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乙方:________________________
經(jīng)甲、乙雙方友好協(xié)商,就乙方向甲方提供《報關(guān)管理系統(tǒng)》(以下簡稱《系統(tǒng)》)軟件及安裝等事宜,達成如下協(xié)議:
第一條 概述
1.《系統(tǒng)》軟件由天津報關(guān)協(xié)會規(guī)劃、設(shè)計和組織實施,《系統(tǒng)》軟件版權(quán)為天津報關(guān)協(xié)會所有。
2.乙方受天津報關(guān)協(xié)會委托,負責《系統(tǒng)》的開發(fā)?!断到y(tǒng)》軟件的安裝、使用受天津報關(guān)協(xié)會的監(jiān)督指導。
第二條 價格
1.《系統(tǒng)》軟件及安裝費用分為三個檔次,即:單機版人民幣_________________元整,網(wǎng)絡(luò)標準版(_________________個點)人民幣________________元整,網(wǎng)絡(luò)增強版(_____-_____個點)人民幣_________________元整,甲方如為天津報關(guān)協(xié)會會員單位可享受八折優(yōu)惠。甲方?jīng)Q定使用乙方《系統(tǒng)》軟件_________________ 版,價格為人民幣_________元整。
2.乙方委托天津開發(fā)區(qū)中環(huán)系統(tǒng)電子工程有限公司作為該《系統(tǒng)》的安裝和維護服務(wù)單位。維護服務(wù)范圍及價格由甲方與天津開發(fā)區(qū)中環(huán)系統(tǒng)電子工程有限公司另行簽署《維護服務(wù)協(xié)議》。
第三條 付款方式
甲、乙雙方簽訂本協(xié)議后,甲方應(yīng)向乙方一次性付清《系統(tǒng)》軟件的安裝使用費用。乙方為甲方開具“天津三益科技發(fā)展有限公司《系統(tǒng)》軟件費發(fā)票”。
第四條 安裝及操作培訓
一、自本協(xié)議生效之日起,甲、乙雙方共同商定《系統(tǒng)》軟件的具體安裝、調(diào)試時間,乙方應(yīng)在商定日期后五個工作日內(nèi)完成安裝、調(diào)試工作,并向甲方免費提供安裝光盤一張。
二、《系統(tǒng)》安裝、調(diào)試工作完成后,由乙方安排對甲方操作人員進行培訓。
第五條 《系統(tǒng)》軟、硬件環(huán)境要求
甲方應(yīng)向乙方提供能夠滿足安裝《系統(tǒng)》所需的基本軟件及硬件環(huán)境,具體要求如下:
一、網(wǎng)絡(luò)版:
1.服務(wù)器硬件配置:
p4 2.4以上,512m以上內(nèi)存,40g以上硬盤;
軟件環(huán)境:windowsXXserver+sqlserverXX;
2.客戶端硬件配置:
p4 1.6以上,128m以上內(nèi)存,40g以上硬盤;
軟件環(huán)境:windowsXX?windowsxp;
3.網(wǎng)絡(luò)環(huán)境:
具有局域網(wǎng)環(huán)境??10/100 m到桌面;
二、單機版:
p4 2.4以上,512m以上內(nèi)存,40g以上硬盤;
軟件環(huán)境:windowsXXserver+sqlserverXX。
第六條 乙方提供服務(wù)范圍
1.《系統(tǒng)》服務(wù)器端軟件安裝及調(diào)試;
2.《系統(tǒng)》客戶端軟件安裝及調(diào)試。
第七條 如甲方提供的操作系統(tǒng)及其他軟件產(chǎn)生的法律糾紛,乙方不負任何責任,甲方將自行承擔一切后果。
第八條 《系統(tǒng)》版權(quán)歸天津報關(guān)協(xié)會所有,甲方享有《系統(tǒng)》的使用權(quán)。未經(jīng)天津報關(guān)協(xié)會許可,任何一方不得將《系統(tǒng)》的部分或全部擅自修改、轉(zhuǎn)讓、出售或移作他用。
第九條 本協(xié)議受法律保護,甲、乙雙方共同遵守,本協(xié)議一式兩份,甲、乙雙方各持一份,未盡事宜由甲、乙雙方協(xié)商解決。
【關(guān)鍵詞】工程機械 質(zhì)保期 設(shè)備管理
中圖分類號: TU713 文獻標識碼: A 文章編號:
一.前言
按照慣例,工程機械的購銷合同中會明確約定質(zhì)保期。質(zhì)保期的約定期限一般有兩種,一種是自出廠之日或到貨之日起的一段時間,另一種是機器在買方現(xiàn)場正常工作的累計時間。采取第二種質(zhì)保期計算方法的,在機器上一般裝有工作計時裝置。一般情況下,買賣雙方會對以上兩個期限都進行約定,以先到的期限為準。質(zhì)保期內(nèi)的工程機械剛剛制造完成,經(jīng)過出廠檢驗,來到客戶現(xiàn)場,設(shè)備沒有經(jīng)過磨合,還不能滿負荷工作,設(shè)備的工作性能不能立刻得到充分驗證。
但是,做好質(zhì)保期設(shè)備管理卻有一些獨特的有利條件。新購置的工程機械是施工企業(yè)的“新家當”,領(lǐng)導和職工都會更加關(guān)注,操作手和維修人員會有很高的熱情學習操作和維修;工程機械產(chǎn)品在質(zhì)保期內(nèi)發(fā)生故障,制造商會免費提供維修服務(wù),免費供應(yīng)配件。有的制造商對質(zhì)保期內(nèi)的銷售設(shè)備會進行重點跟蹤,配備專門的技術(shù)人員,甚至會在客戶現(xiàn)場或臨近地區(qū)儲備配件。質(zhì)保期是設(shè)備在客戶現(xiàn)場度過的第一段時間,對于設(shè)備的整個生命周期來說,是非常重要的一段時期。買方應(yīng)十分重視工程機械的質(zhì)保期管理,利用各方面有利條件,做好質(zhì)保期內(nèi)的設(shè)備管理。
二.機器到貨之前的準備
工程機械購銷合同訂立以后,到設(shè)備抵達買方現(xiàn)場之前這一段時間,買方應(yīng)做好迎接準備。這些準備包括人員準備、物資準備、場地準備和生產(chǎn)任務(wù)準備。
1.場地準備
設(shè)備到貨之前,要騰出適宜的場地作為設(shè)備的存放地。參考設(shè)備的具體情況,存放地除了要有足夠大的面積和入口,還要考慮是否能夠滿足保溫、防水等特殊要求。有條件的單位,可以在存放場所準備必要的維護、維修設(shè)施,如起重設(shè)施、加油泵等。野外作業(yè)的設(shè)備,或者大型設(shè)備,在特殊季節(jié)和特殊天氣條件下,都應(yīng)采取適當?shù)姆雷o措施,應(yīng)準備防護用品。
2. 物資準備
設(shè)備到貨之前,應(yīng)適量儲備設(shè)備運行所需的各種物資,如燃料、油、脂、冷卻液、液壓油、濾紙、濾芯、清洗劑、膠粘材料和密封材料等。
3.人員準備
