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我體會(huì)深刻的一點(diǎn)是:理論要與實(shí)踐相結(jié)合。其實(shí)很多東西在學(xué)校的時(shí)候我都學(xué)習(xí)過,但知道的都是理論,知道操作步驟,卻沒有多少實(shí)踐,甚至都沒有考慮到按照這些步驟去做的時(shí)候,也會(huì)出現(xiàn)很多的問題以及要如何去解決這些問題。在遇到問題的時(shí)候我全面的思考,不讓自己的思想有局限性。
我謙虛謹(jǐn)慎,勤奮好學(xué)。注重理論和實(shí)踐相結(jié)合,將所學(xué)的課堂知識(shí)能有效地運(yùn)用于實(shí)際工作中,認(rèn)真聽取老員工的指導(dǎo),對(duì)于別人提出的工作建議,可以虛心聽取。表現(xiàn)出較強(qiáng)的求知欲,并能夠仔細(xì)觀察、切身體驗(yàn)、獨(dú)立思考、綜合分析,靈活運(yùn)用自己的知識(shí)解決工作中遇到的實(shí)際困難。
工作中踏實(shí)肯干,吃苦耐勞。有創(chuàng)造性、建設(shè)性地獨(dú)立開展工作的思維;具有一定的開拓和創(chuàng)新精神,接受新事物較快,涉獵面較寬,有自己的思路和設(shè)想。能夠做到服從指揮,認(rèn)真敬業(yè),工作責(zé)任心強(qiáng),工作效率高。
這篇是小編特地為大家整理的大學(xué)畢業(yè)生自我鑒定畢業(yè)生登記表,希望對(duì)大家有所幫助!
大學(xué)四年生活即將隨著我的成長(zhǎng)而慢慢逝去,回顧這豐富多彩的四年學(xué)習(xí)生活,我已在老師的辛勤培育下成長(zhǎng)為一名品學(xué)兼優(yōu)的合格大學(xué)生了,這些日子將永遠(yuǎn)銘記在我心中。這四年在學(xué)習(xí)階段,思想上要求上進(jìn),認(rèn)真學(xué)習(xí),努力鉆研專業(yè)知識(shí),畢業(yè)之際,回顧四年來的學(xué)習(xí),工作及生活,做自我鑒定如下:
四年的大學(xué)生活,使我對(duì)人生觀,價(jià)值觀,世界觀都有了更深的認(rèn)識(shí)。我的為人之道——以誠(chéng)待人,待事、堅(jiān)持信念行動(dòng)創(chuàng)造價(jià)值、自我創(chuàng)新。
如今回首,是對(duì)過去的審視和總結(jié),亦是對(duì)未來的憧憬和希望,即將踏出校門的我,滿心期待大千世界的挑戰(zhàn)和磨練。
深知性命相托的重要,從踏入學(xué)校門檻的那天起,在良師的精心指導(dǎo)下,自己奮力拼搏,自強(qiáng)不息,逐漸成為了一個(gè)能適應(yīng)社會(huì)要求的大學(xué)生,并為做一個(gè)知識(shí)型的社會(huì)主義建設(shè)者打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
生活方面,自從來到湖南第一師范學(xué)院,我的生活充滿了愛,充滿了情。同學(xué)之間的情猶如親情但更勝親情,朋友之間的情猶如手足之情,湖南第一師范學(xué)院事我都很是關(guān)心,就這樣我愛上了湖南第一師范學(xué)院的每個(gè)人,每件事物。同時(shí)獨(dú)立自主的生活在我的美好的大學(xué)三年中也就這樣成熟了起來,我也就體會(huì)到了大學(xué)獨(dú)立自主的生活是我們進(jìn)入社會(huì)的生活的根本。
學(xué)習(xí)方面,自我進(jìn)湖南第一師范學(xué)院的第一天起,我就沒有忘記我來湖南第一師范學(xué)院的目的——學(xué)好知識(shí),學(xué)會(huì)做人。在湖南第一師范學(xué)院,雖然我在有些方面得到了肯定,但我真正實(shí)現(xiàn)自我價(jià)值還需要更加努力,讀到到老,學(xué)到老也就成了我最基本的思想。
思想方面,我經(jīng)過班級(jí)的初選,到系審核,再到院的批準(zhǔn),我成了湖南第一師范學(xué)院美術(shù)系第12期入積極分子黨培訓(xùn)中的一員,并經(jīng)過學(xué)習(xí)與考核,成績(jī)合格成為了入黨積極分子。我就由一個(gè)對(duì)我們黨了解一點(diǎn)到了解了我們黨的人。
工作方面,在寒暑假期實(shí)習(xí)中,我知道了事業(yè)的偉大和一個(gè)人的付出與成就。在大學(xué)生的社會(huì)實(shí)踐活動(dòng)中我得到了找工作比較難的啟發(fā),啟發(fā)我要克服困難勇于直前。
一、思想上高度重視
這幾年的工作,使我充分認(rèn)識(shí)到之前在校所學(xué)的知識(shí)及工作經(jīng)驗(yàn)在一定程度上已經(jīng)不能滿足今后的工作需要,急需補(bǔ)充相關(guān)理論、專業(yè)技能知識(shí)。
在xx大學(xué)的學(xué)習(xí),我在思想上有很大的覺悟,認(rèn)識(shí)到這次學(xué)習(xí),讓我學(xué)到不少理論知識(shí),將對(duì)我的知識(shí)更新以及素質(zhì)提高幫助不少,并且能夠?qū)W到今后工作需要的理論知識(shí)、專業(yè)技能及工作經(jīng)驗(yàn),不斷增強(qiáng)工作辦事能力,為比較順利地完成各項(xiàng)工作創(chuàng)造了良好條件。為了保證能夠安心學(xué)習(xí),順利地完成各門課程,我就提前把要參加學(xué)習(xí)期間的事務(wù)做出合理安排,確保能夠全身心參加上課階段的學(xué)習(xí)。
二、認(rèn)真學(xué)習(xí),嚴(yán)守紀(jì)律
由于不同于全日制的授課方式,除了面授的機(jī)會(huì)外,可以說大部分時(shí)間要靠我們自學(xué)去完成。為了提高自已,我特別珍惜這次學(xué)習(xí)的機(jī)會(huì)。我能正確處理好工作與學(xué)習(xí)的關(guān)系,把學(xué)習(xí)當(dāng)作完善自身的需求,把學(xué)習(xí)當(dāng)成促進(jìn)工作的動(dòng)力。在工作之余,我認(rèn)真閱讀教學(xué)材料,仔細(xì)領(lǐng)會(huì)每門課程所講述的內(nèi)容,做到課前預(yù)習(xí)了解,把不明白的內(nèi)容帶到課堂,向教師請(qǐng)教;課后復(fù)習(xí)鞏固。這次函授的教師,是一些從事教學(xué)活動(dòng)幾十年的優(yōu)秀教師,他們的豐富理論知識(shí)以及理論聯(lián)系實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)吸引了我,增加了我學(xué)習(xí)的信心和決心。對(duì)老師的輔導(dǎo)總能傾心、安心、靜心地聆聽,認(rèn)真地圈劃重點(diǎn),按類別認(rèn)真做好筆記,既兼顧基礎(chǔ)知識(shí),又突出重點(diǎn)內(nèi)容; 回家后舍得化時(shí)間,根據(jù)復(fù)習(xí)提綱認(rèn)真地讀書,認(rèn)真地背誦記憶,做到在理解基礎(chǔ)上背記,在背記基礎(chǔ)上理解。
在整個(gè)學(xué)習(xí)過程中,能夠合理使用科學(xué)的學(xué)習(xí)方法,充分利用時(shí)間,勤學(xué)苦練;虛心向同學(xué)和教師請(qǐng)教;能夠嚴(yán)守學(xué)院各項(xiàng)紀(jì)律和規(guī)章制度;做到尊敬教師和同學(xué)。 經(jīng)過二年的學(xué)習(xí),起到事半功倍的效果。二年的大學(xué)學(xué)習(xí)生涯和社會(huì)實(shí)踐活動(dòng),是我不斷挑戰(zhàn)自我、充實(shí)自己的一段光輝歷程。
三、珍惜機(jī)會(huì),受益匪淺
誠(chéng)然,在校學(xué)習(xí)其間,有過成功的喜悅,也有留下探索的苦惱與挫折。在這里,老師的博學(xué),講課的場(chǎng)景,使我終身難忘;同學(xué)之間的真誠(chéng),那份純潔,真摯仿佛讓我一下子回到了從前的學(xué)生時(shí)代。
【關(guān)鍵詞】 ULBP4;,NKG2D;,IFN
Expression and biological function of ULBP4 in RosettagamiTMB(DE3) and mAb preparation
[Abstract] AIM: To express human ULBP4 in RosettagamiTMB(DE3) and to prepare monoclonal antibody against ULBP4 for the research of γδT cells recognition mechanism. METHODS: DNA fragments of ULBP4 were derived from HO8910 RNA by reversetranscriptase polymerase chain reaction(RTPCR). The fragments encoding the former 225 amino acids of ULBP4 were cloned into Histag fusion protein expression vector pET22b(+). The CHistag fusion ULBP4(225a) protein was expressed in inclusion body and purified step by step according to manufactory’s protocol and renatured in bag filter. It’s functional effect on NK cells was evaluated by NKG2D binding assay and IFNγ secretion experiments. Prokaryotic expressed human ULBP4 was used as an antigen to prepare monoclonal antibodies by means of the B lymphocyte hybridoma technique. RESULTS: ULBP4 recombinant protein can stimulate NK cells to secrete IFNγ. Through PEG fusion and screening by limited dilution, we obtained four strains of hybridoma cells secreting antiULBP4 antibodies. CONCLUSION: The fusion protein was expressed successfully and functional. At the same time, the antiULBP4 mAbs were prepared successfully. Both of them provide a platform for further research.
[Keywords]ULBP4; NKG2D; IFNγ; RosettagamiTMB(DE3) E.coli; Expression; Biological function; monoclonal antibody
[摘 要] 目的: 在大腸桿菌中表達(dá)ULBP4重組蛋白, 并制備其特異性的單克隆抗體(mAb), 為γδT細(xì)胞對(duì)ULBP4的識(shí)別機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。方法: 根據(jù)GenBank中ULBP4的基因序列設(shè)計(jì)相應(yīng)的引物, 用RTPCR方法從HO8910細(xì)胞中擴(kuò)增得到ULBP4片段, 構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET22b(+)/ULBP4(前225aa胞外段), 在RosettagamiTMB(DE3)大腸桿菌中獲得表達(dá)且主要位于包含體中, 經(jīng)純化透析復(fù)性后, 分析其對(duì)NK細(xì)胞IFNγ細(xì)胞因子分泌的影響。以ULBP4為抗原, 免疫BALB/c小鼠, 取免疫小鼠脾細(xì)胞和Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞常規(guī)融合, 依次經(jīng)HAT選擇培養(yǎng)、 間接ELISA法、 克隆化培養(yǎng)、 熒光免疫檢測(cè)和流式細(xì)胞術(shù)以及Western blot篩選和鑒定抗ULBP4 mAb的雜交瘤細(xì)胞株。結(jié)果: 構(gòu)建了pET22b(+)/ULBP4(225aa)原核表達(dá)體系, 并檢測(cè)到重組蛋白的有效表達(dá); 純化的重組蛋白在體外培養(yǎng)體系中可以刺激NK細(xì)胞IFNγ細(xì)胞因子的分泌。此外, 還獲得了4株可穩(wěn)定分泌抗人ULBP4 mAb的雜交瘤細(xì)胞株。結(jié)論: 成功地構(gòu)建并表達(dá)了具有生物活性的ULBP4, 為γδT細(xì)胞的識(shí)別機(jī)制研究建立抗原制備平臺(tái), 同時(shí)所制備的抗人ULBP4 mAb, 為后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。
[關(guān)鍵詞]ULBP4; NKG2D; IFNγ; RosettagamiTMB(DE3)大腸桿菌; 表達(dá); 生物學(xué)功能; 單克隆抗體
NKG2D是一種激活性的C型凝集素受體, 由同源二聚體構(gòu)成, 表達(dá)于多種淋巴細(xì)胞的表面。近幾年, 發(fā)現(xiàn)了一種新的NKG2D的配體家族UL16 binding proteins(ULBPs又稱為RAET1分子)[1, 2], 其中, ULBP13為糖基磷脂酰肌醇連接的膜蛋白, 而ULBP4和RAET1G則為含跨膜區(qū)域和胞內(nèi)區(qū)域的膜蛋白。它們?cè)谡=M織細(xì)胞表面不表達(dá)或表達(dá)量很低, 但病毒感染和細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化后能明顯增強(qiáng)其表達(dá), 暗示了它們?cè)诳垢腥久庖吆湍[瘤免疫中潛在的作用。序列分析提示其與MICA較為相似, 且都屬于延伸的MHCI類分子家族, 但只含α1和α2功能域且不能呈遞小肽。鑒于其序列上與MICA的相似性, 提示其可能也為γδ1T細(xì)胞群的抗原之一[3]。事實(shí)上, 已有證據(jù)表明其中的一個(gè)分子ULBP3可以被慢性B型淋巴細(xì)胞性白血病患者外周血的γδ1T細(xì)胞群所識(shí)別[4]。為了進(jìn)一步加深對(duì)γδT細(xì)胞識(shí)別機(jī)制的認(rèn)識(shí), 我們?cè)谠吮磉_(dá)系統(tǒng)中表達(dá)并純化了ULBPs家族的另外一個(gè)成員ULBP4, 同時(shí)制備其單克隆抗體(mAb), 為今后的研究工作奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
1 材料和方法
1.1 材料 克隆載體pGEMT Easy Vector System購(gòu)自Promega公司, 原核表達(dá)質(zhì)粒pET22b(+)和宿主菌RosettagamiTMB(DE3) E.coli均購(gòu)自Novagen公司, DH5α菌為本室保存。HO8910人漿液性卵巢腺癌細(xì)胞株、 803人低分化胃腺癌細(xì)胞系以及CHO中國(guó)倉(cāng)鼠腎細(xì)胞系也為本室保存, 均以含100 mL/L小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。而Hep G2人肝癌細(xì)胞系則以含100 mL/L小牛血清的MEMNEAA完全培養(yǎng)液進(jìn)行貼壁培養(yǎng)(HO8910、 803、 Hep G2均為ULBP4 mRNA陽(yáng)性的細(xì)胞株)。NK92細(xì)胞由中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)院免疫學(xué)研究所田志剛教授惠贈(zèng), 以含125mL/L的胎牛血清、 125mL/L的馬血清以及200U/mL IL2的MEMα培養(yǎng)液進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。Sp2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞為本室保存。細(xì)胞培養(yǎng)用RPMI1640購(gòu)自Gibco BRL公司。Trizol試劑購(gòu)自Invitrogen公司, Tag DNA 聚合酶和T4 DNA連接酶購(gòu)自MBI公司。小量質(zhì)粒制備試劑盒、 MMV逆轉(zhuǎn)錄酶、 Oligo(dT)15 Primer、 RNA酶抑制劑、 Xgal均購(gòu)自Promega公司。Nde I, Xho I限制性內(nèi)切酶購(gòu)自NEB公司。PCR產(chǎn)物切膠回收試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司。HisTrap kit Ni親和柱購(gòu)自美國(guó)安瑪西亞公司。IPTG、 氧化型還原型谷胱苷肽購(gòu)自MERCK公司。Histag mAb購(gòu)自北京天為時(shí)代公司。HRP和FITC標(biāo)記的羊抗鼠IgG均購(gòu)自北京中山公司。Western blot的化學(xué)發(fā)光底物supersignal West Pico購(gòu)自Pierce公司。硝酸纖維素膜購(gòu)自美國(guó)安瑪西亞公司。NKG2DFc融合蛋白和人IFNγ細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒購(gòu)自R&D公司。次黃嘌呤(H)、 氨基喋呤(A)、 胸腺嘧啶(T)、 弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑以及PEG4000購(gòu)自Sigma公司。BALB/c近交系小鼠(8周齡, 雌性),
購(gòu)自中國(guó)藥品和生物制品鑒定所嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
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1.2 方法
1.2.1 ULBP4全長(zhǎng)cDNA的擴(kuò)增和克隆 根據(jù)GenBank中ULBP4的基因序列設(shè)計(jì)相應(yīng)的引物, 于編碼的5′和3′端各設(shè)計(jì)一條引物P1、 P2, 同時(shí)設(shè)計(jì)編碼前225個(gè)氨基酸的下游引物P3, 以上引物均由北京奧科生物技術(shù)有限公司合成: P1: 5′ GGAATTCCATATGCGAAGAATATCCCTGACTT 3′; P2: 5′ CCGCTCGAGAGACGTCCTCAAGGGCCAGA 3′; P3: 5′ CCGCTCGAGATCTGGTAGACTAGAAGAAGACC 3′。其中, 斜體代表添加的酶切位點(diǎn)(Nde I和Xho I)和保護(hù)堿基。按照Trizol試劑盒的說明書提取RNA同時(shí)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄, 以cDNA為模板, 擴(kuò)增全長(zhǎng)的ULBP4基因片斷, 上游引物為P1, 下游引物為P2。擴(kuò)增條件為: 94℃ 30 s, 60℃ 45 s, 72℃ 90 s, 共進(jìn)行30個(gè)循環(huán), 最后72℃再延伸10 min。擴(kuò)增出的片段用T4 DNA連接酶克隆入載體pGEMT Easy Vector System, 用CaCl2法轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α, 用Xgal和IPTG進(jìn)行藍(lán)白斑篩選, 陽(yáng)性重組子經(jīng)菌液PCR和測(cè)序分析證實(shí)(由上海博亞生物技術(shù)有限公司完成)。同時(shí)使用小量質(zhì)粒制備試劑盒提取測(cè)序正確的陽(yáng)性質(zhì)粒。
1.2.2 ULBP4(225aa)原核表達(dá)質(zhì)粒pET22b(+)的構(gòu)建和誘導(dǎo)表達(dá) 以測(cè)序正確的陽(yáng)性質(zhì)粒為模板, P1和P3引物對(duì)擴(kuò)增ULBP4(225aa)片段, PCR產(chǎn)物經(jīng)切膠純化回收后, 使用Nde I、 Xho I限制性內(nèi)切酶直接雙酶切, 37℃過夜。將雙酶切的產(chǎn)物純化回收后連入原核表達(dá)載體pET22b(+)同時(shí)轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α, 氨芐抗性的陽(yáng)性重組子經(jīng)菌液PCR和測(cè)序分析證實(shí)與預(yù)期結(jié)果相符(由上海博亞生物技術(shù)有限公司完成)。測(cè)序正確的原核表達(dá)載體pET22b(+)/ULBP4(225aa)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化RosettagamiTMB(DE3) E.coli, 挑取克隆菌接種于50 mL LB培養(yǎng)液中(氨芐青霉素 100 μg/mL), 37℃振蕩培養(yǎng)過夜。次日以1∶100的比列轉(zhuǎn)接于1L2×YT培養(yǎng)液中, 37℃振蕩培養(yǎng), 當(dāng)A600值達(dá)到06~08時(shí)加入IPTG(至終濃度為05 mmol/L)進(jìn)行誘導(dǎo), 37℃振蕩繼續(xù)培養(yǎng)4 h。
1.2.3 ULBP4的分離純化和復(fù)性 離心收集菌體, 經(jīng)超聲破碎后高速離心獲得包含體, 3 mol/L尿素反復(fù)洗滌后溶于8 mol/L的尿素中。按照安瑪西亞公司的說明書過柱純化ULBP4。收集純化的樣品進(jìn)行SDSPAGE電泳以及Western blot檢測(cè)。將純化后的樣品裝入透析袋中, 梯度降低尿素的濃度同時(shí)在尿素濃度為2 mol/L時(shí)補(bǔ)加氧化型還原型谷胱苷肽, 最后換成PBS并透析3次。
1.2.4 ULBP4的生物學(xué)功能鑒定 (1)以1 μg/孔的人NKG2D重組蛋白包被96孔板, 4℃過夜, 以含5mL/LTween20的PBS洗滌3次, 用20 g/L BSA于37℃封閉1 h, 洗滌3次后分別加入U(xiǎn)LBP4以及帶His標(biāo)簽的無關(guān)蛋白, 37℃孵育1 h, PBST洗滌3次后加入抗Histag的mAb, 37℃孵育1 h, PBST洗滌3次后加入HRP酶標(biāo)羊抗鼠二抗, 37℃孵育1 h, 再次以PBST洗滌5次, 并用重蒸水洗滌3次。OPD底物顯色系統(tǒng)顯色5~10 min, 測(cè)定A490/630值。(2)以10 μg/孔包被24孔板, 離心收集NK92細(xì)胞, 調(diào)整細(xì)胞密度為5×105/孔, 37℃培養(yǎng)24 h后收集上清, 用R&D公司的人IFNγ檢測(cè)試劑盒分析培養(yǎng)上清中的含量。
1.2.5 抗ULBP4 mAb的制備 取50 μg的ULBP4原核表達(dá)蛋白和弗氏完全佐劑混合后皮下多點(diǎn)注射小鼠, 然后分別在第14天, 21天, 28天使用同劑量的抗原和弗氏不完全佐劑混合后皮下多點(diǎn)注射小鼠。融合前3 d, 尾靜脈加強(qiáng)注射1次。取免疫小鼠的脾細(xì)胞和Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞在PEG的作用下融合, 在HAT選擇性培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選, 并經(jīng)有限稀釋克隆化培養(yǎng)獲得雜交瘤細(xì)胞株。
