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1.材料及方法
1.1材料
高質(zhì)量的質(zhì)控物:為保證質(zhì)控物的良好質(zhì)量,首先,質(zhì)控物要求在220℃的環(huán)境下保存;其次避免反復(fù)凍融。購(gòu)于衛(wèi)生部臨檢中心。ELISA檢測(cè)抗HIV試劑盒:北京萬(wàn)泰HIV(1+2型)ELISA抗體診斷試劑盒。96孔洗板機(jī)(芬蘭丹尼公司);MK-2型酶標(biāo)儀(芬蘭丹尼公司);移液器等。
1.2方法
有關(guān)質(zhì)控血清的制備,應(yīng)在無(wú)菌條件下用含有10%小牛血清PBS緩沖液將陽(yáng)性對(duì)照血清稀釋成低值弱陽(yáng)性,然后將稀釋后的血清以每管0.5ml進(jìn)行分裝,并將其置20℃環(huán)境下保存?zhèn)溆?。為?shí)現(xiàn)對(duì)質(zhì)控血清的精密性檢測(cè),在檢測(cè)樣品的同時(shí),還應(yīng)對(duì)抗-HIV質(zhì)控血清進(jìn)行檢測(cè),將同時(shí)檢測(cè)到的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,以比較其精密性。洗板:洗板所用的洗液先用蒸餾水進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐渲靡员WC其PH值正常。要求浸泡時(shí)間多余45s,洗板后殘液不得超過(guò)2μl,也即人工扣板墊紙不濕。稀釋方法:由于抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)所加樣品僅需10μl,少加或者多加都會(huì)造成不同程度的誤差,而影響到抗體檢測(cè)的質(zhì)量。由此,移取精準(zhǔn)的樣品的移液器在獲取樣品量方面十分重要。因此,應(yīng)確保以下幾點(diǎn):一保證移液器和移液頭間連接的嚴(yán)密性;二取樣時(shí)為避免移液器粘帶血清,應(yīng)保證移液頭恰與液面接觸;三為避免對(duì)灰?guī)^(qū)的誤判,在稀釋樣品液時(shí)不能使用滴瓶,而采用移液器進(jìn)行樣品的滴加,以保證抗體檢測(cè)質(zhì)量的穩(wěn)定?;谝陨弦c(diǎn),在板中加入100μl稀釋液再加10μl標(biāo)本,同時(shí)吹吸3次混勻。顯色:ELISA反應(yīng)中最佳的色原底物是TMB。但在加入終止液15min后濃度過(guò)高的就會(huì)產(chǎn)生灰褐色絮狀沉淀。因此,處理嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)來(lái)控制顯色的溫度、時(shí)間等外在因素,以避免人為因素所造成的吸光度等的升降外,還應(yīng)在加入終止液的15min內(nèi)及時(shí)進(jìn)行比色。
2.結(jié)果
2.1穩(wěn)定性試驗(yàn)
使用制備的質(zhì)控品對(duì)艾滋病抗體每隔一個(gè)月進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)S/CO波動(dòng)范圍未超出質(zhì)控范圍,也即實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性檢測(cè)屬真。
2.2制作質(zhì)控圖
在使用ELISA質(zhì)量控制方法來(lái)控制艾滋病抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量時(shí),為保證在實(shí)際中獲得良好的效果,首先應(yīng)做好OCV及RCVK來(lái)確定失控的標(biāo)準(zhǔn),然后利用Westgard規(guī)則判定失控,使用生化L2J圖進(jìn)行。由于采用ELISA方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的目的在于檢測(cè)艾滋病抗體,故而,應(yīng)確保這一方法的敏感性??刹捎迷S斌提出的臨界值血清界定法,試劑所設(shè)陰陽(yáng)對(duì)照為內(nèi)對(duì)照,另設(shè)臨界值、高值陽(yáng)性和2份正常人陰性對(duì)照,作為外對(duì)照與標(biāo)本同時(shí)檢測(cè),臨界值S/CO>1,高值陽(yáng)性S/CO>10,正常人陰性對(duì)照A值在01050~01100,當(dāng)其中所存在的各項(xiàng)中有一項(xiàng)不符合標(biāo)準(zhǔn)即為失控。臨界值為敏感度監(jiān)控、陰性對(duì)照為特異性監(jiān)控、高值為“HOOK”監(jiān)控,由此可見(jiàn),臨界值血清界定既反映ELISA的靈敏度又兼顧特異性。
3.討論
ELISA方法檢測(cè)HIV的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制,可用吸光度值來(lái)表示,還可以使用S/CO值來(lái)表示。當(dāng)前,艾滋病抗體檢測(cè)一般使用ELISA法,這一方法具有靈敏度較高的特點(diǎn),非常適于當(dāng)前眾多血站系統(tǒng)對(duì)HCV、抗2HIVHBsAg等的檢測(cè)。本人依據(jù)多年的指控監(jiān)測(cè)工作經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為,在使用較強(qiáng)陽(yáng)性的質(zhì)控物進(jìn)行作圖時(shí),以上兩種方法都會(huì)產(chǎn)生較好的實(shí)驗(yàn)效果;但是,對(duì)于一些中性、弱陽(yáng)性的質(zhì)控物進(jìn)行作圖時(shí),S/CO值的表示方法更為科學(xué)、準(zhǔn)確。但是在實(shí)際的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中,也存在著眾多影響這一方法有效運(yùn)用的不利因素,因此,加強(qiáng)艾滋病抗體檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制具有現(xiàn)實(shí)性的意義。