化苯、鹵素、農(nóng)藥),可引起動物免疫系統(tǒng)的組織部分甚至全部萎縮以及活性細胞的破壞,導致免疫失敗;五是用藥不當:有的養(yǎng)殖場在免疫接種期間使用免疫抑制作用的藥物或藥物性飼料添加劑,如痢特靈、卡那霉素、抗病毒藥、腎上腺皮質(zhì)激素等,導致免疫失??;六是感染免疫抑制性疾?。喝绺腥矩i瘟、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、雞馬立克氏病、淋巴細胞白血病、雞傳染性貧血病、傳染性法氏囊、腺病毒等,這些傳染性病原體主要侵襲、損害動物的體液或細胞免疫中樞器官,導致免疫機能障礙,出現(xiàn)免疫抑制現(xiàn)象。
三、規(guī)范動物免疫操作的建議
(一)正確選擇、運輸、保存和使用疫苗。一是正確選擇優(yōu)質(zhì)疫苗,并嚴格按照說明書規(guī)定貯存與運輸疫苗,疫苗種類多時,選用時應(yīng)考慮當?shù)匾咔?、毒株特點。 二是運送時應(yīng)堅持“苗隨冰行,苗完冰未化”的原則,將疫苗裝入盛有冰塊的保溫瓶或保溫箱,避免高溫或陽光直射;疫苗的保存均有一定的溫度和時間的要求,一般凍干苗應(yīng)放在-10—-20℃的冷凍環(huán)境中保存,溫度越低,保存時間越長;有些凍干苗中加入了耐熱保護劑,可以放在4--6℃保存;滅活油苗,一般保存溫度為2—8℃,不能過熱,也不能低于0℃。三是免疫接種前要對對疫苗逐瓶檢查,注意有效期和瓶子有無破損、封口是否嚴密、瓶內(nèi)是否真空,有一項不合格就不能使用。
(二)制定合理的免疫程序:根據(jù)本地或本場疫病流行情況和規(guī)律、動物群體的病史、品種、日齡、母源抗體水平和飼養(yǎng)管理條件以及疫苗的種類、性質(zhì)等因素制定出合理科學的免疫程序,并視具體情況進行調(diào)整。
(三)規(guī)范免疫操作方法:各鄉(xiāng)鎮(zhèn)要嚴格按照免疫操作規(guī)程,對防疫員開展技術(shù)培訓,嚴格遵守“免前健康檢查、圈舍環(huán)境消毒、免疫注射操作、畜禽標識佩戴、免疫檔案填寫、應(yīng)激觀察救治”的工作流程,嚴格把握“疫苗保存稀釋、養(yǎng)殖環(huán)境消毒、規(guī)范免疫注射”三道關(guān)口,確保免疫密度和免疫質(zhì)量達到國家規(guī)定標準。
1、凍干苗,必須使用配套的稀釋液;沒有配套稀釋液的疫苗,一般使用生理鹽水稀釋。
2、飲水免疫,可用蒸餾水或冷開水(所用的水不得含有消毒劑、重金屬離子),配疫苗的飲用水中可加入0.3%的脫脂奶粉作保護劑;飲水免疫不得使用金屬容器,在疫苗飲用前可適當限水以保證疫苗在1小時內(nèi)飲完,并設(shè)置足夠的飲水器以保證每只動物都能同時飲到疫苗水。
3、氣霧免疫,要保證霧粒在50μm左右。
4、點眼、滴鼻免疫,要保證疫苗進入眼內(nèi)、鼻腔。
5、刺種痘苗,必須刺一下浸一下刺種針,保證刺種針每次浸入疫苗溶液中。
6、用連續(xù)注射器接種疫苗,注射劑量要反復校正,使誤差小于0.01mL,針頭不能太粗,以免拔針后疫苗流出。接種過程中還要注意針頭的消毒與更換。
(四)避免刺激: 在免疫前1天與后3天內(nèi)應(yīng)盡量避免刺激,減少噪音,防止應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生。遇到不可避免的刺激時,應(yīng)在接種前后3-5天內(nèi),在飲水中加入抗應(yīng)激劑,如電解多維、維生素C、維生素E,或在飼料中加入利血平、氯丙嗪、桿菌肽鋅等抗應(yīng)激藥物,均能有效地緩解和降低各種應(yīng)激反應(yīng)。
(五)注意營養(yǎng)平衡:合理選用免疫促進劑,大家畜要飼喂較好的飼料,中家畜最好喂配合飼料,家禽要適當增加蛋氨酸、纈氨酸、VA、VB、VC、VD等,合理選用左旋咪唑、卡介苗、干擾素等免疫促進劑,增強免疫效果。確保不含霉菌毒素和其他化學物質(zhì)。
(六)調(diào)整動物健康狀況
畜牧業(yè);動物免疫;疫苗
【中圖分類號】R392.1 文獻標識碼:B文章編號:1673-8500(2012)12-0047-01
要提高動物疫病的免疫效果,不是一件簡單的事,除了要從宣傳、培訓入手,加強對《中華人民共和國動物防疫法》的宣傳力度,使廣大養(yǎng)殖戶、動物經(jīng)營者自覺接受疫病免疫工作外,當前更重要的工作是在條件成熟的情況下,強化獸醫(yī)人員計劃免疫操作規(guī)程,重視免疫工作的各個技術(shù)環(huán)節(jié),確保免疫效果。
1疫苗的運輸
疫苗的運輸在實際的操作中問題比較突出,在我國的春秋兩季集中免疫期間,正是高溫季節(jié),一般情況下,從省、市到縣都是使用專用的運輸車輛進行運輸,沒有問題,但從縣到鄉(xiāng)鎮(zhèn),由于運輸?shù)臍夂驐l件(尤其是高溫)、運輸工具不符合要求(非冷藏車)、路徑較遠、途中時間過長,致使疫苗效價下降,雖按使用劑量注射疫苗,機體不能產(chǎn)生完全應(yīng)答反應(yīng),抗體達不到要求,起不到應(yīng)有的免疫保護作用,這樣在一般病原毒力作用下,部份個體仍然會發(fā)生已免疫病,造成散發(fā)。
2疫苗的保存
目前使用的疫苗比較多,除了口蹄疫、禽流感、豬藍耳病、豬瘟脾淋苗等主要免疫疫苗外,還有豬瘟肺疫二聯(lián)苗、豬副傷寒疫苗、豬細小病毒疫苗、豬大腸桿菌三價基因工程苗、豬水腫病苗、新支H120疫苗、新支H52疫苗、雞馬立克氏病疫苗、雞法氏囊疫苗、新城疫I系、Ⅱ系、克隆30、Ⅳ系、禽霍亂疫苗等,上述疫苗均有嚴格的保存條件,一般弱毒疫苗都要求在-15℃條件下保存,滅活苗在2~8℃溫度條件下保存。在實際的工作中,因保存不當,往往導致疫苗失效。疫苗保存失效主要原因有:一是保存溫度達不到要求,疫苗雖然未超過有效期,但早已失效;二是電力不正常,較長時間斷電或經(jīng)常短時間停電,導致保存溫度升高,疫苗受損而失效;三是保存時間已超過有效期;四是離開冷鏈后,獸醫(yī)人員將其存放在常溫下時間過長而失效;五是稀釋后的疫苗沒有在規(guī)定時間(現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用,在2h內(nèi)用完)內(nèi)用完,而延長使用時間。
3疫苗的使用
4免疫人員的素質(zhì)
由于村獸醫(yī)員大多未經(jīng)專業(yè)學校培訓,對有關(guān)動物的生理、病理、臨床癥狀等相關(guān)知識缺乏了解,對一些患病或者處于潛伏期的動物不能做出準確判定(患病或潛伏期易感動物的免疫系統(tǒng)都不能做出正常的免疫應(yīng)答反應(yīng))而盲目普遍進行注射,一方面是加大免疫反應(yīng)發(fā)生的幾率,造成負面的影響,另一方面是免疫應(yīng)答不完全,影響免疫效果。
5死搬陳規(guī)舊矩
一方面是一味遵循春秋兩季防疫而忽視平時的免疫補針和窩邊注射工作,對一些在春秋兩防季節(jié)之外的應(yīng)防對象未進行免疫而增加易感群體;另一方面是一味遵循“四不打”(正在生病的動物不打、初懷孕的動物不打、月齡不足的不打、臨產(chǎn)母畜不打)原則,而使一些易感動物,在“可打”時已經(jīng)染上了疫?。ㄈ?0d的仔豬對豬瘟已經(jīng)易感,若等到雙月才注射豬瘟苗,為時已晚)。因此,屬于“四不打”的動物要登記造冊,完善檔案,適時進行免疫補針,這樣能大大降低人為因素的影響;三是沒有按照程序進行免疫,就豬只而言,只注重豬溫、肺疫等疫病的免疫,而忽視仔豬副傷寒等其他疫病的免疫,導致顧此失彼,往往給生豬養(yǎng)殖造成嚴重的經(jīng)濟損失,挫傷養(yǎng)殖者的積極性。
關(guān)鍵詞:動物免疫;接種;方法;應(yīng)用
免疫是我國預防和控制重大動物疫病的重要措施,是保證動物疫病免疫的重要質(zhì)量和免疫效果的關(guān)鍵環(huán)節(jié),就是說“動物健康與否,關(guān)鍵還看最后一針”,假如注射方法不正確,將會給動物疫情的預防控制留下隱患,如果采取正確的免疫接種方法,將會提高免疫操作技術(shù)水平,確保強制免疫的效果。
動物免疫法分為個體免疫法和群體免疫法。前者免疫途徑包括注射、點眼、滴鼻、刺中、靜脈注射等,后者包括飲水、拌料、氣霧免疫等,選擇合理的免疫接種途徑可以大大提高動物機體的免疫應(yīng)答能力。
1 注射免疫接種
適用于各種滅活苗和弱毒苗的免疫接種。根據(jù)疫苗注入的組織不同,可分為皮下注射和皮內(nèi)注射、肌肉注射。注射接種劑量準確、免疫密度高、效果確實可靠,在實際中應(yīng)用廣泛。但費時費力,消毒不嚴格時容易造成病原體人為傳播和局部感染,而且捕捉動物時易出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)。
1.1 皮內(nèi)接種
選擇皮膚致密皮毛少的部位。大牲畜選擇頸部、尾根、眼臉,豬在耳根后,羊在頸側(cè)或耳根部,雞在肉髯部位。注射部位如有皮毛應(yīng)先剪去皮毛,然后用酒精棉球消毒,著手將皮膚捏起形成褶皺或者以左手緊繃固定皮膚,右手持注射器,是針頭斜面朝上,幾乎于注射皮面平行,刺入0.5 cm左右,也可以刺入皮膚真皮當中,還要注意慢刺,以免注入到表皮或真皮。再有注射藥后,在注射部位有一小包,而且小包會隨著皮膚移動,這就證明確實注入皮內(nèi),最后酒精棉球消毒皮膚,皮內(nèi)接種疫苗的使用劑量和局部副作用小,相同的劑量疫苗產(chǎn)生的免疫力比皮下接種的高。
1.2 肌肉注射
多用于弱毒苗的接種。肌肉的注射操作非常簡便,適用范圍廣,副作用也比較小,藥業(yè)吸收比較快,免疫效果也非常好。最好選擇肌肉豐滿血管少原遠離神經(jīng)的部位。牛馬羊豬等牲畜多在臂部或頸部,但豬就應(yīng)該在耳后或頸部為最好,雞應(yīng)該在胸肌部位或者翅根部位,家禽使用的針頭號數(shù)和長度應(yīng)該按照家禽的大小和肥胖程度決定。
1.3 皮下接種
這種方法主要用于免疫血清和滅火苗和高免疫卵黃抗體接種,最好要選擇皮膚松的部位,皮毛少皮膚松弛血管少皮薄的部位,大牲畜應(yīng)該在頸側(cè)部上三分之一部位,犬和羊應(yīng)該在股內(nèi)側(cè),豬在耳根后或者股內(nèi)側(cè),兔子在耳后家禽在胸部或者是翅膀根下,也可以在頸皮下。注射部位消毒,注射者右手持注射器,左手捏起皮膚刺入皮下注射,應(yīng)插入枕頭的三分之二,將左手放開,再推動注射器將疫苗滿滿注射到體內(nèi),然后酒精消毒針眼部位,最后將枕頭拔除。
2 皮膚刺中
常用于禽類弱毒苗接種。在禽類翅膀內(nèi)側(cè)無毛處,避開血管針刺中沾取疫苗,然后再刺入皮下。接種后要在7~10 d檢查免疫效果。一般而言,正確接種后接種部位紅腫結(jié)痂反應(yīng)。如果局部無反應(yīng),就應(yīng)該檢查全群是否處于免疫階段,疫苗質(zhì)量有無問題,接種方法是否正確,還應(yīng)該及時補充免疫。
3 靜脈注射
用于注射免疫血清,緊急預防和治療,馬牛羊應(yīng)該在靜脈注射,豬應(yīng)該在耳靜脈注射,雞在翅膀下進行注射,疫苗因為毒力的不同一般不采用靜脈注射。
4 點眼與滴鼻
禽類眼部具有豐富的腺體,和淋巴樣的組織,對抗原的刺激都能產(chǎn)生很強的應(yīng)答反應(yīng),免疫時多用滴管吸收疫苗滴入眼內(nèi)或者鼻孔內(nèi)。這種方法常用于禽類,尤其是雞雛的首次免疫。雞點眼或滴鼻接種方法時還要注意均使用使弱毒苗接種,如果有母原抗體的存在會影響病毒的定居和刺激機體產(chǎn)生康體,這時應(yīng)該考慮適當增大疫苗的接種量。點眼時應(yīng)該等疫苗擴散后放開雞雛,滴鼻時可以手固定雞雛后滴鼻,這樣能增加疫苗的吸收和利用。
5 氣霧免疫法
將疫苗稀釋后放入噴霧器里,噴霧使疫苗形成5~10 μm粒子,空氣中均勻地漂浮,動物隨著運動進行呼吸將疫苗吸入,達到免疫效果。氣霧免疫分為兩類,噴霧免疫和氣溶膠免疫兩種形式,氣溶膠為免疫常見方法,不但省力而且效果好,適合于大群體動物免疫。進行氣霧免疫時候?qū)游镖s入圈內(nèi)關(guān)上門窗,減少空氣的流通,噴霧完畢后動物在圈內(nèi)停留20~30 min即可放出。
6 口免疫接種
就是將疫苗均勻混合在飼料中,或者飲水口服,從而使動物獲得免疫,可分為拌料和飲水等方法。經(jīng)口免疫的效果好,省時省力,便于操作,使全群動物同一時間共同接種,對動物應(yīng)激反應(yīng)較小,但是對動物抗體的滴度不均勻,免疫持續(xù)時間短,免疫效果也受多種因素影響,口服免疫時,還應(yīng)該按照畜禽數(shù)量、飲水量、采食量來計算疫苗的使用量,免疫時應(yīng)該停止飲水和飼喂飼料,疫苗混合水或者飼料后應(yīng)該迅速口服,保證在最短時間內(nèi)攝入足夠量的疫苗。稀釋疫苗所用的水,盡量用純凈冷水,如果水溫過高將影響疫苗效果,還在飲水中加入0.1%脫脂奶粉,混有疫苗的水或者飼料不能超過室內(nèi)溫度,還要注意疫苗不能陽光下暴曬,口服疫苗必須是高效價的活苗,一般注射劑量的2~5倍,也可以增加疫苗的使用量。
1對免疫系統(tǒng)的影響
牛孢疹病毒I型(BHV-1)疫苗、牛病毒性腹瀉疫苗、犬瘟熱—犬腺病毒I型聯(lián)苗和粘液瘤病毒的SG33株已被證明能誘導免疫抑制。用含有犬瘟熱病毒和犬腺病毒的疫苗進行體外免疫功能試驗和淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗,發(fā)現(xiàn)有顯著降低作用[2]。當有病原存在時,用粘液瘤病毒的SG33株進行免疫接種能引起兔子多種并發(fā)癥。
2殘留致病力
病毒或細菌的致弱,傳統(tǒng)上都是通過連續(xù)傳代培養(yǎng)直至所選毒株失去致病性而進行的。在某些情況下,低水平的毒力持續(xù)存在,并可能在廣泛使用過程中的某一特定條件下增強。致命的、無顯著特點的牛孢疹病毒I型感染已被證明與使用致弱的牛傳染性鼻氣管炎亞單位疫苗和牛副流感病毒3型疫苗接種新生牛犢有關(guān)。給奶牛接種山羊痘疫苗以后,可觀察到嚴重的全身性皮膚反應(yīng),而且導致產(chǎn)奶量下降[3]。給禽接種某些傳染性喉氣管炎病毒株時,如果不使用推薦的眼部接種方式而使用噴霧接種,則會導致嚴重的呼吸道癥狀。正確的減毒技術(shù)應(yīng)當用于一種新疫苗主要種子的制備。在一種新產(chǎn)品的研制階段,使用最敏感的動物進行安全研究至關(guān)重要。接種途徑最有可能導致毒力返強,并可能發(fā)現(xiàn)在種子和終產(chǎn)品之間致弱最徹底所需要的傳代數(shù)。對所有活苗返毒能力的傳代評估應(yīng)該是完整的,要求在體外至少傳5代。使用滅活疫苗是避免這種問題的有效途徑。
3滅活不徹底
病毒或毒素的滅活是生產(chǎn)疫苗的常用方法,在生產(chǎn)生物制品時,應(yīng)該采用適當、有效的滅活技術(shù)。滅活不徹底常會導致災難性的結(jié)果,在西歐國家曾因疫苗滅活不徹底,導致了幾次口蹄疫的暴發(fā)[4]。在大規(guī)模使用疫苗產(chǎn)品之前,應(yīng)按生產(chǎn)規(guī)模繪出至少3條滅活曲線,同時應(yīng)避免使用甲醛滅活。一般情況下,對每批成品進行安全性檢測也是很重要的[5]。
4基因重組
活疫苗株與病原致病株在特殊情況下可能會發(fā)生基因重組,重組DNA疫苗或常規(guī)疫苗毒力的返祖可能就是由基因重組引起的。而且標記疫苗能重新獲得缺失掉的基因,這是實施撲滅計劃中出現(xiàn)的災難性后果。在制備新的疫苗株時,應(yīng)當采用正確的重組DNA方法,若存在疑慮,可采取疫苗株和野毒株對靶動物或其他動物同時接種的方法檢查。另外,應(yīng)盡量避免將具有高重組率的不同病毒毒株混合在同一個疫苗瓶中。
5污染
真菌、細菌、支原體和病毒均能引起疫苗污染。由于真菌和細菌污染能改變產(chǎn)品的外觀,所以其所造成的產(chǎn)品污染容易被看見并能被質(zhì)量控制部門檢測到。支原體污染也相當普遍,可來自于人或動物,人源污染主要是由疫苗生產(chǎn)環(huán)境差引起的,動物源污染則主要是由生產(chǎn)使用的生物材料(如血清、細胞、雞蛋等)所致。在歐洲藥典和美國聯(lián)邦法典都有檢測支原體的描述。瘟病毒是最普遍的污染源,可能導致免疫動物發(fā)生嚴重疾病或血清學反應(yīng),可對非流行地區(qū)或消滅、根除計劃的實施帶來很大的麻煩[6]。必須以強制性手段對外來生物材料進行質(zhì)量控制:對細胞系、動物血清、豬源胰蛋白酶、雞蛋、毒種及菌種在進行操作之前必須進行全面檢查。任何時候只要有可能,都應(yīng)避免使用原代細胞系;同時疫苗生產(chǎn)程序還必須合適,血清應(yīng)滅活處理,所有的操作步驟都應(yīng)該在無菌的、經(jīng)GMP認證的環(huán)境下進行并且符合工藝技術(shù)水平要求。田間試驗,包括疫苗在獲得生產(chǎn)批準文號之前對受試動物的集中檢測和獲得銷售許可后的疫苗接種預防,應(yīng)當也是實施疫病預防計劃的一部分。
6小結(jié)
關(guān)鍵詞:動物免疫;疫苗冷藏使用;接種時注意事項
文章編號:978-7-80736-771-0(2011)03-136-02
動物傳染病,是養(yǎng)殖業(yè)的頭號大敵。無論散養(yǎng)、群養(yǎng)還是規(guī)模養(yǎng)殖,動物的飼養(yǎng)管理、場舍布局、消毒、糞便無害化處理、疫(菌)苗的科學選擇和使用等環(huán)節(jié),都非常關(guān)鍵。動物一旦染上疫病,尤其是烈性、危害性大的一類傳染病,將會對人畜構(gòu)成危害,影響到商貿(mào)流通、社會穩(wěn)定。對養(yǎng)殖場戶而言,不但經(jīng)濟上造成損失,嚴重時還會全群覆沒,經(jīng)濟損失慘重,血本無歸。因此,動物的防疫工作極為關(guān)鍵,至關(guān)重要。
一、做好動物免疫工作
(一)重視免疫工作。免疫是防控重大動物疫病的有效措施,是避免和減少動物疫情發(fā)生的關(guān)鍵。動物常見病用藥可治,而疫病則用藥很難治愈,個別疫病還無對癥藥物。為切實做好免疫工作,有效防止重大動物疫病發(fā)生,保護畜牧業(yè)健康發(fā)展和公共衛(wèi)生安全。動物免疫要抓住重點時期、重點地區(qū)和環(huán)節(jié),扎實做好口蹄疫、禽流感、高致病性豬藍耳病、豬瘟、布魯氏桿菌病、狂犬病、新城疫等免疫接種。堅持實行散養(yǎng)農(nóng)戶春秋集中防疫與日常補針相結(jié)合;規(guī)模集約化養(yǎng)殖場常年按照免疫程序的做法,對新入欄、病后已健康、產(chǎn)后孕畜、仔畜均應(yīng)適時補免;種豬配種前、仔豬斷奶前必須進行高致病性藍耳病強化免疫。重點做好種畜禽場、養(yǎng)殖大戶、規(guī)模養(yǎng)殖場及農(nóng)戶散養(yǎng)動物的免疫,確實提高免疫密度和質(zhì)量。做到應(yīng)免盡免,不留空當,防止因免疫不到位而引發(fā)疫情。
近年來,黨和政府高度重視動物疫病防治工作,免費發(fā)放疫(菌)苗、耳標、消毒藥等。隨著動物防疫工作的不斷深入,動物疫病的種類和病種逐年增加。目前,采用疫苗免疫是有效防控動物疫病的主要方法。疫苗的種類繁多,當前使用的疫苗主要有兩類:一是滅活苗,如高致病性禽流感、口蹄疫、高致病性豬藍耳病疫苗等;二是弱毒苗,如雞新城疫、豬瘟疫苗等。只有根據(jù)不同種類動物,疫病種類,再科學選擇疫苗,采取相應(yīng)的操作方法,并充分考慮到影響免疫效果的諸多因素,了解免疫操作時注意的事項,科學實施免疫接種,才能真正發(fā)揮出疫苗應(yīng)有的免疫保護效果,減少疫病的發(fā)生,最終消滅疫病。
(二)免疫前準備。在對動物進行免疫接種前,必須對動物的數(shù)量、日齡、體重、免疫與否、營養(yǎng)水平、健康狀況、飼養(yǎng)管理、衛(wèi)生消毒、場地清潔等要有充分的了解。要注意三點:(1)進行免疫接種的動物必須是健康的,病弱仔孕暫不防;(2)根據(jù)歷年免疫經(jīng)驗、免疫程序和當?shù)貏游镆卟×餍星闆r等進行接種;(3)使用疫(菌)苗前應(yīng)仔細閱讀疫苗使用說明書,嚴謹隨意變更加大或減少,更不得憑經(jīng)驗亂用疫苗。
選擇合適的免疫時間,對免疫效果影響較大。30年防疫經(jīng)驗表明,高溫高熱的夏暑天氣,在給動物免疫接種時易產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。此時接種疫苗,既不容易盡快產(chǎn)生抗體,又會加重熱應(yīng)激,嚴重影響生產(chǎn)力,誘發(fā)各種疾病。因此,免疫接種豬牛羊最好選擇在夏暑季涼爽的早晚,冬春寒冷選擇午暖時進行。刮大風、雨雪天氣突變時應(yīng)停止免疫,待天氣好轉(zhuǎn)時再免。夏季免疫,應(yīng)避免陽光照射和高溫環(huán)境。禽類免疫,最好在夜晚進行,免疫時應(yīng)激小。
二、疫苗的保管和使用
1、疫苗必須按照說明書的規(guī)定嚴格進行保管存放。一般滅活疫苗,或者是液體狀得疫苗,應(yīng)在2--8℃條件下冷藏保存,疫苗不得凍結(jié);弱毒苗或者是呈凍干固態(tài)狀疫苗,應(yīng)在-15m~-20℃條件下保存。無論是滅活疫苗還是弱毒活疫苗,保存的溫度都要恒溫,禁忌忽冷忽熱,切斷電源。包括疫苗在運輸過程中,也需保持相應(yīng)的恒溫,或按疫苗的說明書保存。
2、疫苗在使用前,應(yīng)檢查疫苗的名稱、廠家、批號、有效期、貯藏條件等。仔細查閱使用說明書與瓶簽標示的內(nèi)容是否一致。弄清楚裝量、每頭劑量、使用方法及注意事項,并嚴格遵守。對過期、無批號、失真空及變色、有沉淀或瓶塞松動、瓶身破裂等現(xiàn)象或不明來源的疫苗禁止使用。另外,飼養(yǎng)場戶從動物防疫機構(gòu)(獸醫(yī)站)取用疫苗,須購冰壺、保藏箱,內(nèi)放冰袋或冰塊,保持恒溫。不可隨意裝在衣服口袋、握在手心或拿回家后放在陽臺上等錯誤做法,以防疫苗失效。
3、使用。滅活疫苗在使用前2小時左右從冰柜或冷藏室取出,使用時應(yīng)充分搖勻,在使用過程中應(yīng)保持勻質(zhì)。疫苗啟封后,應(yīng)于24小時內(nèi)用完,過期禁用。凍干茁在使用前需要稀釋,每種疫苗對使用的稀釋劑,稀釋倍數(shù)及方法都有一定的要求,必須嚴格按照規(guī)定處理,稀釋液優(yōu)先使用專用的,無專用的可用生理鹽水或蒸餾水等代替。
疫苗要現(xiàn)配現(xiàn)用,使用注射法免疫時,滅活苗必須當天打開,當天用完。弱毒苗稀釋后,須放置冷暗處,并在2小時內(nèi)用完。
三、接種時的注意事項
接種時應(yīng)備好注射器、針頭、藥棉等,穿戴工作服、口罩、手套、雨鞋等;接種豬時應(yīng)配備套嘴器或二人逮豬保定,以防打飛針。如果是初次免疫豬牛羊,還應(yīng)登記耳標號,待接種后再掛標識牌,并做好檔案登記。
疫苗免疫時,注射用的針頭大小,長短要適中。根據(jù)動物種類大小,選擇合適的針頭。一般凍干苗用7號針頭,油苗用12號針頭。注射疫苗需一畜一針頭。給動物注射過疫苗的針頭,不得再插入疫苗瓶內(nèi)抽吸疫苗,可用一個滅菌針頭,插入瓶塞后固定在疫苗瓶上專供吸疫苗用,每次吸疫苗后針孔用擠干的酒精棉球包裹。注意:吸出的藥液不得再回注到瓶內(nèi)。接種部位最好以3m5%碘酒消毒。注射的劑量要準確,做到不漏注、不空注,接種確實。
1、疫苗劑量。準確掌握免疫時疫苗的劑量,是防疫成敗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在實際防疫工作中,給動物用苗量不足,對免疫效果影響很大。因而有些場戶為了提高免疫效果,采取加大劑量,在一定范圍內(nèi),疫苗接種頭份量越大產(chǎn)生的免疫效果越好。但若劑量過大,同樣可以引起動物的免疫麻痹和耐受。尤其是對于豬瘟免疫,個別人誤認為大劑量注射,1頭豬幾頭份甚至幾十頭傷,以毒攻毒,也未見產(chǎn)生叫顯不良反應(yīng)。進而形成了“注射量多多益善”或“多了比少了好”的錯誤觀點。經(jīng)驗表明:無論是正常免疫還是緊急免疫,大劑量使用豬瘟疫苗均是錯誤的做法,即使免疫后不產(chǎn)生不良反應(yīng),但后續(xù)負效應(yīng)還很嚴重。首先,豬瘟疫苗均是活疫苗,大劑量注射疫苗,無形中就給豬機體內(nèi)注入了大量病毒,就會給健康的豬埋下“潛伏的病原”或加重病豬的疫情。其次,大劑量使用豬瘟疫苗,不僅造成了疫苗的浪費,況且從長遠看,會影響豬瘟病毒的生態(tài)化及機體正常免疫能力的產(chǎn)生,甚至產(chǎn)生“免疫耐受”現(xiàn)象。再次,豬瘟疫苗的生產(chǎn)過程,有時會發(fā)生被牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)污染的情況,這會使疫苗的免疫效能下降,甚至免疫失敗。在這種情況下大劑量使用豬瘟疫苗,必然會增加疫苗對豬體的副作用。此外,大劑量注射豬瘟疫苗,還會造成豬體長時間帶毒,排毒,豬場舍內(nèi)外很難凈化豬瘟。因此,對于豬瘟疫苗的使用,應(yīng)當科學合理,按照實際情況,定量免疫豬瘟疫苗。滅活疫苗采用肌肉或皮下注射,注射時劑量要準確,不漏注。進針要穩(wěn),拔針不宜太快,保證足量的疫苗確實注射到動物的體內(nèi)。
2、接種部位。依據(jù)疫苗說明結(jié)合動物種類的不同,選擇合理的注射部位。皮下注射時,在頸后部下1/3處,針頭向下與皮膚呈45度,避免注射過深。犬、羊一般采用皮下注射。肌肉注射時,注意進針方向和深度,勿把疫苗打在頸椎或脂肪層上。禽類采用飲水、拌料、皮下、肌注、滴鼻、點眼等接種方法;腿部注射時,最好選擇腿外側(cè),內(nèi)側(cè)血管神經(jīng)較多,以防接種后禽的跛行甚至死亡的發(fā)生。
單純皰疹病毒是引起生殖器皰疹最常見的原因。近年來生殖器皰疹發(fā)病率在許多國家不斷上升,成為感染率最高的性傳播疾病之一。據(jù)WHO估計每年生殖器皰疹的新發(fā)病例約2000萬。而臨床上80%HSV感染者表現(xiàn)為無癥狀感染或癥狀未被識別,這是造成HSV感染流行的重要因素。盡管現(xiàn)有的抗病毒藥物應(yīng)用能縮短有生殖器皰疹感染的病程,并且對治療復發(fā)性感染取得一些效果,但這些抗病毒藥物不能有效預防皰疹病毒原發(fā)感染以及控制皰疹病毒潛伏感染和復發(fā)性感染。因此,研制和接種HSV疫苗是預防該病毒感染的理想方法。大量研究表明:在動物模型中,已獲得HSV疫苗能預防病毒原發(fā)感染,并能有效地控制復發(fā)性生殖器皰疹感染的證據(jù)[1]。目前HSV疫苗的研制日益受到人們的重視[2],研究較多的有滅活病毒疫苗、亞單位疫苗、減毒活疫苗、復制受限疫苗、DISC疫苗、活載體疫苗以及DNA疫苗等,現(xiàn)分述如下。
1滅活病毒疫苗
早期的滅活病毒疫苗是利用加熱、化學處理、紫外線照射等方法將接種在雞胚中的HSV病毒滅活制備疫苗?,F(xiàn)在的滅活疫苗是將在細胞中培養(yǎng)的病毒滅活并經(jīng)過一系列的特別純化制成的。滅活疫苗既可用于預防HSV感染,也可用于治療HSV感染。但滅活疫苗存在免疫原性弱、不能誘導機體產(chǎn)生廣泛持久的免疫反應(yīng)、不能確定是否所有病毒均被滅活、裂解的DN段潛在致癌的可能性、生產(chǎn)費用高等缺點[3]。因此,目前歐美一些國家已經(jīng)放棄了對這些疫苗的研制。
2減毒活疫苗
近年來HSV減毒活疫苗的研制主要集中在造成特異性地缺失病毒基因某一區(qū)段,使HSV的神經(jīng)毒性減弱,建立潛伏感染的能力降低,DNA復制障礙等,同時保持病毒的增殖能力和免疫原性這一目標上。
Post和Roizman等以HSV-1型的F株為原型構(gòu)建的HSV減毒活疫苗就是通過刪減決定皰疹病毒毒性的基因片段來制備的。他們首先將胸苷激酶(TK)基因、以及獨特長區(qū)域(UL)、獨特短區(qū)域(US)基因間的連接部分基因切除,目的是去除神經(jīng)毒性相關(guān)基因片段。然后將HSV-2編碼糖蛋白gD,gG,gI的基因片段插入內(nèi)部反向重復序列中,最后,將TK基因重新插入,構(gòu)建的這種重組病毒稱為R7020。在動物和人體內(nèi)均證實R7020能有效地誘導免疫應(yīng)答[4,5]。
Prichard[6]以HSV-2的毒株G為原型,將病毒的γ134.5基因、UL55-56基因、UL43.5基因以及US10-12基因去除,將此構(gòu)建好的重組減毒活疫苗命名為AD472。用HSV野生毒株HSV-2(G)攻擊豚鼠生殖道后,給予減毒活疫苗AD472。結(jié)果顯示,肌肉注射AD472后,可以減少原發(fā)性生殖道感染的發(fā)生,減輕皮損癥狀,減少排毒,同時還可以降低病毒復發(fā)率,表明該重組減毒活疫苗能減少潛伏感染的建立以及能抑制潛伏病毒的再激活,其抗感染作用較強。
ICP10是HSV復制所必需的核糖核苷酸還原酶。Wachsman[7]等將其大亞基蛋白激酶(PK)去除后,評價這種重組復制減毒活疫苗ICP10PK在減少和預防豚鼠生殖器皰疹復發(fā)中的作用。結(jié)果解剖鼠的神經(jīng)節(jié)后,發(fā)現(xiàn)疫苗接種組僅有12%的個體神經(jīng)節(jié)中有病毒潛伏,遠低于對照組(70%),并且疫苗接種組神經(jīng)節(jié)內(nèi)病毒DNA數(shù)量也明顯低于對照組。疫苗接種組鼠HSV原發(fā)感染率為6%,復發(fā)感染率為6%;而安慰劑組鼠HSV原發(fā)感染率為100%,復發(fā)率為70%。以上結(jié)果表明,ICP10PK重組復制減毒活疫苗能保護機體抵抗HSV感染,明顯減少潛伏感染和臨床復發(fā),是一種較好的預防性和治療性疫苗。另據(jù)報道,ICP10PK重組復制減毒活疫苗能激發(fā)HSV特異的CD4+Th1反應(yīng)以及CD8+細胞毒性T淋巴細胞的抗病毒活性,其抗感染能力較強[8]。
但也有報道指減毒活疫苗隱患較多,一方面,重組的HSV病毒經(jīng)過反復的細胞培養(yǎng)后,仍然不能獲得穩(wěn)定的減毒株,減毒活疫苗可能重新獲得病毒毒性;另一方面,減毒的病毒可能會潛伏于病人體內(nèi),有可能會與感染的HSV野生病毒株重組,重新獲得病毒毒性。此外,某些HSV基因也存在致癌的潛在可能。從HSV減毒活疫苗存在的這些缺陷來看,HSV疫苗的發(fā)展趨勢在于活載體基因工程疫苗。
