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【關(guān)鍵詞】 Toll樣受體4;轉(zhuǎn)錄因子-κB;妊娠期高血壓疾病
[Abstract] Objective To detect Toll-like receptor 4 and NF-κB in the placenta in order to evaluate the relationship of Toll-like receptor 4 and NF-κB with hypertensive disorder complicating pregnancy.Methods The expression of Toll-like receptor 4 and NF-κB in 20 normal pregnant women(the control group )and 40 hypertensive pregnant women(the study group),encluding 10 patients with gestational hypertension and 30 patients with preeelampsia placenta was detected by immunohistochemistry.Results The Toll-like receptor 4 and NF-κB expression levels in PE group were all significantly higher than those in normal pregnant group (P
[Key words] Toll-like receptor 4; nuclear factor-kappa B; hypertensive disorder complicating pregnancy
妊娠期高血壓疾病是影響母兒圍生期病率和死亡率重要原因之一,妊娠期高血壓疾病的病因及發(fā)病機(jī)制至今未完全闡明。近年來研究發(fā)現(xiàn)妊娠期高血壓疾病與炎性細(xì)胞因子有關(guān),而Toll樣受體(toll like receptors,TRLs)是聯(lián)系固有免疫與適應(yīng)性免疫的紐帶,是激活相關(guān)細(xì)胞的NF-κB分泌炎癥介質(zhì)的閘門受體,其中TLR4在這個過程中起著關(guān)鍵的作用[1] 。本文旨在探討妊娠期高血壓疾病胎盤組織中TLR4和NF-κB的表達(dá)及意義。
1 資料與方法
1.1 研究對象 選擇2006年6月-2007年6月在我院住院分娩的妊娠期高血壓疾病患者40例,其中妊娠期高血壓10例,子癇前期輕度15例,重度15例。平均年齡(27.9±3.2)歲,平均孕周為(268.3±24.0)天。妊娠期高血壓疾病的診斷及分類標(biāo)準(zhǔn)參照樂杰主編《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版為標(biāo)準(zhǔn)。隨機(jī)選取同期住院分娩的健康足月孕婦20例為對照組,平均年齡(28.8±1.7)歲,平均孕周為(276.5±5.9)天。各組均無其他產(chǎn)科并發(fā)癥及妊娠合并癥。兩組孕婦年齡及孕周比較,差異無顯著性(P>0.05)。
1.2 方法 胎盤娩出后,立即取胎盤母體面中央絨毛組織約1.0cm×1.0cm×1.0cm大小、無鈣化的胎盤組織。用生理鹽水沖掉血液,然后置于4%的多聚甲醛中固定24h,低溫石蠟包埋,4μm連續(xù)切片,進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色(SABC法)。
1.3 試劑 TLR4及NF-κB免疫組化染色試劑盒及DAB染色試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司,具體操作方法嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。
1.4 結(jié)果判定 TLR4及NF-κB以鏡下在細(xì)胞胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒, 用乳腺癌陽性片做陽性對照,PBS液代替一抗做陰性對照。由兩個觀察者對切片進(jìn)行盲式閱片,顯微鏡下隨機(jī)選擇5個視野,觀察所選擇的高倍鏡視野中的所有滋養(yǎng)細(xì)胞,記錄陽性染色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(%)并計(jì)分。陰性:小于5%的胎盤細(xì)胞呈陽性或無著色,計(jì)0分;弱陽性:5%~10%的胎盤細(xì)胞呈陽性,計(jì)1分;陽性:11%~50%胎盤細(xì)胞呈陽性,計(jì)2分;強(qiáng)陽性:大于50%的胎盤細(xì)胞呈陽性,計(jì)3分。細(xì)胞著色強(qiáng)度則以陽性細(xì)胞呈現(xiàn)的染色(棕黃色)計(jì)分:強(qiáng)著色:著色和已知陽性片同樣強(qiáng)度,計(jì)3分;淺著色:著色淺,但與陰性對照片有明顯區(qū)別者,計(jì)1分;染色強(qiáng)度在淺著色和強(qiáng)著色之間者為中等著色,計(jì)2分;將陽性百分?jǐn)?shù)計(jì)分和細(xì)胞染色計(jì)分相加為免疫組化積分。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,分析所有數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī),用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理。對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性分析后。臨床資料采用t檢驗(yàn)P
2 結(jié)果