設(shè)備是要人來管的,所以首先應(yīng)該做好的準備是人的準備。領(lǐng)導重視是管好設(shè)備的前提。主管領(lǐng)導要切實關(guān)心新設(shè)備的管理,要經(jīng)常檢查、督促新設(shè)備的管理工作。工程機械購銷合同訂立之后,主管領(lǐng)導應(yīng)組織成立一個設(shè)備管理小組,小組成員應(yīng)包括設(shè)備管理干部、操作手和維修工等。設(shè)備管理干部負責制定設(shè)備管理制度、維修保養(yǎng)計劃,并督促實施,檢查運行情況,協(xié)調(diào)處理重大故障,向上級匯報相關(guān)情況。根據(jù)作業(yè)安排,應(yīng)為新購設(shè)備指定若干名操作手和維修工,以老少搭配為宜。有些企業(yè),沒有為處在質(zhì)保期的設(shè)備指定管理責任干部和操作手、維修工,人人都可以操縱設(shè)備,這樣是不妥當?shù)?,不僅造成責任混亂,也不利于人員熟悉設(shè)備。
4.生產(chǎn)任務(wù)準備
生產(chǎn)任務(wù)的準備也是準備工作的重要內(nèi)容。盡量在設(shè)備到貨之前,把施工的前期工作做好,使設(shè)備到貨就可以進場工作。如果前期工作尚未完成,設(shè)備到貨之后不能立刻投入施工,甚至要擱置很長一段時間,在此期間仍要對設(shè)備進行管理維護,不但不能創(chuàng)造效益,而且浪費很多管理費用,也耽誤質(zhì)保期的寶貴時間。
三.工程機械質(zhì)保期管理應(yīng)注意的問題
1. 培訓
設(shè)備主管要組織操作手和維修工結(jié)合使用說明書和設(shè)備實物進行集體學習和培訓,即便是企業(yè)里有類似設(shè)備,甚至是同型號的設(shè)備,也要這樣做。設(shè)備操作和維修的安全注意事項在說明書上會明顯標注出來;制造企業(yè)會根據(jù)客戶反饋不斷改進設(shè)計;不同零部件供應(yīng)商的產(chǎn)品在操作和維修上可能存在差異;不同的機器肯定存在一些特殊的特點,需要操作手和維修工本著謙虛謹慎的態(tài)度慢慢摸索和掌握。最好請制造企業(yè)的服務(wù)人員進行面授,因為他們在工作過程中處理的問題較多,經(jīng)驗更豐富。我們接觸的企業(yè)中,很多操作手沒有經(jīng)過培訓,沒有完整地看過設(shè)備使用說明書,有些操作手和維修工甚至沒有看過說明書。
2.編制設(shè)備管理文件
驗收之后,應(yīng)結(jié)合設(shè)備特點和施工企業(yè)的現(xiàn)實條件,制定點檢規(guī)程、維護保養(yǎng)計劃和規(guī)程、設(shè)備安全操作規(guī)程等設(shè)備管理文件。這些文件的編制應(yīng)立足實際,保證能夠貫徹和執(zhí)行。很多施工企業(yè)的設(shè)備管理制度很全,但是針對性和操作性不強,不能指導管理實踐。
3.設(shè)備驗收
設(shè)備到貨之后,設(shè)備管理小組成員應(yīng)按技術(shù)協(xié)議和程序認真驗收設(shè)備。如有些件需到貨后安裝,有的單位潦草驗收,沒有按要求安裝,結(jié)果導致設(shè)備在施工中受損。另外,設(shè)備在運輸過程中造成的損傷,在驗收時也應(yīng)及時發(fā)現(xiàn)和處理。隨機備件、隨機工具和隨機文件是包含在設(shè)備總價中的,是買方的財產(chǎn)。如果數(shù)量不齊,就像買方的財產(chǎn)丟失一樣。隨機工具包含一些設(shè)備維修需用的特殊工具,如果不按照清單仔細查點,或者保管不利,發(fā)生故障時,找不到工具,會大大增加維修難度,從而使設(shè)備故障停機時間延長。隨機文件是設(shè)備管理的重要依據(jù),是員工培訓的教材,可以為管好用好設(shè)備提供很多方便。
4.磨合期管理
設(shè)備初投入使用需要進行磨合。磨合期的維護和保養(yǎng)十分重要。磨合好的設(shè)備能夠最大程度地發(fā)揮設(shè)備的效能,降低故障頻率,延長服役年限。設(shè)備要按照制造商提供的磨合規(guī)范進行早期使用磨合,沒有提供磨合規(guī)范的,要征求制造商的意見,根據(jù)的論述較多,不再贅述。在實踐中,需要強調(diào)的有兩點:第一是不能在超出設(shè)備能力的工況下長期工作,否則可能對設(shè)備造成永久傷害;第二是不能擠占保養(yǎng)時間或敷衍保養(yǎng),包括日常點檢、維護和小故障的處理,小問題可能積累成大問題。有時候會碰到這樣的現(xiàn)象,一個大部件損壞的原因卻是一個銷軸的限位卡板松動沒有及時處理。
5.做好設(shè)備運行記錄
做好設(shè)備運行記錄是質(zhì)保期設(shè)備管理的重要內(nèi)容。結(jié)合設(shè)備特點和施工企業(yè)的條件,設(shè)備運行記錄包括設(shè)備點檢表、設(shè)備維護保養(yǎng)記錄、設(shè)備維修記錄。在設(shè)備運行前,應(yīng)進行班前點檢,檢查整機是否存在泄漏、松動等異常情況,對設(shè)備進行空運轉(zhuǎn)檢查,進行必要的調(diào)整、緊固、作業(yè),還包括操作規(guī)程要求的作業(yè)準備。設(shè)備作業(yè)過程中,操作手需注意對傳動系統(tǒng)、工作機構(gòu)的溫度、噪聲、異響等情況的觀察。結(jié)束作業(yè)后,應(yīng)對設(shè)備進行日常保養(yǎng),如清洗擦拭,恢復設(shè)備的清潔狀態(tài),檢查運行材料的消耗情況,查看油溫、水溫。按照維護保養(yǎng)計劃,按期對設(shè)備進行保養(yǎng)。設(shè)備發(fā)生故障時,要及時進行維修。設(shè)備維修記錄應(yīng)將故障發(fā)生的原因、維修的方法、耗用的材料、避免故障再次發(fā)生的措施完整記錄下來。做好設(shè)備運行記錄并仔細研究,才能分析出設(shè)備的運行規(guī)律。
6.質(zhì)保期進程控制
質(zhì)保期的工程機械在磨合完成之后,保證正常維護保養(yǎng)的情況下,應(yīng)安排滿負荷工作。如果質(zhì)保期是以累計工作時間和到貨時間兩種方式計算,以先到為準,那么,有條件的企業(yè)應(yīng)對質(zhì)保期的進程進行控制。如果質(zhì)保期結(jié)束時,以另一種方法計算的質(zhì)保期也接近結(jié)束,進程控制得較好。這樣安排,主要是考慮到在質(zhì)保期內(nèi),設(shè)備工作的時間盡可能長,而且能夠考驗出設(shè)備在不同季節(jié)的工作狀況。
7.重大故障的處理
在設(shè)備發(fā)生重大故障時,需通知制造商處理。特別是出現(xiàn)關(guān)鍵件損壞的情況,需保護好現(xiàn)場,做好故障記錄,分析故障原因,查驗相關(guān)件的受損情況,評估故障性質(zhì),是否屬于質(zhì)量問題,提出相應(yīng)的處理措施。在更換故障件后,需重新約定質(zhì)保期。
四.搞好工程機械維修管理的對策
針對工程機械質(zhì)保期管理中可能存在的問題,應(yīng)尋找出做好工程機械質(zhì)保期管理的對策。
加強管理人員的培訓,提高管理人員的技術(shù)水平目前,隨著許多新型工程機械的投入使用,使得部隊對于工程機械管理人員的需要越來越多,要求也越來越高。同時,不會用、不會修、不會管的問題也日益突出。為此,應(yīng)積極探索施工企業(yè)與院校聯(lián)手培養(yǎng)專業(yè)管理維修技術(shù)人員的路子以及大力抓好在職職工的培訓,廣泛開展崗位練兵、技術(shù)比武的活動。從而提高有關(guān)人員的管理維修水平,以保證修理質(zhì)量。
2.工程機械的維護保養(yǎng)工作維護保養(yǎng)是保持工程機械完好率,延長其使用壽命最直接有效的手段之一 。應(yīng)堅持作好工程機械的日常維護保養(yǎng)和定期維護保養(yǎng)工作,落實各項維 護保養(yǎng)制度,做到時間、人員、內(nèi)容、質(zhì)量四落實。針對具體環(huán)境和工程機械存在的不足,有重點地進行維護,對可能發(fā)生的故障,預(yù)先采取措施,保證在工程機械出現(xiàn)故障時能及時進行修復。
3.重視科研,注重搞好國外工程機械的國產(chǎn)化改造針對國外工程機械品種多、型號雜的特點,應(yīng)組織技術(shù)骨干對引進工程機械的資料進行翻譯整理,做好維修技術(shù)以及新技術(shù)、新工藝、新材料的推介紹進口工程機械零配件的國產(chǎn)化情況,搞好工程機械的技術(shù)消化、開發(fā)和革新。對一些年代久、耗油量大、效率低的國外工程機械,進行分析研究,提出國產(chǎn)化改造的可行性分析。
4.建立工地管理維修組負責工程機械的現(xiàn)場管理、保養(yǎng)以及維修工作,及時處理現(xiàn)場的工程機械故障 。根據(jù)工程機械使用情況,制定維修計劃使工程機械對工程施工的影響降至最低。
采用先進的檢測技術(shù)現(xiàn)代化的監(jiān)控檢測儀器是搞好工程機械管理維修預(yù)防的重要工具。工程機械零部件的磨損速度差異很大,為了做到適時保養(yǎng),應(yīng)采用先進的監(jiān)控檢測儀器,準確測出故障部位,避免盲目性造成的損失, 延長機器使用壽命。
6.做好工程機械配件的采購、供應(yīng)工作工程機械配件的供應(yīng)工作,直接影響工程機械的管理維修進度、質(zhì)量和成本。 做好這項工作首先要充分了解工程機械的使用情況、技術(shù)狀況、配件的消 耗量和采購供應(yīng)時間、周期等,然后應(yīng)協(xié)同有關(guān)部門,對近期的工程機械的 施工和訓練任務(wù)充分掌握,根據(jù)具體情況編制配件采購計劃,力求以最小的庫 存量,滿足工程機械管理維修過程中對配件的需求。
7.采取積極措施,預(yù)防安全事故的發(fā)生主要包括:制定管理維修作業(yè)安全規(guī)程,加強管理作業(yè)的安全教育,實施管理安全系統(tǒng)工程;使用合格的機具等。
8.處理好工程機械的管理、維修以及使用的關(guān)系工程機械管理維修是為了保證工程機械更好的使用,因此在編制工程機械使用計劃和下達工程機械使用的任務(wù)時,應(yīng)同時了解工程機械的技術(shù)狀況,編制工程機械管理維修計劃。此外,做好預(yù)防管理維修工作,盡早發(fā)現(xiàn)工程機械的異?,F(xiàn)象,合理,安排人力,準備配件、工具、量具和工藝設(shè)備,達到高質(zhì)量、低費用管理好工程機械。
9.做好管理維修檔案資料的收集和整理工作管理維修檔案資料的收集、整理工作是對管理維修工作的總結(jié)內(nèi)容的一部分 ,搞好這項工作對今后的管理維修工作和故障分析有很大的幫助。
五.結(jié)束語
通過抓好質(zhì)保期的管理,摸清設(shè)備運行初期的規(guī)律,為設(shè)備后續(xù)管理和作業(yè)準備基礎(chǔ)條件;利用設(shè)備狀況最好的這段時間,可以訓練出一批成熟的操作手和維工,為企業(yè)培養(yǎng)人才;整理和研究質(zhì)保期設(shè)備運行記錄,為管理同類設(shè)備和做好其他設(shè)備的質(zhì)保期管理提供借鑒??傊?,要通過做好質(zhì)保期管理,管出好設(shè)備,達到鍛煉隊伍,提升管理水平的目的以往設(shè)備管理經(jīng)驗,制定一個磨合規(guī)范。
參考文獻:
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[2]岳波, 淺談工程機械設(shè)備管理的現(xiàn)狀及對策[J] 黑龍江科技信息,2011
乙方:
甲、乙雙方根據(jù)《保密制度》以及國家、地方政府有關(guān)規(guī)定,雙方在遵循平等自愿、協(xié)商一致、誠實信用的原則下,保障甲方利益不受損失,確保乙方職業(yè)道德和行為操守,現(xiàn)就甲方商業(yè)秘密保密事項達成如下協(xié)議:
第一條 秘密信息
1、甲方的重大決策;
2、甲方經(jīng)營活動中尚未付諸實施的經(jīng)營戰(zhàn)略、經(jīng)營方向、經(jīng)營規(guī)劃、經(jīng)營方案、經(jīng)營項目、經(jīng)營決策等;
3、甲方內(nèi)部掌握的合同、協(xié)議、意向書及可行性報告、重要的會議記錄;
4、甲方財務(wù)預(yù)決算報告及各類財務(wù)憑證、帳冊、報表;
5、甲方統(tǒng)計報表、審計報告書;
6、甲方職員檔案、工資、勞務(wù)收入資料;
7、其它經(jīng)甲方確定應(yīng)當保密的事項:甲方工程技術(shù)方案、規(guī)劃設(shè)計、制造方法、配方、工藝流程、技術(shù)指標、計算機軟件、數(shù)據(jù)庫、技術(shù)報告、檢測報告、圖紙、樣品、操作手冊、技術(shù)文檔、客戶名單、行銷計劃、采購資料、定價政策、進貨渠道相關(guān)的函電等等。
第二條 保密范圍
1、乙方在勞動合同期前所持有的研發(fā)成果和技術(shù)秘密,經(jīng)雙方協(xié)議乙方同意被甲方應(yīng)用的;
2、乙方在勞動合同期內(nèi)職務(wù)發(fā)明、工作成果、研發(fā)成果和專利技術(shù);
3、乙方在勞動合同期前甲方已有的商業(yè)秘密;
4、乙方在勞動合同期內(nèi)甲方所擁有的商業(yè)秘密。
第三條 保密期限
1、勞動合同期內(nèi);
2、甲方的專利技術(shù)未被公眾知悉期內(nèi)。
第四條 違約責任
1、在勞動合同期內(nèi),乙方違反此協(xié)議,雖未造成甲方經(jīng)濟損失,但給甲方正常生產(chǎn)經(jīng)營活動帶來麻煩的,甲方有權(quán)調(diào)離乙方涉密崗位,并予以行政處分;
2、在勞動合同期內(nèi),乙方違反此協(xié)議,造成甲方輕微經(jīng)濟損失的,甲方可解除乙方的勞動合同;
3、在勞動合同期內(nèi),乙方違反此協(xié)議,造成甲方較大經(jīng)濟損失或甲方重大經(jīng)濟損失的,甲方予以乙方解除的行政處罰,并追加經(jīng)濟損失賠償,構(gòu)成犯罪的,上訴人民法院,依法追究乙方刑事責任;
4、甲、乙雙方因履行本協(xié)議發(fā)生爭議和違約責任的執(zhí)行超過法律、法規(guī)、賦予雙方權(quán)限的,可向甲方所在地勞動仲裁機構(gòu)申請仲裁或向人民法院提出上訴。
第五條 其他
本協(xié)議一式兩份,甲、乙雙方各執(zhí)一份,經(jīng)甲、乙雙方簽字蓋章之日起生效。
甲方:
年
月
日
乙方
年
【關(guān)鍵詞】 醫(yī)療器械 使用管理 維修養(yǎng)護 管理制度
醫(yī)療器械作為醫(yī)生診斷病人病情的重要工具,其在早期預(yù)防、檢查、控制、康復及治療方面起到不可忽視的作用。但醫(yī)療器械不僅需要醫(yī)護人員專業(yè)的技術(shù),他還需要有專業(yè)的技術(shù)人員能夠定期檢查維護以及維修。而由于醫(yī)療器械品種眾多,發(fā)展速度快且技術(shù)含量高,再考慮到醫(yī)院沒有專業(yè)的醫(yī)療器械維修人員,所以便導致了醫(yī)護人員檢查效率偏低、設(shè)備壽命短等現(xiàn)象,也給醫(yī)院的利益等方面帶來影響。
1、醫(yī)療器械在使用和維修中存在的問題
由于多數(shù)醫(yī)院在器械的維修上重視度不夠,導致了醫(yī)療器械使用壽命短、性能降低等問題。現(xiàn)在醫(yī)院人流量大,而完好的器械可以幫助醫(yī)護人員準確快速判斷病人病情,但如果因醫(yī)療器械沒能及時維修或是維修程度不夠好,將會在很大程度上影響醫(yī)生效率。再向長遠考慮,如果因設(shè)備維修欠佳導致的設(shè)備精準度不夠、設(shè)備老化等問題,影響病人的看病時間以及醫(yī)治效果甚至危及病人的生命財產(chǎn);以及因設(shè)備壽命縮短而導致的醫(yī)院購買新機周期變短而使企業(yè)用于購買器械的資金變多,這樣下去對病人對醫(yī)院都是百害無一利。
由于醫(yī)療器械在不斷發(fā)展,涉及到計算機、光學等各個學科,醫(yī)院也會從國外引進醫(yī)療器械等,這些情況說明了維修人員需要有足夠的技術(shù)來應(yīng)對器械可能產(chǎn)生的問題,需要復合型人才的加入;再考慮到醫(yī)院維修器械人員往往學歷偏低,沒有專業(yè)的知識作支撐不能夠與時俱進,這些因素都給醫(yī)院醫(yī)療器械的維修管理帶來困難,使得器械出現(xiàn)問題后不能及時判斷問題并維修。若醫(yī)院沒有專業(yè)的器械維修管理人員,醫(yī)院掌握的有關(guān)器械的情況少,這對醫(yī)院購置新器械是極其不利的,因為醫(yī)院處于被動地位,價格維修費用等完全由廠家操控。
2、醫(yī)療器械使用管理和維修保養(yǎng)的措施
在醫(yī)療器械的使用上,醫(yī)院制定相關(guān)制度來獎懲醫(yī)護人員使用設(shè)備的情況,同時加強醫(yī)護人員自身責任意識,從內(nèi)心愛護機器善用機器。醫(yī)護人員應(yīng)該以為人民服務(wù)為基本出發(fā)點,提高專業(yè)知識增強職業(yè)道德素質(zhì)。醫(yī)院建立起設(shè)備操作、保養(yǎng)有關(guān)標準,對設(shè)備使用情況良好的醫(yī)護人員加以激勵,實行適當獎賞,并將對設(shè)備的使用情況納入對醫(yī)護人員的評判標準中,采用這些方法來加強醫(yī)生對設(shè)備使用及保養(yǎng)得責任心。在設(shè)備投入使用后,一段時間過后對設(shè)備整體情況進行分析,對醫(yī)療器械的使用情況、回收情況等分析,根據(jù)使用過程中的情況大家相互交流,對設(shè)備的了解情況增加,提出提高設(shè)備使用率的建議。
由于醫(yī)療器械在不斷發(fā)展,制造人員對器械的要求程度提高,那么在這種情況下便需要醫(yī)院人員對設(shè)備做好保養(yǎng)工作,以免影響測量精度、速度等。對設(shè)備的保養(yǎng)能夠有效地防止或減少設(shè)備出現(xiàn)問題的情況。對設(shè)備的保養(yǎng)主要包括三方面:對器械存放室進行檢查、對設(shè)備進行檢查、加強技術(shù)人員的技術(shù)培訓。設(shè)備存放位置需要考慮此位置的溫度是否適中、濕度不要過高、盡量將設(shè)備停放在陰涼的位置避免陽光直射、通風情況良好以及設(shè)備自身需要的特殊條件。定期檢查設(shè)備使用情況,查看是否出現(xiàn)磨損或是設(shè)備因運轉(zhuǎn)不正常而提前顯示的一些小狀況,如果出現(xiàn)問題,及時排除故障以使設(shè)備正常工作。在技術(shù)人員操作時,避免因為對設(shè)備了解不夠或技術(shù)水準不高而對設(shè)備運轉(zhuǎn)產(chǎn)生的影響,所以要加強技術(shù)人員的專業(yè)技術(shù)培訓。
因為醫(yī)療器械品類多涉及領(lǐng)域?qū)拸V,并且醫(yī)院維修人員專業(yè)知識不達標,不能夠短時間有效率的維修這些設(shè)備,所以醫(yī)院應(yīng)該成立相關(guān)部門,招收專業(yè)人才,將維修醫(yī)療器械專業(yè)化,提高醫(yī)院整體效率。維修人員因為具備相關(guān)知識,并且他們的學習能力強可以快速應(yīng)對日益發(fā)展的醫(yī)療器械,他們可以避免只維修設(shè)備表面的情況,從根本上維修設(shè)備,這樣也可以延長設(shè)備使用壽命,達到投資少見效快的目的。再者,因為醫(yī)院積極引用這種創(chuàng)新型技術(shù)型人才,醫(yī)院其他工作人員也會被此激勵,不斷學習來提升自己的專業(yè)知識,從而醫(yī)院形成創(chuàng)新學習這種良好風氣。
3、完善醫(yī)療器械的管理并制定相應(yīng)制度
在設(shè)備的購買上,考慮性價性能等因素,發(fā)揮設(shè)備科的主導作用。設(shè)備科根據(jù)行業(yè)情況、以及科內(nèi)人員信息了解情況為醫(yī)院購買設(shè)備提出合理建議。同時,醫(yī)院購買人員應(yīng)該廣泛聽取意見,和行業(yè)尖端人員盡量對話經(jīng)過多方位篩選,選擇出適合本醫(yī)院的醫(yī)療器械。在購買階段,嚴格實行采購計劃,發(fā)揮規(guī)章制度的監(jiān)督作用。
加強對設(shè)備的檔案環(huán)節(jié)管理,因為醫(yī)療設(shè)備設(shè)計的檔案多,包括資料檔案、計量檔案、維修檔案等,所以設(shè)備的檔案管理也是一項需要細心、工作量大的任務(wù)。原來,醫(yī)院對檔案整理不夠重視,沒有嚴格的操作流程以及檔案整理分類方法。如今可以運用電腦將這些檔案儲存起來,根據(jù)檔案生成的數(shù)據(jù),將檔案整理工作規(guī)范起來。當然醫(yī)院也可以建立醫(yī)療設(shè)備檔案智能管理系統(tǒng),醫(yī)院人員可以在此設(shè)備查看器械使用情況,了解器械相關(guān)知識,使各部門能夠及時完整的輸入設(shè)備使用情況,維修情況以及計量的準確性。檔案管理人員根據(jù)輸入的設(shè)備情況,及時全方位了解設(shè)備情況,使得檔案管理更加科學化。
醫(yī)療器械在醫(yī)學中的投入應(yīng)用比例不容小覷,設(shè)備是否完全最大化投入使用關(guān)系到醫(yī)院的整體盈利情況,所以現(xiàn)在醫(yī)院應(yīng)該加強醫(yī)療器械的使用管理和維修保養(yǎng)。而從上述情況可以看出,醫(yī)療器械的使用和維修保養(yǎng)涉及到多方面,它需要有足夠的技術(shù)支持,有足夠的數(shù)據(jù)分析以及操作人員的責任心。
【參考文獻】
[1] 趙俊婭,手術(shù)室醫(yī)院感染控制與管理[J].中國實用醫(yī)藥,2015,(7):44.
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關(guān)鍵詞:手術(shù)室 腔鏡儀器 管理 器械 清洗保養(yǎng)
【中圖分類號】R-1 【文獻標識碼】B 【文章編號】1671-8801(2013)10-0614-02
本文將探討手術(shù)室腔鏡儀器管理與器械清洗保養(yǎng)正確措施,為提高患者手術(shù)成功率,降低其術(shù)后腔鏡相關(guān)并發(fā)癥提供可靠依據(jù),保障患者生活質(zhì)量與生命安全,現(xiàn)報告如下。
1 概述
人體腹部包括多種重要器官及組織,如肝臟、腎臟、宮腔、腸道等,因此腹部疾病臨床較為常見,且大多患者病情較為嚴重,往往需要進行外科手術(shù)治療。傳統(tǒng)腹部疾病手術(shù)治療方法為開腹手術(shù),但由于開腹手術(shù)造成的創(chuàng)傷較大,患者術(shù)后痛苦明顯,對機體傷害較大,且術(shù)后感染等相關(guān)并發(fā)癥較多,不利于患者盡快恢復健康。
隨著近年來臨床醫(yī)學水平不斷發(fā)展,微創(chuàng)技術(shù)已在臨床治療疾病過程中推廣使用。目前常用的微創(chuàng)手術(shù)儀器包括腹腔鏡、宮腔鏡、腸鏡、胃鏡等。腔鏡手術(shù)具有創(chuàng)傷小,術(shù)后痛苦較輕,并發(fā)癥較少等優(yōu)點,利于患者術(shù)后盡快恢復健康,已廣泛應(yīng)用于治療疾病過程中[1]。
醫(yī)院手術(shù)室的器械都統(tǒng)一由醫(yī)院消毒供應(yīng)室集中管理。消毒供應(yīng)室承擔著全院重復使用的醫(yī)療器械和物品的清洗、消毒、滅菌、供應(yīng)工作,是控制院內(nèi)感染的重點部門。有研究表明,于手術(shù)腔鏡種類繁多、結(jié)構(gòu)的復雜性、使用頻率較高,使其容易生銹報廢,增加醫(yī)療器材購買和維護成本,若其清洗保養(yǎng)不得當將增加醫(yī)院交叉感染幾率,威脅患者及醫(yī)務(wù)人員身體健康,甚至由于手術(shù)中出現(xiàn)插鏡困難而延誤患者疾病治療時機造成嚴重后果,因此加強對手術(shù)室腔鏡管理及清洗保養(yǎng)刻不容緩[2]。
2 腔鏡儀器管理與器械清洗保養(yǎng)
相關(guān)規(guī)定指出,凡進入人體無菌組織、器官或者經(jīng)外科切口進入人體無菌腔室的內(nèi)鏡及附件,必須滅菌、凡進入人體消化道、呼吸道等與粘膜接觸的內(nèi)鏡,應(yīng)當按照《消毒技術(shù)規(guī)范》的要求進行高水平消毒、內(nèi)鏡及附件用后應(yīng)當立即清洗、消毒或者滅菌。
2.1 清洗。①手術(shù)完成后清洗腔鏡前應(yīng)把器械盡量拆卸,達到可拆卸單位最小化,拆卸過程中所產(chǎn)生的螺絲及其他細小零件應(yīng)統(tǒng)一收納在儲物盒中以免丟失,腔鏡鏡片應(yīng)單獨放置,避免劃傷其他器械;②由于手術(shù)操作中腔鏡各部位可能粘連有人體組織物、血塊等物質(zhì),因此拆卸完成后立即用流動水進行徹底清洗,腔鏡管腔應(yīng)用高壓水槍沖洗,細小零件及精密關(guān)節(jié)應(yīng)輕輕擦洗;③清洗完成后將鏡頭浸泡在濃度為1∶150酶箱中,持續(xù)5至10分鐘,之后將其他部件放置于濃度為1∶150酶箱中進行5至8分鐘浸泡,浸泡過程中加入超聲清洗,之后使用流動水、高壓水槍對管腔再次進行沖洗;④待腔鏡水分瀝干后于濃度為75%酒精中浸泡5分鐘,待酒精瀝干后將其浸泡于濃度為1:20箱中持續(xù)3分鐘;⑤根據(jù)各部位材料不同可選用合適的擦拭物,將腔鏡擦拭干凈后使用烘干機將各部位水滴吹干,組裝完成后放置于收納盒中使用二層無紡紗布包裝,進行低溫等離子滅菌處理[3]。
2.2 保養(yǎng)。①所有腔鏡均應(yīng)于固定位置存放,并于其活動關(guān)節(jié)涂抹專用保護油,及時除塵,防止其發(fā)生銹蝕現(xiàn)象影響使用及縮短壽命;②若該器械不經(jīng)常使用,應(yīng)每月至少進行一次徹底保養(yǎng);③取用腔鏡時應(yīng)輕拿輕放,避免出現(xiàn)磕碰、摩擦、投擲、一手多拿等現(xiàn)象;④腔鏡鏡面應(yīng)與銳利器械分開放置,以免對其造成損傷。
2.3 管理。①腔鏡每次使用前均應(yīng)進行仔細檢查,確認完好無損后方可實施手術(shù)治療,尤其應(yīng)注意細小零部件,嚴禁敲擊;②指定專人對腔鏡進行統(tǒng)一管理、取用以及保養(yǎng),并及時做好各類記錄,對發(fā)生損壞的腔鏡應(yīng)及時修理;③對每部腔鏡均建立對應(yīng)檔案,內(nèi)容包括投入使用日期、廠家、名稱、用途、型號等,并及時記錄該腔鏡是否正常使用、異常情況及處理結(jié)果等;④對每部腔鏡均配備相應(yīng)的使用手冊,方便管理人員及使用人員進行學習;⑤定期組織腔鏡管理、清洗以及養(yǎng)護人員進行相關(guān)培訓,鞏固專業(yè)知識,對日常工作中出現(xiàn)的問題進行討論,告知腔鏡清洗、養(yǎng)護及管理對手術(shù)及患者重要性,以及若工作不到位可能引發(fā)的嚴重后果,使其增強責任心積極參與工作;⑥根據(jù)相關(guān)規(guī)定建立完善的腔鏡清洗、養(yǎng)護及管理規(guī)章制度,并設(shè)立獎罰機制,若條件允許可指派專人負責檢查工作效果,及時指出問題并加以改正[4]。
3 注意事項
由于部分醫(yī)院消毒供應(yīng)室與手術(shù)器械回收點不在同一處,手術(shù)室護士與消毒供應(yīng)室專業(yè)工作人員并不能面對面交接器械,器械丟失的情況偶爾會發(fā)生。因此提示消毒供應(yīng)室工作人員清點器械和消毒供應(yīng)室護士接收、整理器械時,如發(fā)現(xiàn)器械性能、數(shù)目不符合、要求在30分鐘內(nèi)通知器械室的護士,以明確責任,及時查找原因。
手術(shù)室護士應(yīng)做好“手術(shù)器械清點回執(zhí)”的記錄工作,認真并反復核對手術(shù)器械的種類和數(shù)量,方便消毒供應(yīng)中心專業(yè)工作人員在接收器械時的識別和核對工作。各個科室也應(yīng)該完善信息溝通協(xié)調(diào)工作,保證各個環(huán)節(jié)可有序進行,發(fā)現(xiàn)問題可立刻通知并解決[5]。
此外儀器手術(shù)使用過程中出現(xiàn)的各類問題也不能夠及時反映,手術(shù)室護士應(yīng)對腔鏡在術(shù)中使用情況進行詳細記錄,及時反映異常情況幫助消毒供應(yīng)室工作人員進行腔鏡維護,保障下次手術(shù)順利使用腔鏡。
4 小結(jié)
近年來,腔鏡在臨床手術(shù)治療過程中得到了大量應(yīng)用,且療效顯著,尤其為特殊婦科疾病等診治提供了有力的技術(shù)支撐。但有資料顯示,由于內(nèi)鏡在日常清洗、養(yǎng)護過程中認識不夠、加上內(nèi)鏡本身的構(gòu)造特點,其清洗消毒工作往往易忽視,如腔鏡內(nèi)腔狹窄、污染微生物不易除、使用消毒劑不當(濃度和作用時間不足)、腔鏡附件未經(jīng)滅菌處理等。因此,消毒供應(yīng)室對腔鏡的清洗、養(yǎng)護及管理是反映醫(yī)院整體醫(yī)療水平的關(guān)鍵因素,也是保障手術(shù)順利進行、降低患者感染等并發(fā)癥發(fā)生率的重要條件。
此外,醫(yī)院可定期組織專人來院授課或指派人員外出學習,吸收先進經(jīng)驗及方法,完善消毒供應(yīng)室的各項制度,保質(zhì)保量完成工作,并長期堅持,鼓勵工作人員勇于創(chuàng)新,積極探索簡單高效的清洗、養(yǎng)護及管理方法,在保障工作質(zhì)量的同時可有效節(jié)約人力資源、提高工作效率,值得各級醫(yī)院推廣應(yīng)用。
參考文獻
[1] 戚麗彬.手術(shù)室腔鏡儀器管理與器械清洗保養(yǎng)[J].局解手術(shù)學雜志.2010(5):442
[2] 戚麗彬.手術(shù)室腔鏡儀器管理與器械清洗保養(yǎng)[J].局解手術(shù)學雜志.2010(5):442
[3] 鄭慶玲,陶敏,尹秀敏,等.腔鏡儀器器械的安全使用與保養(yǎng)[J].齊魯護理雜志.2006,12(6B):1106
關(guān)鍵詞:繼電保護 故障信息管理系統(tǒng) 應(yīng)用規(guī)范 標準化
中圖分類號:TM77 文獻標識碼:A 文章編號:1672-3791(2014)12(b)-0119-01
目前由于國內(nèi)外不同廠家對裝置信息、時間同步實現(xiàn)方式、和數(shù)據(jù)輸出格式的不同,造成了在電網(wǎng)故障中,各種裝置反映的信息體現(xiàn)了“孤立事件”的特點[1]。使得調(diào)度人員,甚至于繼電保護專業(yè)人員都不能及時判斷復雜故障的真正原因。故障信息只能分散、局部地描述電網(wǎng)故障狀況。這表明目前各種保護和故障錄波器等設(shè)備對于故障信息處理的規(guī)范性遠不能滿足現(xiàn)代電網(wǎng)故障分析、信息處理有效性和及時性的要求,從而說明了繼電保護及故障信息管理系統(tǒng)規(guī)范化建設(shè)的必要性和緊迫性。
1 信息的分類
繼電保護及故障信息管理系統(tǒng)信息主要來自于繼電保護裝置和故障錄波器[2]。目前,繼電保護裝置和故障錄波器信息分為以下四類:保護定值信息、開關(guān)量信息、模擬量信息、保護動作信息。
2 信息通信規(guī)范
由于繼電保護微機化普及在先,故障信息管理系統(tǒng)應(yīng)用在后,所以存在如何與已投入運行的繼電保護和故障錄波器規(guī)約規(guī)范的問題[3]。
3 信息建模規(guī)范
目前,當電網(wǎng)發(fā)生故障時,尤其是復雜故障時,保護和故障錄波器所上送的信息量十分龐大,必須對這海量信息進行分優(yōu)先級上送,避免出現(xiàn)信道阻塞[4]。由于保護和故障錄波器生產(chǎn)廠家繁雜,對電網(wǎng)的要求理解參差不齊,所上送的裝置信息不嚴謹,不規(guī)范,有些信息甚至繼電保護專業(yè)人員都看不懂。
對所有保護動作和故障錄波器開關(guān)量信息進行詳細研究和分析后,針對調(diào)度運行人員對故障信息的要求,分別制定繼電保護及故障信息管理系統(tǒng)220kV線路和變壓器動作信息規(guī)范樣表,110kV及以下等級參照執(zhí)行。220kV線路動作信息規(guī)范樣表見表1(以保護裝置采用RCS和CSC系列保護為例)。動作信息優(yōu)先級劃分如下:
第一級:主要是斷路器、繼電保護和自動裝置的出口動作信息和保護退出(閉鎖)信息。
第二級:主要是保護啟動、斷路器操作或者其他與保護動作相關(guān)聯(lián)的信息。
第三級:主要是保護和故障錄波器的告警信息。
對所有保護動作和故障錄波器模擬量信息進行詳細研究和分析后,針對調(diào)度運行人員對故障信息的要求,分別制定繼電保護及故障信息管理系統(tǒng)220kV線路和變壓器模擬量信息規(guī)范樣表,110kV及以下等級參照執(zhí)行。模擬量信息優(yōu)先級劃分如下:
第一級:重要的反應(yīng)電網(wǎng)系統(tǒng)運行的電壓、電流。
第二級:監(jiān)測電網(wǎng)和設(shè)備的其他狀態(tài)量。
4 信息規(guī)范
信息規(guī)范有如下幾點:
繼電保護及故障信息管理系統(tǒng)信息應(yīng)體現(xiàn)層次性,繼電保護及故障信息管理系統(tǒng)信息處理應(yīng)體現(xiàn)智能性。系統(tǒng)應(yīng)具有專家系統(tǒng)模塊,在電網(wǎng)故障時,系統(tǒng)對收集到的保護動作信息、開關(guān)變位信息、錄波文件等信息,自動進行整理和關(guān)聯(lián),形成故障報告,同時對包括保護和開關(guān)的動作是否正確等進行評價。
繼電保護及故障信息管理系統(tǒng)信息處理應(yīng)體現(xiàn)差異性:系統(tǒng)要同時考慮調(diào)度人員、繼電保護人員、保護管理人員的需求。
參考文獻
[1] 林鋼松,楊先貴,楊勇.湖北電網(wǎng)繼電保護運行管理系統(tǒng)[J].電網(wǎng)技術(shù),1997,21(8):49-51.
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目的: 探討不同濃度依達拉奉預(yù)處理離體乳鼠腦皮質(zhì)細胞對腦缺血-再灌注損傷的保護作用。方法: 取出生24 h以內(nèi)的新生SD乳鼠的腦皮質(zhì)細胞,體外培養(yǎng)至第7天,隨機分為5組:A組(正常對照組);B組(藥物損傷組);C1組(50 μmol/L依達拉奉預(yù)處理組);C2 組(100 μmol/L依達拉奉預(yù)處理組);C3組(200 μmol/L依達拉奉預(yù)處理組)。C1、 C2 、C3組第7天用依達拉奉預(yù)處理,24 h后B、 C1 、C2、 C3組予200 μmol/L谷氨酸損傷0.5 h,所有組換正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24 h后觀察神經(jīng)細胞存活率(MTT法)、乳酸脫氫酶(LDH)漏出率、細胞凋亡率和HE染色后倒置相差顯微鏡下細胞形態(tài)變化。結(jié)果: 依達拉奉預(yù)處理各組MTT含量不同程度高于損傷組,LDH漏出量和凋亡細胞百分比不同程度低于損傷組,倒置相差顯微鏡下見預(yù)處理組細胞形態(tài)受損較藥物損傷組輕,3個預(yù)處理組以C2、C3組效果明顯,但兩組差別無統(tǒng)計學意義。結(jié)論: 采用所測濃度的依達拉奉提前24 h預(yù)處理離體幼鼠腦皮質(zhì)細胞,對腦缺血-再灌注損傷有明顯的保護作用。
【關(guān)鍵詞】 依達拉奉; 腦缺血; 缺血預(yù)處理; 細胞凋亡; 乳酸脫氫酶; 再灌注損傷
[Abstract] Objective: To study the protective effect of edaravone pretreatment against cerebral ischemia-reperfusion caused injury in cultured cortical cells of suckling rat brain. Methods: Cortical cells of SD rat within 24 hours after birth were cultured for 7 days, and then were randomly pided into 5 groups: group A (control group), group B (ischemia-reperfusion group), groups C1, C2, and C3 (edaravone pretreatment groups, 50umol/L for group C1, 100umol/L for group C2, 200 μmol/L for group C3). After cells in groups C1, C2, and C3 were treated by corresponding dosages of edaravone for 24 hours, glutamate (200 μmol/L) was added into culturing media of groups B, C1, C2, and C3. In half an hour later, culture media of all groups were substituted by fresh normal medium. After another 24 hours, cortical cell survival rates, LDH efflux rates and cell apoptosis rates were determined, and the cell morphous was observed with the help of HE staining. Results: The survival rates were higher, and the LDH efflux rates and apoptosis rates were lower in edaravone groups than those of group B; The cell destruction in edaravone treated groups was lighter than that in group B. The protective results of groups C2 and C3 was obvious, and there was no significant difference between the 2 groups. Conclusions: The pretreatment of edaravone with the tested concentrations in 24 hours before has obvious protective effect to cultured cortical cells against the cerebral ischemia-reperfusion caused injury;
[Key words] edaravone; brain ischemia; ischemic preconditioning; apoptosis; lactate dehydrogenase; reperfusion injury
腦血管疾病是我國人群致死的第三大因素,是首位致殘疾病,且發(fā)病率呈逐年上升趨勢,其中缺血性腦血管病占絕大部分,缺血性腦血管病尤其是腦缺血后的再灌注損傷危害極大。預(yù)處理是近20年研究減輕缺血再灌注損傷的途徑之一,它先后經(jīng)歷了缺血預(yù)處理、化學預(yù)處理、藥物預(yù)處理的發(fā)展過程,因藥物預(yù)處理具有相對安全、使用方便、易控制等優(yōu)點,與其它預(yù)處理方法比較具有潛在的臨床應(yīng)用價值,成為研究保護缺血再灌注損傷的一種新途徑和發(fā)展趨勢。2007年5月~10月通過培養(yǎng)乳鼠腦皮質(zhì)細胞,用不同濃度的依達拉奉提前24 h對其進行預(yù)處理,谷氨酸制作缺血再灌注損傷模型,觀察不同濃度的依達拉奉對缺血腦細胞的保護效果
1 材料和方法
1.1 材料
新生SD乳鼠(出生24 h內(nèi))由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供;DMEM/F12培養(yǎng)基(HyClone公司,美國),標準胎牛血清(天津市海洋生物制品科技有限公司),異丙酚(北京費森尤斯卡比醫(yī)藥有限公司),依達拉奉(南京先聲東元制藥有限公司),即用型SABC免疫組織化學染色試劑盒 (武漢博士德生物工程有限公司),LDH測試盒(南京建成生物工程研究所第一分所),MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(凱基生物科技發(fā)展有限公司)。
1.2 乳鼠大腦皮層神經(jīng)細胞原代培養(yǎng)取出生后1 d之內(nèi)的新生SD乳鼠,碘酒和75%的酒精消毒皮膚后取雙側(cè)大腦皮質(zhì),剔除軟腦膜和血管,D-hank′s液沖洗兩遍,用眼科剪剪成1 mm3左右的塊狀,終濃度0.125%胰蛋白酶常溫下消化3~5 min,邊消化邊用巴士管吹打,至肉眼看不到細胞團塊,立刻用培養(yǎng)基終止消化,200目篩網(wǎng)過濾成單細胞懸液,細胞計數(shù)板計數(shù);加培養(yǎng)基適量,調(diào)細胞濃度為105~106/L的細胞懸液,接種于96孔培養(yǎng)板、24孔培養(yǎng)板、蓋玻片、50 ml培養(yǎng)瓶中。置37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育,第3天用含2.5 μg/L阿糖胞苷[1]培養(yǎng)基換液,抑制神經(jīng)膠質(zhì)細胞及纖維細胞生長,第6天用培養(yǎng)基換液,準備大腦皮質(zhì)神經(jīng)細胞鑒定和實驗分組。
1.3 實驗分組隨機分為5組:A組(正常對照組),B組(藥物損傷組),C1組(50 μmol/L依達拉奉預(yù)處理組),C2 組(100 μmol/L依達拉奉預(yù)處理組)和C3組(200 μmol/L依達拉奉預(yù)處理組)。
1.4 大腦皮質(zhì)神經(jīng)細胞鑒定大腦皮質(zhì)細胞體外培養(yǎng)至第7天,取出24孔培養(yǎng)板內(nèi)的蓋玻片,參照即用型SABC免疫組織化學染色試劑盒說明書操作,然后觀察。
1.5 藥物預(yù)處理腦皮質(zhì)細胞體外培養(yǎng)至第7天,C1組、C2組、C3組去掉原培養(yǎng)基,分別加入50 μmol/L依達拉奉培養(yǎng)基、100 μmol/L依達拉奉培養(yǎng)基、200 μmol/L依達拉奉培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24 h。
1.6 谷氨酸(Glu)毒性神經(jīng)細胞損傷模型建立培養(yǎng)8 d的皮層神經(jīng)細胞去掉原培養(yǎng)基,B組、C1組、C2 組、C3組加入含Glu的無血清培養(yǎng)基(Glu終濃度200 μmol/L)作用0.5 h,D-Hank′s沖洗兩遍后,各組均換含10%胎牛血清的 DMEM/F-12培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24 h。
1.7 指標檢測(細胞生長至第9天)
1.7.1 MTT法測定神經(jīng)細胞存活率
將接種細胞的96孔板,每孔加50 μl×MTT,在37℃孵育4 h,使MTT還原成甲月贊,吸出上清液,每孔加150 μl二甲基亞砜(DMSO)使甲月贊溶解,輕輕震蕩,使其充分溶解,酶標儀在550 nm波長處檢測每孔的光吸收值(OD),減去本底OD值,然后按下式計算細胞存活率:細胞存活率=(加藥組細胞OD值/對照組細胞OD)×100%。
1.7.2 LDH漏出率的測定
24孔培養(yǎng)板吸取每孔培養(yǎng)液,參照試劑盒說明書測定各孔中OD值;留下的24孔培養(yǎng)板,加培養(yǎng)液,其量與吸取量相同,用力吹打,顯微鏡下見細胞基本無存活,參照試劑盒說明書測定各孔中OD值。根據(jù)公式計算LDH漏出率[2],細胞培養(yǎng)液LDH漏出率=培養(yǎng)液LDH的OD值/(培養(yǎng)液LDH的OD值+細胞勻漿液LDH的OD值)×100%。
1.7.3 細胞凋亡率
將各組細胞消化離心后收集于離心管,制成單細胞懸液,按凋亡試劑盒要求加入試劑,6 h內(nèi)用流式細胞儀上檢測凋亡。
1.7.4 HE染色
倒置相差顯微鏡下觀察神經(jīng)細胞的形態(tài)學變化。
1.8 統(tǒng)計學處理
量化指標以(x±s)表示,分析組間差異顯著性用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行方差分析和q檢驗,P<0.05表明有顯著性差異。
2 結(jié)果
2.1 大腦皮質(zhì)神經(jīng)細胞鑒定細胞生長至第7天,進行神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)免疫組織化學染色,陽性著色為棕黃色。本實驗反應(yīng)呈陽性,說明所培養(yǎng)細胞是腦皮質(zhì)細胞(如圖1)。
2.2 神經(jīng)細胞存活率、LDH漏出率、凋亡率正常對照組與損傷組比較P<0.01;C1組與損傷組比較P>0.05,C2 組、C3組與損傷組比較P
2.3 細胞形態(tài)HE染色顯示,正常生長9 d的神經(jīng)元突起明顯,并交織成網(wǎng)狀,胞體較大,多數(shù)細胞呈錐體型,雙極型、三極型多見,偶見單極型;圓形,折光性強,有明顯立體感,突起增粗并出現(xiàn)末端分支。Glu處理后神經(jīng)細胞明顯損傷,大部分細胞胞體變小,突起皺縮、減少甚至消失、折光性減弱,細胞核破碎、部分細胞甚至溶解,但仍有少數(shù)細胞保持正常形態(tài)。依達拉奉預(yù)處理組神經(jīng)細胞形態(tài)與藥物損傷組相比細胞損傷程度較輕。見圖2、3、4、5、6。
3 討論
缺血再灌注損傷是一個復雜的病理過程,是多因素交互起作用的,興奮性氨基酸大量釋放學說是缺血再灌注損傷機制比較公認的學說之一,本試驗用谷氨酸建立缺血再灌注損傷細胞模型。結(jié)果顯示損傷組的細胞存活率明顯下降、凋亡率明顯上升、LDH漏出率明顯增高。HE染色觀察Glu酸損傷組神經(jīng)細胞受損非常嚴重,可能與下列機制有關(guān)。(1)缺血后興奮性氨基酸介導大量Na+,Cl-及H2O內(nèi)流,造成細胞水腫壞死;(2)激活N-甲基D-門冬氨酸受體(NMDAR),NMDAR激活后可以破壞細胞內(nèi)外K+的平衡從而誘導細胞凋亡[3],K+外流發(fā)生興奮性突觸后電位可激活細胞內(nèi)的鈣離子依賴性蛋白、 降解E等,使神經(jīng)元脂膜、細胞骨架蛋白、核酸等重要結(jié)構(gòu)解體。NMDAR激活后可介導Ca2+大量內(nèi)流,導致細胞內(nèi)Ca2+超載,激發(fā)一系列瀑布樣病理生理過程,導致神經(jīng)元的遲發(fā)性死亡[4]。本研究結(jié)果證實了Glu終濃度200 μmol/L作用30 min,可成功建立離體幼鼠腦皮質(zhì)細胞缺血再灌注損傷模型,證實大量釋放學說的可能性。選擇50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L提前24 h預(yù)處理離體腦皮質(zhì)細胞,觀察不同濃度的依達拉奉的腦保護效果。結(jié)果顯示: 50 μmol/L依達拉奉預(yù)處理組與損傷組比較,神經(jīng)細胞存活率、LDH漏出率、神經(jīng)細胞凋亡率變化無統(tǒng)計學意義(P>0.05),說明該濃度依達拉奉對細胞保護作用并不明顯。100 μmol/L依達拉奉預(yù)處理組和200 μmol/L依達拉奉預(yù)處理組與損傷組比較,細胞存活率上升,LDH漏出率、神經(jīng)細胞凋亡率下降(P
參考文獻
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河南省高級人民法院:
你院〔1989〕豫法經(jīng)字第14號請示報告收悉。關(guān)于中國河南省軍區(qū)訴鄭州市花園路城市信用合作社借貸、擔保合同糾紛一案的法律適用問題和對信用社統(tǒng)一印制的無期限、無數(shù)額的擔保協(xié)議書的效力認定問題,經(jīng)研究,答復如下:
一、本案擔保合同簽于《借款合同條例》頒布之后、生效之前,可以適用該條例第八條對借款合同保證人的法定條件和法律責任的具體規(guī)定。
二、擔保人河南省軍區(qū)營房處在貸款擔保書上注明“只限透影機款,不擔保每筆貸款”,透影機款應(yīng)視為擔保的限額,其擔保責任不能超出透影機款的范圍。
三、本案借款合同雙方在1985年3月15日的借據(jù)上注明:“約定償還日期:1985年7月13日”。擔保合同作為從合同,應(yīng)以主合同的償還日期作為擔保還款的期限,不應(yīng)視為無期限的擔保。