1.2.6 抗ULBP4 mAb的特性鑒定 (1)間接ELISA法檢測(cè)抗體: 以1 μg/孔ULBP4抗原包被96孔板, 并設(shè)立空白、 陰陽(yáng)對(duì)照, 37℃包被過夜。以含5 mL/L Tween20的PBS洗滌5次, 并用含20 g/L BSA的PBS于37℃下封閉2 h, 再次以含5 mL/L Tween20的PBS洗滌5次。加入待測(cè)的細(xì)胞培養(yǎng)上清, 37℃孵育1 h, 以含5 mL/L Tween20的PBS洗滌5次。加入HRP酶標(biāo)羊抗鼠二抗, 37℃孵育1 h, 以含5 mL/L Tween20的PBS洗滌5次,并用重蒸水洗滌3次。OPD底物顯色系統(tǒng)顯色5~10 min, 測(cè)定A490/630值。(2)間接免疫熒光法檢測(cè)抗體: 分別將803、 Hep2、 Hep G2、 CHO細(xì)胞和穩(wěn)定表達(dá)ULBP4的CHO細(xì)胞接種24孔板, 37℃培養(yǎng)48 h后, PBS洗滌5次, 用40 g/L多聚甲醛冰上固定30 min。以含50 g/L BSA的PBS于4℃封閉過夜。次日, PBS洗滌5次后加入待測(cè)樣品, 37℃孵育1 h, 以PBS洗滌5次。加入FITC酶標(biāo)羊抗鼠二抗, 37℃孵育30 min, 以PBS洗滌5次, 并用重蒸水洗滌3次。于熒光顯微鏡下檢測(cè)。(3)流式細(xì)胞術(shù)分析: 收集待測(cè)細(xì)胞, PBS洗3次, 吸盡上清, 于每管分別加入抗ULBP4 mAb, 4℃, 孵育60 min。離心, PBS洗3次, 加入FITC酶標(biāo)羊抗鼠二抗, 4℃, 孵育60 min。離心, PBS洗3次, 加入500 μL PBS固定液, 4℃保存, 進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)常規(guī)熒光分析。
2 結(jié)果
2.1 重組表達(dá)載體的構(gòu)建以及鑒定 首先采用RTPCR方法從HO8910細(xì)胞中擴(kuò)增出ULBP4全長(zhǎng)基因, 測(cè)序結(jié)果證實(shí)所擴(kuò)增的基因完全正確。然后再以P1和P3引物擴(kuò)增出ULBP4的胞外段(225aa), PCR產(chǎn)物大小分別為:ULBP4全長(zhǎng)808 bp、 ULBP4胞外段694 bp(片段大小均包含酶切位點(diǎn)和保護(hù)堿基序列), 見圖1。用Nde I和Xho I限制性內(nèi)切酶將ULBP4胞外段克隆入原核表達(dá)載體pET22b(+)。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α, 抗生素篩選后的陽(yáng)性克隆經(jīng)菌液PCR鑒定, 取其中的陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序。根據(jù)序列比較, pET22b(+)中插入片段的序列與GenBank中的序列一致。重組質(zhì)粒載體的雙酶切鑒定見圖2。
圖1 ULBP4全長(zhǎng)和ULBP4胞外段PCR結(jié)果(略)
Fig 1 The PCR products of ULBP4 and the outer part segment
1: ULBP4; 2: The outer part segment of ULBP4; 3: DNA marker.
圖2 pET22b(+)/ULBP4(225aa)原核表達(dá)重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定(略)
Fig 2 Identification of recombinant vector pET22b(+)/ULBP4(225aa) digested by Nde I and Xho I
1: Recombinant vector pET22b(+)/ULBP4(225aa) digested by Nde I and Xho I; 2: DNA marker.
2.2 ULBP4蛋白在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)和分離純化 ULBP4蛋白的原核表達(dá)系統(tǒng)在05 mmol/L IPTG和37℃條件下誘導(dǎo)4 h, 表達(dá)以包含體為主, 相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)約為25000。鎳柱純化后目的蛋白經(jīng)SDSPAGE電泳和Western blot證實(shí)Mr在31000左右有一蛋白帶, 與預(yù)期大小相符(圖3)。
圖3 大腸桿菌誘導(dǎo)后的SDSPAGE電泳(A)及ULBP4的Western blot(B、 C)結(jié)果(略)
Fig 3 SDSPAGE (A) and western blot analysis (B and C) of ULBP4 expressed in RosettagamiTMB(DE3)
(A) 1: Uninduced supernant of cell lysate by sonication; 2: Induced supernant of cell lysate by sonication; 3: Uninduced precipitate of cell lysate by sonication; 4: Induced inclusion body of cell lysate by sonication; 5: Purified ULBP4 protein; M: Low molecular marker proteins. (B) 1: ULBP4 detected with AntiHistag mAb; M: Low molecular marker proteins. (C) 1: ULBP4 detected with AntiULBP4 mAb 10F7; M: Low molecular marker proteins.
2.3 體外NKG2D結(jié)合實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞因子分泌實(shí)驗(yàn) 間接ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示: 原核表達(dá)復(fù)性后的ULBP4能與人NKG2D結(jié)合, 而帶His標(biāo)簽的無關(guān)蛋白則不能與之結(jié)合, 說明復(fù)性后的ULBP4仍能維持正確的天然構(gòu)像。此外, 細(xì)胞因子分泌實(shí)驗(yàn)顯示: 雖然NK92細(xì)胞有一定的本底表達(dá), 但經(jīng)ULBP4刺激后NK92細(xì)胞的IFNγ分泌明顯增強(qiáng)。
圖4 ULBP4刺激NK92細(xì)胞分泌IFNγ(略)
Fig 4 ULBP4 stimulated NK92 cells to secrete IFNγ
2.4 雜交瘤細(xì)胞株的建立 通過細(xì)胞融合、 篩選以及克隆化培養(yǎng), 獲得了4株可穩(wěn)定分泌高效價(jià)mAb的雜交瘤細(xì)胞株6C12、 8C9、 8G1及10F7。
2.5 抗人ULBP4 mAb的特性鑒定 熒光免疫檢測(cè)和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示以上4株雜交瘤細(xì)胞株所分泌的mAb能識(shí)別天然的ULBP4。部分結(jié)果見圖5和圖6。
圖5 抗ULBP4 mAb的熒光免疫技術(shù)檢測(cè)(略)
Fig 5 Immunofluorescence assay of the characterization of antiULBP4 mAbs
A: CHO cells stained with antiULBP4 mAb 8C9; B: ULBP4CHO cells stained with antiULBP4 mAb 8C9; C: HO8910 cells stained with antiULBP4 mAb 8C9; D: HO8910 cells stained with antiULBP4 mAb 6C12.
圖6 抗ULBP4 mAb的流式細(xì)胞術(shù)分析(略)
Fig 6 Flow cytometry assay of the characterization of antiULBP4 mAbs
3 討論
γδT細(xì)胞作為第3種特異的免疫細(xì)胞, 雖然在人體T細(xì)胞群體中只占很少的比例, 但在抗感染免疫、 免疫監(jiān)視、 免疫調(diào)節(jié)以及專職的抗原提呈方面都起重要的作用[5, 6]。最近一項(xiàng)相關(guān)的研究表明慢性B型淋巴細(xì)胞性白血病患者外周血的γδ1T細(xì)胞群可以識(shí)別ULBP3[4], 然而遺憾的是未能對(duì)ULBP家族的其他成員進(jìn)行相關(guān)的研究。為此, 我們?cè)谠讼到y(tǒng)中表達(dá)了ULBP4, 所表達(dá)的ULBP4可刺激NK92細(xì)胞分泌IFNγ, 表明包含體表達(dá)復(fù)性后的蛋白仍有活性, 為進(jìn)一步研究γδ1TCR對(duì)ULBP的識(shí)別機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。值得注意的是, 在進(jìn)行原核表達(dá)的過程中首先使用的是傳統(tǒng)的BL21(DE3)表達(dá)菌, 但是未能獲得表達(dá)。而后我們從Novagen公司引進(jìn)RosettagamiTMB(DE3)表達(dá)菌, 該菌本身有3種抗性(氯霉素、 卡那霉素和四環(huán)素), 可以提供稀有堿基, 在05 mmol/L IPTG誘導(dǎo)下獲得了高效表達(dá)。此外, 2006年有報(bào)道在淋巴細(xì)胞白血病患者的外周血中能檢測(cè)到游離性的ULBP2, 而在健康人中則檢測(cè)不到, 這一過程是由金屬蛋白酶所介導(dǎo)的, 表明了其在腫瘤逃逸中潛在的作用[7]。除此以外, RAET1G在RNA水平發(fā)生選擇性的剪切也能生成無跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)的游離性的ULBP。因此, 我們所制備的ULBP4 mAb還為ULBP4所介導(dǎo)的腫瘤逃逸機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。
參考文獻(xiàn)
[1] Bacon L, Eagle RA, Meyer M, et al. Two human ULBP/RAET1 molecules with transmembrane regions are ligands for NKG2D[J]. J Immunol, 2004,173(2): 1078-1084.
[2] Cosman D, Mullberg J, Sutherland CL, et al. ULBPs, novel MHC class Irelated molecules, bind to CMV glycoprotein UL16 and stimulate NK cytotoxicity through the NKG2D receptor[J]. Immunity, 2001, 14(2): 123-133.
[3] Cao W, He W. UL16 binding proteins[J]. Immunobiology, 2004, 209(3): 283-290.
[4] Poggi A, Venturino C, Catellani S, et al. Vdelta1 T lymphocytes from BCLL patients recognize ULBP3 expressed on leukemic B cells and upregulated by transretinoic acid[J]. Cancer research, 2004, 64(24): 9172-9179.
[5] Hayday AC. γδ cells: a right time and a right place for a conserved third way of protection[J]. Annu Rev Immunol, 2000, 18: 975-1026.
畢業(yè)生是需要寫畢業(yè)自我鑒定的,大家可以來看看哦,以下是收錄的一些范文,希望能為大家提供幫助。
高等學(xué)校畢業(yè)生登記表自我鑒定
一直以來堅(jiān)持著人活到老學(xué)到老的學(xué)習(xí)理念,我于2006年通過成人高考考入廣州城市職業(yè)學(xué)院。在這三年中,我積極參加政治學(xué)習(xí),關(guān)心國(guó)家大事,認(rèn)真學(xué)習(xí)“三個(gè)代表”的重要思想,擁護(hù)黨的各項(xiàng)方針政策。遵守校紀(jì)校規(guī),尊敬師長(zhǎng),團(tuán)結(jié)同學(xué),政治上要求進(jìn)步;學(xué)習(xí)目的明確,態(tài)度端正,爭(zhēng)做一個(gè)有高尚思想品德的公民。
大學(xué)對(duì)于我們這群接受成人教育的大學(xué)生來說有著更深刻的含義,通過社會(huì)的實(shí)踐和自我的發(fā)現(xiàn),大學(xué)對(duì)于我們來說更多的是對(duì)知識(shí)的渴望與需求,所以在學(xué)習(xí)上我熱愛自己的專業(yè),學(xué)習(xí)認(rèn)真刻苦,要求自己在專業(yè)知識(shí)和各項(xiàng)技能上全面發(fā)展,對(duì)學(xué)習(xí)一絲不茍,認(rèn)真完成學(xué)校規(guī)定的學(xué)習(xí)任務(wù)且取得優(yōu)良成績(jī)。作為學(xué)生干部,我時(shí)刻嚴(yán)格要求自己,有強(qiáng)烈的集體榮譽(yù)感和工作責(zé)任心,對(duì)班委工作認(rèn)真負(fù)責(zé),關(guān)心同學(xué),熱愛集體。
三年的大學(xué)校園生活給我的人生賦予無限的亮點(diǎn)。使自己的知識(shí)水平、思想境界、工作能力等方面都邁上了一個(gè)新的臺(tái)階。在這即將告別美好大學(xué)生活、踏上社會(huì)征途的時(shí)候,我將以飽滿的熱情、堅(jiān)定的信心、高度的責(zé)任感去迎接新的挑戰(zhàn),攀登新的高峰。
畢業(yè)生個(gè)人登記自我鑒定
光陰似箭,轉(zhuǎn)眼大學(xué)生活即將過去了,本人從進(jìn)入××大學(xué)××系××班級(jí)學(xué)習(xí)以來,一直以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)習(xí)態(tài)度和積極的工作熱情投身于學(xué)習(xí)和工作中,雖然有過成功的喜悅,也有過失敗的辛酸,然后日益激烈的社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)也使我充分認(rèn)識(shí)到,若想成為一名德智體全面發(fā)展的優(yōu)秀大學(xué)生,這些鍛煉都是很基礎(chǔ)的和必要的。大學(xué)時(shí)期的所學(xué)、所感、所悟?qū)⒅笇?dǎo)我一生受用!
在政治上,我有堅(jiān)定的政治方向,積極上進(jìn),熱愛祖國(guó),熱愛人民,堅(jiān)決擁護(hù)中國(guó)共-產(chǎn)-黨的領(lǐng)導(dǎo),擁護(hù)黨的各項(xiàng)方針政策,遵紀(jì)守法,勇于批評(píng)和自我批評(píng),樹立了正確的人生觀和價(jià)值觀。
在學(xué)習(xí)上,憑著對(duì)知識(shí)的渴望和追求,我一向嚴(yán)于律己,刻苦鉆研,勤奮好學(xué),態(tài)度端正,目標(biāo)明確,為把自己,變成一個(gè)掌握現(xiàn)代信息和職業(yè)技能的合格×××,我牢固掌握了本專業(yè)的基礎(chǔ)知識(shí)和技能,除此之外我還廣泛獵取其他學(xué)科的知識(shí),給自己更多的機(jī)會(huì)參加社會(huì)實(shí)踐,做到理論聯(lián)系實(shí)際。
在工作上,除了積極參加學(xué)校、系、班級(jí)組織的各項(xiàng)活動(dòng)外,結(jié)合自身特長(zhǎng),我還積極參加學(xué)校、社會(huì)組織的各種網(wǎng)絡(luò)設(shè)計(jì)比賽,并獲得獎(jiǎng)勵(lì),為學(xué)校爭(zhēng)光,得到了學(xué)校、老師和同學(xué)們的認(rèn)可。
在生活上,養(yǎng)成了良好的生活習(xí)慣,生活充實(shí)而有條理,有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)纳顟B(tài)度,良好的生活作風(fēng);為人熱情大方,誠(chéng)實(shí)守信,樂于助人。有自己為人處世的原則,與同學(xué),朋友和睦相處,共同進(jìn)步。
在體育方面,認(rèn)真參加、學(xué)習(xí)學(xué)校開設(shè)的體育課程并圓滿完成任務(wù),積極參加各項(xiàng)課外活動(dòng),并不斷豐富自己的閱歷。
×年的大學(xué)生活,使自己的知識(shí)水平、思想境界、工作能力都邁上了一個(gè)新的臺(tái)階。在這即將告別美好大學(xué)生活、踏上社會(huì)征途的時(shí)刻,我將以飽滿的熱情、堅(jiān)定的信念、高度的責(zé)任感去迎接新的挑戰(zhàn),攀登新的高峰。
畢業(yè)生登記表個(gè)人鑒定
轉(zhuǎn)眼間大學(xué)生生活就要結(jié)束了,離校之前,為了明確自己的過去與未來.我覺得我有必要對(duì)這幾年的大學(xué)生活做個(gè)自我鑒定!
大學(xué)期間,我不僅重視對(duì)專業(yè)課程和第二外語(yǔ)(日語(yǔ))的學(xué)習(xí),掌握了扎實(shí)的專業(yè)知識(shí)技能,同時(shí)注重個(gè)人思想道德品格和修養(yǎng)的提升,堅(jiān)信“先做人后做事”的至理名言,認(rèn)為正直的人格是人才的一項(xiàng)重要標(biāo)準(zhǔn).
我性格開朗,亦靜亦動(dòng),本著一顆誠(chéng)心與人交往,有較強(qiáng)的表達(dá)能力,同時(shí)也很樂意傾聽,懂得自我反省.我品嘗過失敗,經(jīng)歷過迷惘,但最終在集體生活中慢慢成長(zhǎng)起來,形成了良好的性格品質(zhì).
[關(guān)鍵詞]船機(jī)裝配;仿真裝置;開發(fā)
[DOI]1013939/jcnkizgsc201537053
1引言
本課題是大學(xué)生實(shí)踐創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目。大學(xué)生參加實(shí)踐創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目,可以鼓勵(lì)和支持大學(xué)生盡早參與科學(xué)研究、技術(shù)開發(fā)和社會(huì)實(shí)踐等創(chuàng)新活動(dòng),提高大學(xué)生的科學(xué)、文化素養(yǎng),培養(yǎng)大學(xué)生的創(chuàng)新精神、創(chuàng)業(yè)精神和實(shí)踐能力。江蘇海事職業(yè)技術(shù)學(xué)院已籌備開展《船機(jī)裝配工》中級(jí)職業(yè)技能訓(xùn)練鑒定,還需要加強(qiáng)《船機(jī)裝配工》實(shí)訓(xùn)硬件建設(shè),通過大學(xué)生實(shí)踐創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目,自主開發(fā)船機(jī)裝配實(shí)訓(xùn)教學(xué)仿真裝置,即船舶主推進(jìn)仿真裝置;測(cè)定船舶軸系理論中心線裝置,應(yīng)用于《船機(jī)裝配工》中級(jí)職業(yè)技能訓(xùn)練鑒定,即強(qiáng)化“雙證書”人才培養(yǎng)模式,實(shí)現(xiàn)“理實(shí)一體化”教學(xué)方式,提升學(xué)生的實(shí)踐創(chuàng)新能力。
2船舶主推進(jìn)仿真裝置開發(fā)方案
21船舶主推進(jìn)仿真裝置主要組成
船舶主推進(jìn)仿真裝置,即十字頭式柴油機(jī)仿真裝置、船舶軸系仿真裝置,構(gòu)成船舶主機(jī)與軸系主推進(jìn)仿真裝置。
22船舶主推進(jìn)仿真裝置總體結(jié)構(gòu)
船舶主推進(jìn)仿真裝置裝配圖,如圖1所示:
23船舶主推進(jìn)仿真裝置材質(zhì)
(1)十字頭式柴油機(jī)仿真裝置材質(zhì):鋁材、塑料。
(2)船舶軸系仿真裝置材質(zhì):鋁材、塑料。
24船舶主推進(jìn)仿真裝置主要零部件配置
船舶主推進(jìn)仿真裝置主要零部件配置,如下表所示。
25開發(fā)的船舶主推進(jìn)仿真裝置實(shí)物圖
開發(fā)的船舶主推進(jìn)仿真裝置實(shí)物,如圖2所示。
26船舶主推進(jìn)仿真裝置功能
(1)裝置具有仿真大型低速柴油機(jī)與軸系的船舶主推進(jìn)裝置,能直觀認(rèn)識(shí)船舶主機(jī)與軸系總體結(jié)構(gòu)、工作原理、特性;
船舶主推進(jìn)仿真裝置主要零部件配置
(2)能模擬軸系安裝、校中;
(3)按裝配技術(shù)要求,能對(duì)裝置進(jìn)行裝配調(diào)整及性能調(diào)試的操作技能訓(xùn)練。
3測(cè)定船舶軸系理論中心線裝置開發(fā)
船舶建造和軸系修理時(shí),均有軸系安裝和軸系校中工作,軸系的安裝和校中的質(zhì)量直接關(guān)系到主機(jī)推進(jìn)系統(tǒng)安裝的可靠性和船舶航行的安全性。軸系的安裝與校中都是以軸系理論中心線為依據(jù)的。軸系的理論中心線是船舶設(shè)計(jì)時(shí)確定的軸系中心線,工作實(shí)際中,在軸系安裝前,必須測(cè)量確定軸系理論中心線位置,所以開發(fā)的測(cè)定軸系理論中心線裝置,即是用于模擬工作實(shí)際測(cè)量船舶軸系理論中心線的。
設(shè)計(jì)制作的模擬測(cè)定船舶軸系理論中心線的裝置,裝置實(shí)物如圖3所示。
圖3測(cè)定軸系理論中心線的裝置
該裝置功能:模擬測(cè)定船舶軸系理論中心線。該裝置加強(qiáng)了實(shí)訓(xùn)室硬件建設(shè),開創(chuàng)了學(xué)生船舶軸系安裝測(cè)定軸系理論中心線實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目,完善學(xué)生知識(shí)結(jié)構(gòu),提升學(xué)生軸系安裝的理論知識(shí)與操作技能,提升了學(xué)生實(shí)踐應(yīng)用技能。
4結(jié)論
開發(fā)的船舶主推進(jìn)仿真裝置以及測(cè)定船舶軸系理論中心線裝置,應(yīng)用于《船機(jī)裝配工》中級(jí)職業(yè)技能訓(xùn)練鑒定、拓展實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目,有助于完善學(xué)生知識(shí)結(jié)構(gòu),使學(xué)生適應(yīng)實(shí)踐崗位的技能要求,提升了“理實(shí)一體化”教學(xué)的成效。并且通過設(shè)計(jì)制作,培養(yǎng)學(xué)生生產(chǎn)設(shè)計(jì)開發(fā)能力,訓(xùn)練了學(xué)生的機(jī)械產(chǎn)品制造實(shí)踐技能,提升了學(xué)生的科技創(chuàng)新能力。
參考文獻(xiàn):
[1]吳東杰主推進(jìn)裝置優(yōu)化設(shè)計(jì)及仿真研究[D].武漢:武漢理工大學(xué),2012
[2]孫樹德船舶軸系校中狀態(tài)及軸心軌跡的研究[D].大連:大連海事大學(xué),2010
[3]馮志敏,王炳輝,蒲龍?jiān)?,等船舶模擬推進(jìn)裝置的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)及其試驗(yàn)研究[J].內(nèi)燃機(jī)工程,2003(3):4-8
在學(xué)習(xí)上, 在這一年里,先后取得了普通話水平測(cè)試證書和職業(yè)技能鑒定證書,這對(duì)我今后的工作有很大的幫助。承擔(dān)創(chuàng)新課題一個(gè),并順利結(jié)題,這也是對(duì)我綜合能力的肯定。學(xué)習(xí)成績(jī)也比去年有了一定的進(jìn)步。
在生活上,我獨(dú)立自主,養(yǎng)成良好習(xí)慣,并樂助人,關(guān)心他人,與舍友、同班同學(xué)保持良好的關(guān)系。并結(jié)識(shí)一些高年級(jí)的學(xué)長(zhǎng),向其請(qǐng)教學(xué)習(xí)、工作、生活上的問題。
在工作上,積極主動(dòng),工作踏實(shí),責(zé)任心強(qiáng),具有良好的組織交際能力,注重團(tuán)隊(duì)協(xié)作精神,組織協(xié)調(diào)其他學(xué)生干部順利的完成各項(xiàng)工作。
我個(gè)人認(rèn)為自己最大的缺點(diǎn)就是喜歡一心兩用甚至多用。急功近利,喜歡一口氣學(xué)許多東西,但是貪多嚼不爛,即使最后都能學(xué)會(huì),也已經(jīng)搞得自己很疲勞。如今想想,這樣其實(shí)并不好,正所謂貴在精而不在廣。自從發(fā)現(xiàn)這個(gè)缺點(diǎn)后,我常常警戒自己,以后一定改正。
三年的大學(xué)生活,使自己的知識(shí)水平、思想境界、工作能力等方面都邁上了一個(gè)新的臺(tái)階。在這即將揮手告別美好大學(xué)生活,踏上社會(huì)征途的時(shí)候,我整軍待發(fā),將以飽滿的熱情、堅(jiān)定的信心、高度的責(zé)任感投入到新的生活環(huán)境中,去迎接新的挑戰(zhàn),攀登新的高峰。
大三學(xué)生自我鑒定范文二:大三的學(xué)生最近幾天開始寫學(xué)籍和畢業(yè)生登記表,其中有一項(xiàng)是畢業(yè)生自我鑒定,在把學(xué)籍發(fā)到同學(xué)們手里之前,我就強(qiáng)調(diào)讓大家把自己的自我鑒定先打個(gè)草稿,認(rèn)真仔細(xì)的把自己三年來的在各方面取得的成績(jī)好好的總結(jié)一下,然在在寫到自己的學(xué)籍里面,這樣做的目的一是怕學(xué)生們直接寫到學(xué)籍里會(huì)出現(xiàn)涂改現(xiàn)象,第二擔(dān)心他們自己的鑒定寫不好,看似小小的鑒定卻會(huì)影響著他們的一生,強(qiáng)調(diào)歸強(qiáng)調(diào)依然會(huì)有學(xué)生的自我鑒定只有兩三行,難道大學(xué)三年真的沒有什么可寫的嗎?下面是一個(gè)學(xué)生寫的自我鑒定的一個(gè)范文,供大家參考: 驀然回首, 不知不覺中自己的求學(xué)生涯已經(jīng)結(jié)束,給自己一個(gè)很好的定位,是對(duì)未來的憧憬和希望。
本人始終以提高自身的綜合素質(zhì)為目標(biāo),以自我的全面發(fā)展為努力方向,樹立了正確的人生觀,價(jià)值觀和世界觀,但更多的是在這期間我學(xué)到了許多書本上學(xué)不到的知識(shí),修養(yǎng)和能力,也使我的修養(yǎng)、為人處事能力以及交際能力等都有了質(zhì)的飛躍;讓我懂得了除學(xué)習(xí)以外的個(gè)人處事能力的重要性和交際能力的必要性。
在校期間學(xué)習(xí)刻苦努力,積極參加學(xué)校組織的各項(xiàng)活動(dòng),團(tuán)結(jié)同學(xué),有耐心,樂于幫助他人,深受老師和同學(xué)的好評(píng)!為適應(yīng)社會(huì)發(fā)展的需求,我認(rèn)真學(xué)習(xí)各種專業(yè)知識(shí),發(fā)揮自己的特長(zhǎng);挖掘自身的潛力,結(jié)合每年的暑期社會(huì)實(shí)踐機(jī)會(huì),從而逐步提高了自己的學(xué)習(xí)能力和分析處理問題的能力以及一定的協(xié)調(diào)組織和管理能力。
在思想上我領(lǐng)悟到與其說品德是個(gè)人的人品操行,不如說是個(gè)人對(duì)整個(gè)社會(huì)的責(zé)任。一個(gè)人活在這個(gè)世界上,就得對(duì)社會(huì)負(fù)起一定的責(zé)任義務(wù),有了高尚的品德,就能正確認(rèn)識(shí)自己所負(fù)的責(zé)任,在貢獻(xiàn)中實(shí)現(xiàn)自身的價(jià)值。
在生活中,本人樸素節(jié)儉、性格開朗,嚴(yán)以律待人。平時(shí)善于和同學(xué)溝通,也樂于幫助同學(xué),所以很多同學(xué)不管生活上還是思想方面有了困難也愿意尋求我?guī)椭?。在生活中建立了良好的人際關(guān)系,獲得大家的尊重和支持。
【關(guān)鍵詞】新時(shí)代;大學(xué)生;自我教育
中圖分類號(hào):G64 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1006-0278(2014)07-209-01
自我教育法是思想政治教育的傳統(tǒng)方法之一,也是大學(xué)生思想政治教育的主要環(huán)節(jié)和重要方法,對(duì)增強(qiáng)大學(xué)生思想政治教育的效果有著重要意義。
一、自我教育法的發(fā)展
(一)古代的自我教育法
我國(guó)古代的德育思想理論主要是以儒家思想為基礎(chǔ)的,儒家德育思想是我國(guó)傳統(tǒng)德育思想的主流。而儒家的自我教育思想是儒家德育思想的重要內(nèi)容。儒家先賢以自己對(duì)人性的深刻理解和洞察,對(duì)道德自我教育進(jìn)行了闡發(fā),形成了一整套較為系統(tǒng)的自我教育方法。儒家自我教育思想發(fā)端于儒家的心性之學(xué)。從孔子開始儒家就主張德性發(fā)乎人的內(nèi)心、基于人的本性。
從孔子到宋明理學(xué),儒家心性之學(xué)關(guān)注的核心是人自身內(nèi)心的教化,反映了儒家對(duì)主體自我的肯定,體現(xiàn)了儒家對(duì)個(gè)體內(nèi)心精神世界的關(guān)切。這意味著儒家道德教育的價(jià)值取向是強(qiáng)調(diào)自我內(nèi)心的一種“定力”,主張?jiān)谌说膬?nèi)心中尋找善惡美丑的標(biāo)準(zhǔn),訴求的首先是人的“自律”而不是“他律”。這就為儒家道德自我教育思想奠定了理論基礎(chǔ)。
(二)新時(shí)期下的大學(xué)生自我教育法
理論要隨著實(shí)踐的發(fā)展而不斷地豐富自身。改革開放以來,社會(huì)的進(jìn)步、環(huán)境的變遷、思想政治教育實(shí)踐活動(dòng)的拓展以及新時(shí)期大學(xué)生的新變化都對(duì)大學(xué)生思想政治教育中自我教育法的運(yùn)用提出了新要求。然而,當(dāng)今的教育研究只是注意探討教育如何激發(fā)學(xué)生的方法,往往不去研究如何使學(xué)生掌握自我激發(fā)的方法。
大學(xué)生思想政治教育只有在大學(xué)生有了自我教育的要求,即有了充分的自覺性時(shí)才是有效的。促進(jìn)大學(xué)生自我教育的因素有二:一是外界影響,即是社會(huì)和家庭、學(xué)校的要求。二是內(nèi)在要求,是指大學(xué)生自身對(duì)物質(zhì)和精神的要求。因此,教師運(yùn)用這個(gè)方法時(shí),要激越大學(xué)生的進(jìn)取心,要提出對(duì)其品行的具體要求,要指出大學(xué)生的缺點(diǎn)和弱點(diǎn),使大學(xué)生有針對(duì)性地進(jìn)行自我教育。
美國(guó)教育家杜威對(duì)自我教育的倡導(dǎo)和研究確立了教育史上又一里程碑,他的“表先個(gè)性、培養(yǎng)個(gè)性、反對(duì)從上而下的灌輸“成為合理的自我教育的基本原則。教育和自我教育是傳承人類文化的兩種途徑與手段。在進(jìn)入知識(shí)經(jīng)濟(jì)時(shí)代的今天,大學(xué)生自我教育的重要性愈加凸現(xiàn),因此對(duì)自我教育的研究與剖析將有助于高校對(duì)教育的重新思考。
二、大學(xué)生進(jìn)行自我教育的可能性
(一)大學(xué)生思想政治教育中自我教育的內(nèi)涵
湯秀云認(rèn)為,“自我教育是人們?yōu)榱俗约旱乃枷脒M(jìn)步而進(jìn)行的自覺的思想轉(zhuǎn)化和行為控制的活動(dòng)。”。蘭剛認(rèn)為,“自我教育,就是以自我價(jià)值判斷為標(biāo)準(zhǔn),在原有觀念和價(jià)值圖式的基礎(chǔ)上,對(duì)外來信息進(jìn)行反應(yīng)所形成的品質(zhì)的過程。”。
顧名思義,大學(xué)生的自我教育法是大學(xué)生按照學(xué)校思想政治教育的目標(biāo)和要求,主動(dòng)提高自身思想認(rèn)識(shí)和道德水平以及自覺改正自己錯(cuò)誤思想和行為的方法。這種教育方法,是通過大學(xué)生自身思想的矛盾運(yùn)動(dòng)開展的,也是大學(xué)生自覺接受先進(jìn)思想和正確行為,克服錯(cuò)誤思想和不良行為,促使自己的政治傾向和思想品德向良好的方向轉(zhuǎn)化、發(fā)展的教育方法。
(二)大學(xué)生進(jìn)行自我教育的可能性
進(jìn)入大學(xué)的青少年年齡基本上在18歲,這個(gè)年齡階段的青少年在身體和心理方面都發(fā)生了顯著變化,例如身體發(fā)育已經(jīng)成熟,機(jī)能基本成人化;隨著年齡的增長(zhǎng),邏輯思維發(fā)達(dá),越來越富于獨(dú)立性、批判性;情感豐厚奔放,文飾性與開放性并存;自我意識(shí)增強(qiáng),獨(dú)立意向顯著;富有遠(yuǎn)大理想,注重面對(duì)實(shí)際;世界觀趨于成熟,可塑性依然存在。大學(xué)生的這些身心上的變化,為其進(jìn)行自我教育提供了可能性。
三、新時(shí)期大學(xué)生自我教育的方法
第一,自我修養(yǎng)。所謂自我修養(yǎng),就是大學(xué)生在其思想、道德、政治以及知識(shí)等方面進(jìn)行自我教育和自我鍛煉,以及由此而達(dá)到的一定程度和水平。大學(xué)生可以通過反省、反思來提高自我修養(yǎng)水平。
第二,自我總結(jié)。大學(xué)生在學(xué)校里每天的生活豐富多彩,因此,大學(xué)生要善于每天進(jìn)行總結(jié),在總結(jié)中發(fā)現(xiàn)自己近期在思想、道德、政治和學(xué)習(xí)上的進(jìn)步與不足。通過自我總結(jié),提高和完善自身的反思能力。
本人性格開朗,待人熱情大方,具有良好的口頭表達(dá)能力,善于與他人交際,有一定的組織、管理能力,工作細(xì)心、大膽、能夠積極的思考、創(chuàng)新。本人在大學(xué)期間,一直擔(dān)任班團(tuán)支書,系學(xué)生會(huì)干事,后工作積極,擔(dān)任院學(xué)生會(huì)勤工助學(xué)部部長(zhǎng),并在學(xué)校創(chuàng)辦了市場(chǎng)營(yíng)銷協(xié)會(huì)兼任會(huì)長(zhǎng),對(duì)于以后工作的規(guī)劃,5年內(nèi)實(shí)現(xiàn)財(cái)富自由,10年后希望可以創(chuàng)辦屬于自己的公司‘
對(duì)事物有敏銳的洞察力;能很好得與人溝通,具有團(tuán)隊(duì)合作精神;對(duì)負(fù)責(zé)的工作會(huì)付出全部精力和熱情,制定縝密計(jì)劃,力爭(zhēng)在最短時(shí)間內(nèi)將目標(biāo)達(dá)成;喜歡挑戰(zhàn),能在較短時(shí)間內(nèi)適應(yīng)高壓力的工作。
畢業(yè)后進(jìn)入企事業(yè)單位從事管理方面的工作,同時(shí)增加自己有關(guān)企業(yè)管理方面的經(jīng)驗(yàn),在企業(yè)里面認(rèn)真工作,通過自己的努力及領(lǐng)導(dǎo)的幫助指導(dǎo),爭(zhēng)取在五年內(nèi)做到中層以上的一名管理人員。
我雖然沒有什么社會(huì)經(jīng)驗(yàn),但我能吃苦耐勞,我曾在高中有兩個(gè)暑假到酒店打工,也在那洗過碗,而且我很有上進(jìn)心,只要自己想做的事,從來沒有做不到的,請(qǐng)相信我,我敢保證,選我是你們永不后悔的選擇。
學(xué)會(huì)自立、勤奮努力,認(rèn)真對(duì)待學(xué)習(xí),掌握扎實(shí)的專業(yè)技能知識(shí),有較強(qiáng)的適應(yīng)力和學(xué)習(xí)能力。為了積累經(jīng)驗(yàn),做事積極主動(dòng),能很好地與人交流溝通,有強(qiáng)烈的團(tuán)隊(duì)合作精神和服務(wù)精神。
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