2.1 TLR4及NF-κB在各組胎盤組織中的表達(dá) 在正常妊娠組及妊娠期高血壓疾病組的胎盤組織中均有一定表達(dá),正常妊娠胎盤組織中的TLR4及NF-κB的陽性染色主要位于合體滋養(yǎng)細(xì)胞(見圖1及圖2); TLR4及NF-κB在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達(dá)定位與正常妊娠晚期胎盤組織的表達(dá)定位相同(見圖3及圖4),但在子癇前期輕度、子癇前期重度組與正常妊娠組比較,胎盤組織NF-κB含量逐漸升高,見表1。
2.2 各組胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞TLR4及TLR4表達(dá)的免疫組化積分 見表1。子癇前期輕度組、子癇前期重度組與正常晚期妊娠組比較,差異有顯著性(P
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3 討論
妊娠期高血壓疾病是妊娠特有的疾病。妊娠是一種成功的半同種移植現(xiàn)象,其成功有賴于母胎間免疫平衡。大量研究顯示,妊娠期高血壓疾病的發(fā)生與免疫系統(tǒng)的變化關(guān)系密切,妊娠期間非特異性免疫功能增強(qiáng),非特異性免疫是通過炎性細(xì)胞因子發(fā)揮作用的。Medzhitov等[2]研究發(fā)現(xiàn)妊娠期間非特異性免疫反應(yīng)過度激活可引起PE, PE患者體內(nèi)存在某種因素激活單核-巨噬細(xì)胞,將造成炎性細(xì)胞因子的大量釋放, 異常的滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入,損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞及腎損害等,研究表明TLR4在這個過程中起著關(guān)鍵的作用。
Toll樣受體是參與固有免疫的一類古老的蛋白質(zhì)家族,TLRs在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要的作用,是激活相關(guān)細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)的閘門受體,是聯(lián)系固有免疫與適應(yīng)性免疫的紐帶。1997年Medzhitov等[3]發(fā)現(xiàn)了第一個存在于人細(xì)胞表面的Toll樣蛋白,稱Toll樣受體。目前在人體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)10余個Toll樣受體家族成員,其中與內(nèi)毒素信號傳導(dǎo)有關(guān)的主要為TLR4。TLR4啟動的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)最終激活NF-κB,誘導(dǎo)單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生前炎性細(xì)胞因子,如IL-1b、IL-6、 TNF-α等。盡管PE的發(fā)病機(jī)制不清,但胎盤來源的炎癥性細(xì)胞因子導(dǎo)致了PE的血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,這一結(jié)論已經(jīng)得到公認(rèn)。Holmlund等[4]對正常足月妊娠胎盤免疫組化研究,證明其中有TLR4的表達(dá)。Abrahams等[5]提出TLRs在介導(dǎo)母胎之間天然免疫中起重要作用。2005年Kim等[6]用免疫組化法研究了胎盤中的TLR4的結(jié)果相似,這一結(jié)果證實(shí)了TLR4與PE關(guān)系密切。
本研究采用免疫組化法檢測妊娠期高血壓疾病患者和正常妊娠晚期婦女胎盤組織中TLR4及NF-κB蛋白表達(dá)情況,結(jié)果提示TLR4及 NF-κB在PE胎盤組織合體滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)與正常胎盤組織相比明顯升高,且隨疾病的進(jìn)展,表達(dá)漸增高,而妊娠期高血壓患者比較雖有增高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這一結(jié)果證實(shí)了TLR4與PE的關(guān)系,可見作為引發(fā)PE的關(guān)鍵部位,胎盤組織中TLR4表達(dá)的變化可能PE發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一,并影響疾病的發(fā)展。從這一結(jié)果推測可能存在某些內(nèi)源性因素刺激胎盤組織TLR4,進(jìn)而激活NF-κB,引發(fā)TNF-α、IL-6的釋放,表明PE時胎盤組織中TLR4表達(dá)與IL-6、TNF-α分泌之間可能存在相關(guān)性,但激活TLR4的這些內(nèi)源性因素及TLR4和炎性細(xì)胞因子之間的相關(guān)性有待深入研究。
綜上所述, PE患者胎盤中TLR4及NF-κB表達(dá)增加可能是PE發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一,尋找TLR4的內(nèi)源性配體是探討子癇間前期發(fā)病機(jī)制的重要內(nèi)容之一,為我們進(jìn)一步探討天然免疫對PE的影響提出新課題。
【參考文獻(xiàn)】
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2 Medzhitov R, Janeway CA.Decoding the patterns of selfand non-self by the innate immune system. Science, 2002, 296(5566): 298-300.
3 Medzhitov R, Preston-Hurlburt P, Janeway CA. A human homo-logue of the drosophila Toll protein signals activation of adaptiveimmunity. Nature, 1997, 388(6640): 394-397.