3亞單位疫苗
許多研究采用HSV表面糖蛋白作為免疫原來制作亞單位疫苗。HSV糖蛋白定位于病毒囊膜上,包膜蛋白均為糖基化蛋白,這些糖蛋白產(chǎn)生的免疫應(yīng)答與病毒的中和作用有關(guān)。已發(fā)現(xiàn)的HSV糖蛋白有11種,目前亞單位疫苗研究的熱點在HSV的gB和gD,因為它們均能誘導體液免疫和細胞免疫[9]。在HSV-1和HSV-2感染者體內(nèi),這2種蛋白抗原均較易被抗體識別,激發(fā)遲發(fā)超敏反應(yīng)和T細胞增殖反應(yīng)。gD是抗HSV感染中最重要的保護性抗原,能保護動物免受HSV的攻擊,抑制潛伏感染的發(fā)生。甚至當病毒已經(jīng)在機體建立潛伏感染后,還能降低病毒的復發(fā)率。
早期人們從HSV感染的細胞培養(yǎng)物中分離純化病毒的包膜糖蛋白來制取亞單位疫苗。目前,除了從感染的細胞溶菌產(chǎn)物中分離gB、gD之外,人們還可利用DNA重組技術(shù),在大腸桿菌、酵母、桿狀病毒、哺乳動物細胞等多種表達系統(tǒng)中分別或聯(lián)合表達各種HSV表面糖蛋白,制成亞單位疫苗。以上疫苗分別在動物和人體中進行了試驗,較有意義的結(jié)果主要來自重組亞單位疫苗[10]。動物實驗證實,亞單位疫苗能不同程度地誘導機體產(chǎn)生中和性抗體,抗體產(chǎn)生水平高低與動物遭受病毒感染的程度成正比。該疫苗還可不同程度地降低動物被病毒感染后的發(fā)病率和死亡率。
一種較有前景的亞單位疫苗是由GSK公司生產(chǎn)的HSV-2gD-明礬-MPL疫苗。在早期的實驗中,這種疫苗顯示出較強的免疫原性[11],可誘發(fā)保護性免疫應(yīng)答。當這種疫苗用于HSV復發(fā)感染的豚鼠模型時,能刺激鼠產(chǎn)生γ-干擾素、IL-2等細胞因子。
Roberto[12]等評價了一種以氫氧化鋁作為佐劑的重組gB-gD-gE亞單位疫苗在治療豚鼠復發(fā)生殖器皰疹中的作用。使用病毒攻擊豚鼠建立HSV復發(fā)感染模型后,于豚鼠皮下注射疫苗,1周注射7d,間隔1周再重復接種,連續(xù)5周。以后每隔半個月接種1次,共免疫接種23次。結(jié)果表明,此亞單位疫苗能有效地降低豚鼠HSV-2復發(fā)感染的頻率。按照這種接種方法,在人體接種重組gB-gD-gE亞單位疫苗或許能治療人類復發(fā)生殖器皰疹感染。目前,進一步的實驗正在進行中。
盡管gB和gD是HSV的主要抗原,能引起機體體液免疫和細胞免疫反應(yīng),由于HSV免疫是一個復雜的過程,單憑某種抗原尚不足以建立完全的免疫保護[13]。使用亞單位疫苗,就不可避免面臨窄譜、效果短暫等問題。為此人們正在尋找控制HSV復發(fā)感染的重要免疫效應(yīng)因子以及病毒作用的靶點,以期在未來能開發(fā)出一種高效的治療性疫苗。
4活載體基因工程疫苗
非致病性的活載體基因工程疫苗是把表達HSV-2抗原的基因插入到能完整復制的病毒或細菌載體上。HSV活載體基因工程疫苗兼具了減毒活疫苗和亞單位疫苗的優(yōu)點,同時它能避免HSV的毒性、潛伏性、活化以及致癌性等問題。目前人們研究的非致病性復制載體包括:牛痘病毒、腺病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、腺相關(guān)病毒、沙門氏菌[14,15]等。在免疫接種時,這些病毒或細菌的載體能表達具有免疫原性的蛋白,并且相關(guān)基因編碼產(chǎn)物能誘導體液免疫以及細胞免疫。
在眾多載體中,最令人感興趣的是腺病毒載體。其獨特優(yōu)勢在于腺病毒基因組內(nèi)有2個能插入外源基因的功能區(qū)域,第一個位于基因組的左側(cè),稱為E1區(qū),此區(qū)域是腺病毒復制必需區(qū)。第二個是E3區(qū),該區(qū)是腺病毒復制非必需區(qū)。Gallichan[14]等用表達HSVgB的重組腺病毒作為活疫苗在鼠鼻腔內(nèi)接種后,產(chǎn)生局部黏膜免疫,并能有效抵抗HSV的致死劑量攻擊。血清中IgG和IgA抗體水平較高,且從小鼠的陰道洗液中能檢出IgA抗體,說明該疫苗局部免疫效果較好。這個突出的特點使得腺病毒載體疫苗有望能成為有效的預防性疫苗之一。Clement[16]等利用同源重組技術(shù),將HSV-2胸苷激酶的基因插入到細菌人工染色體(BAC)序列中,將來自于感染細胞內(nèi)的重組病毒DNA轉(zhuǎn)染大腸桿菌,當再次轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞時,HSV2-BACDNA具有感染性,而目的病毒胸苷激酶為陰性。將構(gòu)建好的HSV2-BACDNA疫苗接種于鼠體內(nèi),能誘發(fā)較強的HSV-2特異性抗體反應(yīng),且該疫苗能保護鼠免遭HSV致死劑量攻擊。該實驗結(jié)果表明,使用BAC載體構(gòu)建HSV-2疫苗是一種新穎的技術(shù),未來有望將這種技術(shù)應(yīng)用于分析HSV-2的免疫效應(yīng),其開發(fā)前景較好。
5復制受限或復制缺損的突變疫苗
這種方法結(jié)合了減毒活疫苗以及滅活疫苗的某些優(yōu)點。制備方法是將病毒復制必需基因部分去除后,缺陷性病毒疫苗在經(jīng)過遺傳改造過的細胞株里生長,以構(gòu)成性地表達缺失的基因產(chǎn)物[1]。子代病毒缺乏必需基因產(chǎn)物,因而沒有傳染性。研究表明,在動物實驗中,這種疫苗具有抗HSV原發(fā)感染作用[17]。Forrester等研制出一種新穎的HSV疫苗,研究者將gH基因從HSV病毒基因組中剔除出去。由于介導HSV進入細胞的糖蛋白是gH,如果缺失了表面gH的基因后,病毒在宿主細胞中能完成一個完整的復制周期,但其釋放出來的子代病毒由于缺乏gH而不具備感染性。這種病毒稱之為非感染性單周期(DISC)病毒。該種缺陷突變病毒除了不能表達gH蛋白以外,并不影響其它HSV蛋白質(zhì)的表達。一項實驗顯示。使用gH缺失的DISC疫苗后,能預防HSV感染,而初次皮損后使用該種疫苗,其復發(fā)率明顯降低。目前,第一期的臨床試驗[18]顯示,這種疫苗安全,免疫原性較強。
6DNA疫苗
DNA疫苗,作為20世紀90年代興起的一種以核酸為基礎(chǔ)的全新免疫接種技術(shù),為疫苗的研制開辟了新的途徑。DNA疫苗主要是將病毒的編碼基因插入質(zhì)粒DNA中,直接接種于機體后,能在體內(nèi)表達相應(yīng)的病毒蛋白,并誘導機體產(chǎn)生特異性的體液免疫及細胞免疫反應(yīng)[19,20]。因為蛋白抗原在體內(nèi)源源不斷地產(chǎn)生,故免疫時間長。它具有活載體免疫的某些優(yōu)點,能克服由非復制性抗原所誘導的細胞免疫效果較低等難題,并且不用擔心病毒的減毒作用等問題。因而,即使沒有有效的佐劑,這種疫苗也能誘導強的細胞免疫。
目前,研究得最多的HSVDNA疫苗是HSV-2gD疫苗以及gBDNA疫苗。豚鼠生殖器皰疹動物模型實驗表明,與對照組相比,這2種疫苗的免疫原性強,不但能預防HSV原發(fā)感染、明顯減少病毒在陰道內(nèi)的復制,而且能減少病毒的潛伏感染,并且臨床復發(fā)率也明顯降低[21]。x
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原文鏈接:/html/yaoxue/20090203/27830.html隨著分子生物學和分子克隆技術(shù)的發(fā)展,人們研制HSVDNA疫苗的技術(shù)越來越多,思路也越來越廣?,F(xiàn)將近年來HSVDNA疫苗研制的進展分述如下:
多效價DNA疫苗的研制:Hyung[22]等構(gòu)建了HSV-2gB2、HSV-2gD2以及HSV-2gB2:gD2三種DNA疫苗,比較了它們的免疫原性和保護作用。結(jié)果顯示:HSV-2gB2:gD2DNA疫苗誘發(fā)的中和抗體滴度明顯高于gB2及gD2組的抗體滴度。并且此二價DNA疫苗對HSV致死劑量攻擊的保護作用也比單用gB或gDDNA疫苗效果要好。同時,它所誘導的CTL細胞毒性效應(yīng)也比其余2種單效價疫苗要強。
重組質(zhì)粒DNA疫苗的研制:細菌來源的質(zhì)粒DNA含有大量非甲基化的以CpG為核心的核苷酸序列,這些核苷酸序列能通過多種途徑活化細胞因子如:γ-干擾素、IL-l2、IL-18等。Domingo[23]等將編碼HSV-2gB、gD兩種蛋白的序列嵌合于質(zhì)粒DNA后,免疫BALB/c鼠,發(fā)現(xiàn)小鼠分泌的γ-干擾素的水平增加,并且生存時間比單獨用gB或gD編碼序列與質(zhì)粒共構(gòu)建的DNA疫苗來免疫小鼠的生存時間更長。這些結(jié)果提示了使用質(zhì)粒DNA編碼HSV蛋白質(zhì)嵌合序列以制成DNA疫苗的效果比質(zhì)粒編碼單個蛋白質(zhì)序列制成的DNA疫苗效果好。利用這種方法,未來我們有望能研制出多價DNA疫苗以抗HSV感染,并為防治其它病原體的感染開辟新的途徑。Sara[24]等設(shè)計了一種HSV-2gDDNA疫苗,使用CPG-寡聚脫氧核苷酸即(CPGODN)作為該疫苗的佐劑以增強其免疫原性,免疫C57Bl/6鼠。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該疫苗誘發(fā)了較強的抗HSV感染的免疫反應(yīng)。并且小鼠體內(nèi)IgG2c的水平較高,而IgG2c在C57Bl/6鼠體內(nèi)是一種Th1型免疫反應(yīng)的指示劑。并觀察到多種細胞因子如γ-干擾素、IL-2、IL-4等在體內(nèi)高水平地表達。
細胞因子為佐劑的DNA疫苗研制:SLee[25]等選擇了包括能編碼γ-干擾素的T細胞、NK細胞以及IgG2a同型免疫球蛋白在內(nèi)的細胞因子基因與質(zhì)粒DNA共同接種動物。結(jié)果表明,該疫苗能提高機體體液免疫以及T細胞的免疫應(yīng)答,并能降低小鼠HSV感染的發(fā)病率。而對細胞因子作為DNA疫苗佐劑的作用效果進行分析時發(fā)現(xiàn),IL-18的作用效果優(yōu)于IL-12,且系統(tǒng)接種效果優(yōu)于黏膜接種效果。同時,用該疫苗免疫IFN-γ-/-鼠后,該鼠對于病毒的攻擊仍然較為敏感。這表明了疫苗的保護作用主要來自于其誘導產(chǎn)生的γ-干擾素。而γ-干擾素抗HSV感染的作用主要來自于CD4+T細胞和CD8+T細胞。在HSV抗原和抗原遞呈細胞的共同刺激下,這兩種細胞均產(chǎn)生大量的γ-干擾素[20,26]。以上結(jié)果表明,聯(lián)合使用能編碼細胞因子的DNA,其預期效果較為理想,開發(fā)前景較好。
黏附分子LFA-3為佐劑的DNA疫苗研制:T細胞表面的黏附分子如CD2能識別抗原遞呈細胞表面的細胞間黏附分子LFA-3。Jeong[27]等將LFA-3的cDNA與gD質(zhì)粒共接種于小鼠體內(nèi),觀察該疫苗的免疫調(diào)節(jié)作用以及抗HSV-2感染的保護作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),該疫苗能提高血清中g(shù)D特異性的IgG水平。此外,LFA-3還可以使Th細胞的增殖反應(yīng)提高,并且使脾細胞產(chǎn)生IL-2、γ-干擾素、IL-4、IL-10的數(shù)量增多。當用HSV致死劑量攻擊小鼠后再使用該疫苗,能明顯提高動物的生存率。該研究表明,黏附分子LFA-3能調(diào)控HSV感染鼠的抗原特異性免疫應(yīng)答,這種調(diào)控作用是通過誘導CD4+Th1T細胞亞群增殖反應(yīng)來實現(xiàn)的。
CCR7配體為佐劑的DNA疫苗研制:CCR7配體SLC和ELC,近年來被認為是在二級淋巴組織中建立功能性細胞微環(huán)境以啟動免疫反應(yīng)的關(guān)鍵分子。Eo[28]等把編碼gB以及CCR7配體的質(zhì)粒DNA通過系統(tǒng)給藥和黏膜給藥兩個途徑免疫BALB/c鼠,以觀察不同給藥途徑的免疫效果。系統(tǒng)性地同時給予CCR7兩種配體,可以提高血清中g(shù)B特異性的IgG水平,而陰道以及皮膚黏膜IgA的水平并無明顯改變。與此相反的是,通過黏膜免疫可以顯著提高黏膜IgA水平,而不影響血清IgG水平。同時,CCR7配體還能提高T細胞介導的免疫反應(yīng)。尤其令人感興趣的是,SLC能使脾產(chǎn)生Th1型細胞因子(如IL-4以及γ-干擾素)的數(shù)量增多;而ELC能使脾產(chǎn)生Th-1型和Th2的細胞因子(如IL-4)的數(shù)量增多(P均<0.05)。此外,共接種CCR7配體疫苗后,研究者觀察到鼠二級淋巴組織中樹突狀細胞的數(shù)量明顯增加。這些結(jié)果顯示出,在核酸疫苗抗細胞感染以及抗癌治療中,CCR7配體可能是一種有用的佐劑。
由此看出,DNA疫苗抗感染作用較強,抑毒作用明顯,具有廣闊的開發(fā)前景。
綜上所述,盡管從20世紀20年代起,人們就已經(jīng)開始研制HSV疫苗,但由于HSV感染是一個復雜的過程,而且涉及到病毒的免疫逃逸等分子機制,導致體內(nèi)的病毒不能徹底清除,潛伏在感覺神經(jīng)節(jié)的病毒隨時可被激活,從而成為臨床上比較棘手的問題。目前所獲得的HSV疫苗并不能完全阻止HSV感染,但對控制原發(fā)感染和復發(fā)感染有一定的作用,在一定程度上能降低疾病傳播的危險性。大量實驗表明,抗HSV感染需要機體的體液免疫、細胞免疫、黏膜免疫的參與。相信隨著人們對HSV致病機制、病毒免疫逃逸的分子機制等進一步闡明,人們將能研制出有效的針對持續(xù)性HSV感染的預防性疫苗和治療性疫苗,并為其它皰疹病毒疾病的治療開辟新的途徑。
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關(guān)鍵詞:小反芻獸疫;病毒;疫苗
中圖分類號:S851.2 文獻標識碼:B 文章編號:1007-273X(2014)07-0063-02
收稿日期:2014-06-14
作者簡介:卯 嶺(1988-),男,貴州威寧人,助理獸醫(yī)師,主要從事農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣工作。
小反芻獸疫(Pestedes petits ruminants,PPR) 俗稱羊瘟,是由小反當獸疫病毒Pestedes petits ruminantsvirus,PPRV)引起的一種急性病毒性傳染病,主要感染小反芻動物,以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征[1]。羊高度易感,牛、豬等動物也可以感染帶毒,野生動物偶有發(fā)生。該病具有高發(fā)病率和死亡率,對畜牧業(yè)構(gòu)成嚴重的威脅。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為A類傳染病,在我國列為一類動物疫病。
1 病原學研究
1.1 病毒的生物學特性
小反芻獸疫病毒(PPRV)屬于副粘病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒屬,該病毒屬于囊膜病毒,病毒顆粒外被厚約8.5~14.5 nm的囊膜,囊膜上有兩種纖突糖蛋白。病毒核衣殼由白(N)和磷蛋白(P)組成,呈螺旋對稱,螺旋直徑約為18 nm,螺距為5~6 nm,總長度約為1 000 nm。另外還有囊膜基質(zhì)蛋白(M)、纖突糖蛋白(F)和H蛋白[2]。PPRV可以在MDBK、BHK21、Vero細胞上繁殖,同時也可以在山羊或綿羊的胎腎、人羊膜、犢牛腎和猴腎的原代或傳代細胞上生長繁殖,并且會出現(xiàn)細胞病變(CPE),一般會在接種細胞后1~2周才會看到病變。
1.2 病毒分子生物學特性
PPRV的基因組為不分節(jié)段的單股負鏈RNA, 分別編碼 6 種結(jié)構(gòu)蛋白和 2 種非結(jié)構(gòu)蛋白,依次是核衣殼蛋白(N)、磷蛋白(P)、基質(zhì)蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素蛋白(HN)、大蛋白(L)和 C、V 非結(jié)構(gòu)蛋白。
N 蛋白由 N 基因含有的惟一1個開放閱讀框編碼的 525 個氨基酸殘基組成,分子質(zhì)量大小約為 57.7 kU,在病毒中含量最高,是核衣殼的主要組成蛋白。N蛋白有4個主要的區(qū)域:氨基末段和蛋白中部I、Ⅲ的保守區(qū)以及易變異的Ⅱ區(qū)、Ⅳ區(qū)(C端)。N蛋白的主要作用是保護病毒RNA免受核糖核酸酶I的破壞,與RNA結(jié)合作為病毒轉(zhuǎn)錄的模板,被認為在病毒的復制和轉(zhuǎn)錄中起主要的作用[3]。
P 基因含有 3 個開放閱讀框,編碼的蛋白分子質(zhì)量約為 54.9 kU,含有 509 個氨基酸, 它能與 N 和 L 蛋白連接,作為分子伴侶使 N 蛋白保持可溶狀態(tài)與 RNA 相連,同時是轉(zhuǎn)錄復合物的輔助因子。由于 P 蛋白屬于酸性蛋白并且具有較多的蘇氨酸和絲氨酸,能為轉(zhuǎn)錄后磷酸化提供較多的潛在位點,而這種磷酸化作用能增加整個分子的負電荷和分子大小,因此會造成 P 蛋白在聚丙烯凝膠電泳中的異常遷移。
M 蛋白位于病毒囊膜的內(nèi)側(cè),序列具有高度的保守性,分子質(zhì)量約為 38 kU。M 蛋白在成熟病毒粒子從細胞內(nèi)釋放的過程中起著關(guān)鍵性的作用,病毒缺失 M蛋白后就失去了感染細胞的能力。有研究表明 M 蛋白是以蛋白中部的 C 端和病毒囊膜相結(jié)合的.
F 蛋白又稱融合蛋白,是病毒表面的一種糖蛋白,屬于一型糖蛋白,含有 546個氨基酸,分子質(zhì)量約為 59.31 Ku。F 蛋白能夠誘導細胞病變,導致細胞產(chǎn)生溶血素、細胞融合和啟動病毒感染,決定病毒感染的成功與否。
H 蛋白又稱吸附蛋白,是 PPRV 表面的另一種糖蛋白,由 609 個氨基酸組成,分子質(zhì)量為 70 Ku,是最不保守的蛋白。H 蛋白具有血凝素,含有 T 細胞決定簇,與宿主細胞的特異性有關(guān)。
L 蛋白主要是通過 P 蛋白與病毒的轉(zhuǎn)錄、復制模板復合體 N-RNA 相互作用,從而構(gòu)成白復合體,用來形成病毒的mRNA。
C 和 V的形成是由于 P 基因的閱讀框經(jīng)移碼后造成的非結(jié)構(gòu)蛋白。C 蛋白是最小的蛋白,V 蛋白可在干擾素通路和轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮作用。
1.3 病毒致病機理
該病毒先通過口、咽上呼吸道上皮或扁桃體進入體內(nèi),在局部淋巴結(jié)增殖,減弱淋巴細胞的免疫力,進而擴散到淋巴組織中,之后經(jīng)血液循環(huán)到達全身各處淋巴結(jié)、腸黏膜、呼吸道黏膜 ,導致淋巴組織壞死,免疫功能下降,最終引起繼發(fā)感染和支氣管肺炎。病毒粒子在 H 和 F 蛋白的協(xié)助下將核衣殼注入靶細胞,最終使病毒粒子與靶細胞融合。在病毒復制過程中需要多種聚合酶和復制酶,這些復制酶對病毒自身的 L 蛋白或其他多種新的蛋白有依賴作用,同時病毒的復制過程還包括 mRNA翻譯病毒多肽或蛋白的過程[4]。
2 小反當獸疫疫苗研究進展
目前該病尚無有效治療方法,發(fā)現(xiàn)病例應(yīng)嚴密封鎖疫區(qū),撲殺患畜,隔離消毒。對PPR的控制主要依靠疫苗,現(xiàn)有疫苗及免疫方法很多,效果差異也很大。
2.1 牛瘟弱毒疫苗
由于 PPRV 和牛瘟病毒(RPV) 之間的抗原相關(guān)性很強[5],可用牛瘟 (RP) 組織培養(yǎng)的弱毒疫苗對綿羊、山羊進行免疫,產(chǎn)生的抗 RP 抗體能夠很好的抵抗 PPR 野毒株的攻擊,但是這種方法不利于全球牛瘟消滅計劃的實施。其主要缺點是:免疫動物僅產(chǎn)生抗 RPV 的中和抗體,而沒有抗 PPRV 的中和抗體。RPV和 PPRV H 基因序列分析表明,兩種病毒 H 蛋白氨基酸的同源性不足 60%,而相對比較保守的 F 蛋白同源性為 80%。因此,RPV 弱毒疫苗抗 PPR 的保護作用,可能由 F 蛋白提供,而該蛋白主要誘導細胞免疫應(yīng)答。此外,RPV 弱毒疫苗免疫動物,用 PPRV 攻擊感染后,抗 PPRV 中和抗體呈升高態(tài)勢。這表明 PPRV 在免疫動物體內(nèi)有短暫的復制過程,存在散毒可能性。
2.2 PPRV 弱毒疫苗
通過 Vero 細胞的連續(xù)傳代,成功研制了 Nigeria 75/1 PPR弱毒疫苗,該苗無任何副作用。由于 PPRV 對熱高度敏感,致使 Nigeria 75/1 疫苗的穩(wěn)定性很差,不利于基層的運輸和使用。
2.3 PPR 滅活疫苗
用感染山羊的病理組織可制備同源的PPR滅活疫苗。但是,甲醛滅活的疫苗效果不佳,而用氯仿滅活制備的疫苗免疫山羊后血清抗體可以持續(xù)8個月。
2.4 重組亞單位疫苗
利用疹病毒屬的表面糖蛋白具有良好的免疫原性,重組桿狀病毒表達的 HN 蛋白能刺激機體產(chǎn)生體液和細胞介導的免疫應(yīng)答,產(chǎn)生的抗體能中和 PPRV 和 RPV。國外學者在大腸桿菌中分別過表達了 PPRV 和 RPV的 N 蛋白,在無病毒 RNA 存在的情況下,能裝配成類似于病毒的核衣殼。純化的重組病毒核衣殼單劑量、無佐劑時即可誘導小鼠產(chǎn)生很強的抗原特異性 CTL免疫應(yīng)答,而且 PPRV 和 RPV 間可交叉反應(yīng)。
2.5 嵌合體疫苗
應(yīng)用反向遺傳技術(shù)制備RP/PPRV嵌合體疫苗,即用PPRV的糖蛋白基因替代RPV疫苗表面相應(yīng)的糖蛋白基因。這種疫苗不僅對PPRV具有良好的免疫原性,而且免疫動物血清中無特異的RP病毒ELISA抗體。
2.6 活載體疫苗
國外學者將 PPRV 的 F 基因插入羊痘病毒的 TK 基因編碼區(qū),構(gòu)建了重組羊痘病毒疫苗 recCapPPR/F,該重組病毒可抵抗 PPRV 強毒的攻擊感染,同時也能預防羊痘病毒的感染。重組羊痘活載體疫苗應(yīng)是小反芻獸疫疫苗新的發(fā)展方向。
2.7 RNA 干涉技術(shù)
通過合成的小干擾 RNA(siRNA)作用于 N 蛋白基因的兩個區(qū),導致病毒復制減少了 80%以上,通過實時定量 PCR 檢測病毒 RNA、流式細胞儀測定病毒蛋白的產(chǎn)生、CPE 評價病毒粒子的產(chǎn)生和測定病毒滴度評價 siRNA 對PPRV 復制的影響,證明 siRNA 分子有發(fā)展為 PPRV 和 RPV 治療劑的潛力[5]。
3 小結(jié)
PPRV 主要感染山羊和綿羊等小反芻獸,但是不同品種的羊敏感性有顯著差別。山羊比綿羊更易感,幼齡動物易感性較高,哺乳期的動物抵抗力較強。另外,豬和牛也可以感染 PPRV,但通常無臨床癥狀,也不能夠?qū)⑵鋫魅窘o其他動物。一直以來小反芻獸疫的防治問題都沒有得到很好地解決,目前,我國的羊群的疫情監(jiān)測及防治技術(shù)與發(fā)達國家相比還有很大的差距,很多疫苗和標準化試劑盒還是沿用國外產(chǎn)品,因此要求加強對PPR免疫機理和PPR疫苗的研究工作,加強PPR的防治與疫情監(jiān)測技術(shù)的研究工作,開發(fā)出安全、有效、實用的疫苗及建立快速標準化檢測手段顯得十分重要。
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關(guān)鍵詞:動物咬傷者 狂犬病 護理分析
【中圖分類號】R47 【文獻標識碼】B 【文章編號】1008-1879(2012)02-0141-01
狂犬病是由狂犬病毒所致的人和動物都可能罹患的急性傳染病,狂犬病一旦發(fā)生,因為臨床上還沒有非常有效的治療手段,死亡率幾乎可以接近100%,是目前世界上死亡率最高的一種疾?。?]。近幾年,由于養(yǎng)狗及家養(yǎng)寵物的數(shù)量逐漸增多還有對犬和貓等寵物的管理還不夠嚴格,而且我們國家對防治狂犬病的知識普及還不夠,導致我國這五年來狂犬病的發(fā)病率連續(xù)上升。根據(jù)衛(wèi)生部的相關(guān)資料統(tǒng)計,直至2003年因狂犬病而死的病死率已經(jīng)位居其他傳染病的首位[2]。為了研究護理處置在預防狂犬病發(fā)生中的重要作用,我們對這些年在使動物咬傷者不發(fā)生狂犬病的護理經(jīng)驗做了相應(yīng)的總結(jié),現(xiàn)將相應(yīng)的護理分析概括如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料。
2006年至2011年7月來我院接種門診就診的1150例動物咬傷者,1150例動物咬傷者中男性610例,女性540例;各年齡組均有,年齡最小的4歲,最大的76歲,高發(fā)的年齡組為65歲以上和18歲以下,共占70%。
1.2 方法。
1.2.1 傷口處理。
對傷口進行及時徹底的清洗是預防狂犬病發(fā)生的重要手段。被動物咬傷后,不管多小多淺的傷口,都有感染狂犬病的可能性,同時也可能被破傷風病毒感染,而且傷口容易化膿,為了預防感染且減少對毒物的吸收必須做到以下的處理:第一,立即擠壓傷口將帶毒液的污血排出體外或者可以用火罐將污血拔出,但是絕對不可以用嘴去接觸污血,否則容易發(fā)生第二次感染;第二,用1%的新潔樂或者20%的肥皂水對傷口進行徹底的清洗,再用清水洗凈,而且清洗時間不得少于15 min,接著用2%-3%的碘酒或者75%的酒精對傷口局部進行消毒;第三,局部的傷口原則上是不需要縫合、包扎的,也不需要涂抹軟膏和粉劑,這樣有利于傷口的排毒。對于傷及大血管的重癥患者則需要嚴密監(jiān)測傷口的出血以及局部的血液循環(huán)和感覺等情況。同時嚴密監(jiān)測生命體征的變化(包括患者的意識、脈搏、呼吸、體溫、貧血征象、血壓、尿量、用藥以及吸氧等),并做好詳盡的觀察記錄,同時進行對癥處理。若傷到大血管,在包扎縫合的時候,需要以不影響引流,且必須保證充分的清洗和消毒,在傷口的底部和周圍用狂犬病的免疫血清或者免疫球蛋白做浸潤注射,經(jīng)過以上的處理后就可以進行稀疏縫合了;第四,如果四肢腫脹可以將患肢抬高,在進行每項護理和治療時,必須保證動作輕柔、準確,以防止粗暴的動作加重或者引起患者的疼痛,同時要注意預防細菌及破傷風的感染,必要時可以加用抗生素和破傷風毒素。
1.2.2 疫苗接種。
狂犬病疫苗含有一定的滅活的狂犬病病毒,可以刺激人體產(chǎn)生抵抗狂犬病病毒的免疫力從而達到預防狂犬病的目的。而且狂犬病疫苗可用于任何人群,包括妊娠期、哺乳期的女性、新生兒、嬰兒、兒童、老年人以及同時患有其他疾病的病人等都可以接種狂犬病疫苗。同時不管傷人的動物是不是狂犬病動物,都應(yīng)該盡早接種狂犬病疫苗。
對于狂犬病疫苗的接種,每次接種都要變換部位,將疫苗充分的搖勻且需要緩慢的注射,可以防止發(fā)生局部的注射反應(yīng)。為了預防動物咬傷者忘記接種的日期,護理人員可以在留存的接種記錄單上記下病人的聯(lián)系方式,督促傷者將疫苗的接種全程足量按時完成。我們在1150例動物咬傷者的接種過程當中沒有一例漏種現(xiàn)象出現(xiàn)。
1.2.3 心理護理。
有許多患者因為知識的缺乏,對狂犬病的認識還不夠加之對經(jīng)濟問題的擔心,容易產(chǎn)生情緒焦慮和恐懼心態(tài),產(chǎn)生情緒焦慮者占67.4%,因為在近年來狂犬病例逐年上升,而且死亡率較高,使人們在被咬傷后產(chǎn)生明顯的恐懼感,致使患者精神不振,心跳加速,食欲不振,睡眠不好者占41.8%[3]。針對這種心理方面的障礙,我們需要及時介紹狂犬病疫苗的防治知識,加強患者對狂犬病疫苗的正確認識,將患者的顧慮情緒徹底的消除。使患者以最好的心理狀態(tài)來接受和配合治療,以取得最好的療效。
1.2.4 飲食護理。
患者在免疫接種期間,應(yīng)該清淡飲食,不能喝濃茶、咖啡、酒等具有刺激性的食物以及免疫抑制劑等藥物以預防影響免疫應(yīng)答或者引起注射反應(yīng),同時向患者解釋影響免疫應(yīng)答的后果,使患者自覺接受合理的飲食。
另外,我們還加強了狂犬病相關(guān)知識的宣教,用通俗易懂的話語向病人的家屬說明狂犬病的傳染源、傳播途徑、治療措施、預后以及進行自身防護的辦法,使患者的家屬了解只要預防措施到位,就不會患狂犬病,同時使他們了解,他們的態(tài)度會直接影響病人的態(tài)度,同時影響治療效果?;颊呒覍僭谥委熎陂g也發(fā)揮了非常重要的作用。
2 結(jié)果
通過以上一系列的嚴格的護理處置,這1150例來我院就診的動物咬傷者均未發(fā)生狂犬病,可見合理嚴格的護理處置對預防動物咬傷者發(fā)生狂犬病有非常重要的作用。
3 討論
眾所周知,狂犬病是一種可以預防但是不能治療的疾病。從預防的角度來說,保護易感人群和控制傳染源在狂犬病的防治中占有非常重要的地位,那么護理人員的干預作用就不可忽視,從社區(qū)到臨床,她們扮演著宣傳者、督促者、咨詢者等身份,對養(yǎng)犬密度大的農(nóng)村和高危人群,開展預防及宣傳,普及狂犬病的相關(guān)知識,大大的降低了狂犬病的發(fā)病率[4]。根據(jù)多年的工作經(jīng)驗以及結(jié)合大量的文獻報道,我們對狂犬病的發(fā)病原因進行了全面的分析,得出凡是經(jīng)過徹底的清洗并且及時足量全程接種過合格的狂犬疫苗的動物咬傷者都未發(fā)生狂犬病,暴露后處理方式不合理和沒有接受規(guī)范的疫苗接種是免疫失敗的一個非常重要的原因。通過以上的研究證明:全面的規(guī)范的護理處置,完全可以杜絕狂犬病的發(fā)生。
參考文獻
[1] 顧衛(wèi)紅.狂犬病暴露后的護理及處置[J].中外醫(yī)療,2008,36:146
[2] 李芳美.狂犬病的預防護理[J].實用預防醫(yī)學,2010,17(6):1232-1233