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5 Abrahams VM,Mor G. Toll-like receptors and their role in thetrophoblast. Placenta, 2005, 26(7): 540-547.
水腫,與喝水有關(guān)嗎?
一般而言,準(zhǔn)媽媽每天都要保證攝入適當(dāng)?shù)乃?,這可以有效地減少便秘和泌尿道感染的發(fā)生。因此,建議準(zhǔn)媽媽每天應(yīng)攝取至少2000毫升的水分,且最好是純凈的白開水,而非含糖飲料、果汁、咖啡或者茶。如果準(zhǔn)媽媽不喜歡白開水,也可以在水中泡上一片檸檬、薄荷葉等等。
可是,如果在進(jìn)入孕中后期后,準(zhǔn)媽媽突然發(fā)現(xiàn)自己好像出現(xiàn)了疑似水腫的現(xiàn)象。那么,這會和喝水有關(guān)嗎?
從生理角度講,為了適應(yīng)胎寶寶的生長發(fā)育需要,在激素及神經(jīng)內(nèi)分泌的影響下,準(zhǔn)媽媽體內(nèi)各個系統(tǒng)會發(fā)生一系列適應(yīng)性的變化,這些可能會導(dǎo)致水腫的出現(xiàn)。比如子宮增大,壓迫靜脈,引起靜脈血液循環(huán)不暢(常見于下半身),從而導(dǎo)致水分不能及時地排出體外等等;從病理角度講,許多產(chǎn)科并發(fā)疾病,妊娠合并內(nèi)外科疾病,如嚴(yán)重貧血、妊娠高血壓、子癇前期、子癇、妊娠合并心臟病、妊娠合并慢性腎炎等都可能會引起水腫。因此,科學(xué)飲水并不是導(dǎo)致水腫的直接原因。不過,一些不良的飲食習(xí)慣,的確可能會導(dǎo)致問題的發(fā)生。
如何判斷水腫情況?
妊娠期水腫大多從踝部開始顯現(xiàn),逐漸向上發(fā)展,按照范圍和程度可分為四級,以“+”表示:水腫局限于膝蓋以下為“+”;延及大腿為“++”;延及外陰及腹壁為“+++”;全身水腫或伴有腹水時為“++++”。此外,它最初的表現(xiàn)也可能僅僅是體重的異常增加,一般來說,若懷孕期間體重增加每周超過0.5千克,或每月增加2.7千克,則提示可能有隱性水腫。生理性水腫與病理性水腫的區(qū)別,可以通過下表初步判斷。
水腫了,要限制喝水嗎?
對于水腫的準(zhǔn)媽媽來說,她們一定會有這樣的疑問:我現(xiàn)在還可以喝水嗎?其實(shí)答案很簡單,即使水腫也不用刻意減少喝水的量,相反,必要的水分可以幫助體內(nèi)鈉的排出。而且只要通過適當(dāng)休息和適當(dāng)調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣,水腫情況大多可以得到改善。
選擇利尿食物:
首先,治療孕期水腫一般不主張使用利尿劑,因?yàn)槔騽┛赡軙o準(zhǔn)媽媽和胎寶寶帶來一些不必要的副作用。在飲食方面,建議少攝取高糖或精制的碳水化合物類的食物,多攝取有利尿作用的食物,例如:冬瓜、菠蘿、葡萄、紅豆水、綠葉蔬菜、蘆筍、洋蔥、大蒜、南瓜等,可以幫助消腫。此外,還可以吃一些中醫(yī)認(rèn)為有助于利尿的食物,如淡豆?jié){、冬瓜茶、玉米須煎水等,代替水來飲用。在食譜中,煮赤小豆鯉魚湯、扁豆薏苡仁粥等藥食同源的藥膳也有較好的利尿效果。
保持飲食清淡:
孕期的水腫問題,還可能與準(zhǔn)媽媽一日三餐喜歡加鹽、加辣、加酸菜的重口味,而導(dǎo)致身體的鈉含量過高有關(guān)。因此,準(zhǔn)媽媽應(yīng)該低鹽飲食,包括限制醬油、腌制食物如咸肉、咸菜等,以及鹽分過多的話梅類的零食、重口味的薯片、辣條等膨化食品和堿制點(diǎn)心。但不必刻意過分忌諱食鹽,因?yàn)闆]有咸味,會降低食欲,影響胎寶寶的營養(yǎng)供給。
吃足量蔬菜水果:
蔬菜水果中含有人體必需的多種維生素和微量元素,這些成分可以提高身體抵抗力,加強(qiáng)新陳代謝,還具有解毒利尿等作用,比如西瓜就有利于水分排出。
多攝取蛋白質(zhì)與維生素: