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【關(guān)鍵詞】農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生;社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站;實習(xí)
本文針對農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生的特殊性質(zhì),分析其在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站實習(xí)中最需要的知識和技能,得出一個特定的實習(xí)模式,并在農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生的實習(xí)中予以應(yīng)用,以提高農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生的實習(xí)質(zhì)量。
1 農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站實習(xí)模式研究的必要性
社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)是融預(yù)防、醫(yī)療、保健、康復(fù)、健康教育、計劃生育技術(shù)服務(wù)為一體“六位一體”的基層衛(wèi)生服務(wù)。鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院實際上也是社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)的延伸。農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站的實習(xí)可視為仿真實習(xí),在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站,他們不僅能夠掌握常見病、多發(fā)病及慢性病的日常治療及康復(fù)技能,而且還可以學(xué)到社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站規(guī)范化的管理、居民健康檔案的管理、與居民的溝通能力等等,這些都將對其畢業(yè)后回到鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院工作有著重大的幫助。因此,研究農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站的實習(xí)模式很有現(xiàn)實意義。
2 農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站實習(xí)面臨的問題
2.1缺乏統(tǒng)一的社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)實習(xí)基地的選擇要求和標(biāo)準(zhǔn)??城市社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站建設(shè)的基本標(biāo)準(zhǔn)和社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)實習(xí)基地建設(shè)的基本標(biāo)準(zhǔn)有很大差異,并非所有的社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)機(jī)構(gòu)都符合社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)實習(xí)基地建設(shè)的要求。由于受已有教學(xué)大綱和教學(xué)目標(biāo)的限制以及缺乏統(tǒng)一的社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)實習(xí)基地選擇要求和標(biāo)準(zhǔn),各醫(yī)學(xué)院校就如何使用社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)機(jī)構(gòu)來完成教學(xué)實習(xí)尚缺乏經(jīng)驗和系統(tǒng)的運(yùn)作機(jī)制。
2.2社區(qū)醫(yī)學(xué)教學(xué)基地全科教學(xué)師資力量嚴(yán)重不足??
由于歷史原因, 社區(qū)衛(wèi)生實習(xí)基地醫(yī)務(wù)人員不僅普遍存在學(xué)歷低、職稱低、業(yè)務(wù)水平低的問題, 而且對預(yù)防、保健、康復(fù)等全科醫(yī)學(xué)知識也相當(dāng)缺乏, 因此, 能夠符合全科醫(yī)學(xué)師資要求的人員少之又少。沒有合格的社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)實習(xí)基地和高素質(zhì)的實習(xí)指導(dǎo)師資隊伍, 醫(yī)學(xué)實習(xí)生全科醫(yī)學(xué)能力和意識的培養(yǎng)目標(biāo)就難以實現(xiàn)。
2.3社區(qū)醫(yī)學(xué)教學(xué)基地實習(xí)內(nèi)容不系統(tǒng)??
從目前社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)實習(xí)的執(zhí)行情況看,實習(xí)內(nèi)容和課堂教學(xué)內(nèi)容吻合程度較低。社區(qū)衛(wèi)生實習(xí)安排時間較短,能夠開展的社區(qū)衛(wèi)生實習(xí)項目較少,實習(xí)內(nèi)容不完善。“六位一體”的社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)內(nèi)涵未能在社區(qū)衛(wèi)生實習(xí)項目中得到充分體現(xiàn),實習(xí)內(nèi)容不統(tǒng)一。而且,社區(qū)衛(wèi)生實習(xí)時間和內(nèi)容與其他實習(xí)環(huán)節(jié)銜接不緊密。
2.4學(xué)校參與共建社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)基地建設(shè)的長效機(jī)制尚未形成
從目前社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)實習(xí)基地的共建情況看,運(yùn)行機(jī)制單一。學(xué)校對社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)基地的建設(shè)僅限于簡單地挑選,然后通過協(xié)議的方式予以規(guī)范。學(xué)校和社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)基地之間的權(quán)利和義務(wù)關(guān)系不明確,后期主動培育和完善社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)基地的意識不強(qiáng),共建的投入力度不夠,沒有和社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)實習(xí)基地形成雙贏格局,社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)基地建設(shè)的后勁不足,缺乏長效運(yùn)行機(jī)制。
3農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站實習(xí)模式研究
3.1 制定社區(qū)實習(xí)教學(xué)計劃
根據(jù)學(xué)生臨床實習(xí)的知識掌握情況,結(jié)合社區(qū)實習(xí)基地的實際,制定規(guī)范、可操作性強(qiáng)的教學(xué)實施計劃十分必要。通過進(jìn)行了解,可知社區(qū)實習(xí)內(nèi)容主要包括社區(qū)常見病、慢性病的一體化處理;常見病、慢性病的保健康復(fù);隨訪和家訪技能的教育和實踐;重點人群的健康教育,如婦幼保健、計劃免疫、社區(qū)傳染病的管理、社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)需求和現(xiàn)狀調(diào)查評價等內(nèi)容;個人及社區(qū)健康檔案的內(nèi)容、書寫與管理規(guī)范;社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)信息系統(tǒng)及其管理程序;醫(yī)患溝通技巧;雙向轉(zhuǎn)診的流程等。
3.2 建立學(xué)校、社區(qū)聯(lián)動的教學(xué)方法
學(xué)校與社區(qū)服務(wù)中心共同研究、制定教學(xué)方法,學(xué)生可充分利用社區(qū)實習(xí)基地作為了解社區(qū)、接觸社會、體察民情的窗口,激發(fā)他們學(xué)習(xí)掌握醫(yī)學(xué)科學(xué)知識和技能的熱情,產(chǎn)生為社區(qū)服務(wù)的動力。在實習(xí)過程中,學(xué)校與中心帶教老師可充分結(jié)合學(xué)生實際情況,采用啟發(fā)式、討論式、角色模擬等教學(xué)手段,開展“以問題為中心教學(xué)方法”。帶教老師還和學(xué)生共同參與社區(qū)調(diào)查、家庭訪視、健康檔案建立、資料分析與評價等活動,把加強(qiáng)學(xué)生醫(yī)患溝通能力、團(tuán)隊合作能力、健康教育能力、社區(qū)預(yù)防保健能力、衛(wèi)生服務(wù)管理能力等方面的培養(yǎng)融入教學(xué)全過程。在這種聯(lián)動的教學(xué)過程中,學(xué)生得以發(fā)揮主觀能動性,提高了認(rèn)識,增加了學(xué)習(xí)和從事該事業(yè)的興趣。
3.3 建立學(xué)校、社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站、定崗單位聯(lián)動管理制度
首先,學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)高度重視與定崗單位、社區(qū)建立長期友好的合作關(guān)系,為社區(qū)實習(xí)工作奠定良好的基礎(chǔ);其次,學(xué)校聘任社區(qū)管理及臨床經(jīng)驗豐富的醫(yī)師為兼職教師,讓他們責(zé)任更明確,積極性更高;第三,學(xué)校定期進(jìn)行教學(xué)巡查和舉辦任課教師、兼職教師教學(xué)交流研討會,使學(xué)生實習(xí)過程遇到問題能與老師實現(xiàn)無縫對接;第四,社區(qū)定期舉辦學(xué)術(shù)講座或?qū)W生學(xué)習(xí)小結(jié)討論會,及時糾正錯誤模糊認(rèn)識,對共性問題進(jìn)行集中講解。
3.4 社區(qū)實習(xí)效果評價
農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站的實習(xí)模式是一種新嘗試,我們可以采用教師評議、學(xué)生自評、實習(xí)前后調(diào)查、實習(xí)結(jié)束后考核、論文點評分析等形式對實習(xí)效果進(jìn)行評價。通過反饋得來的結(jié)果,我們可以對實習(xí)的效果進(jìn)行分析評價,找出優(yōu)勢與不足,從而鞏固優(yōu)勢,改善不足,不斷完善農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生在社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站的實習(xí)模式。
參考文獻(xiàn)
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1996年元月29日,宜陽縣衛(wèi)生防疫站做出宜衛(wèi)罰字(96)第2號衛(wèi)生行政處罰決定書,認(rèn)定許海棠的“熟肉加工店用的塑料包裝袋未經(jīng)有關(guān)部門檢驗,用于熟肉包裝;于8月27日(實際是8月28日——編者注)出售給張午‘福雅軒酒家’的熟肉未經(jīng)檢驗,又在未放涼的情況下裝入塑料包裝袋;在8月29日(實際是8月30日——編者注)對該店進(jìn)行模擬采樣檢驗中,該熟肉細(xì)菌總數(shù)嚴(yán)重超標(biāo);該店兩人未進(jìn)行健康檢查,未辦健康證。由此推斷,該酒家27日賣給張午福雅軒酒家的熟肉引起食物中毒,可能在該加工點已造成污染?!鄙鲜鍪聦嵰堰`反了《洛陽市〈食品衛(wèi)生法試行〉實施細(xì)則》第七、十一、三十二、四十八條之規(guī)定,依據(jù)《洛陽市〈食品衛(wèi)生法試行〉實施細(xì)則》第四十八條第四款第五、十項之規(guī)定,決定給予許海棠一千元罰款的處罰。
許海棠不服該處罰決定,向宜陽縣人民法院提起訴訟。訴稱自己使用的塑料食品袋是市場上通用的,從未有人通知過需要檢驗,也沒規(guī)定每天出售熟肉時都要送防疫部門檢驗。當(dāng)天出售的熟肉其他單位食用后都沒出問題。說明問題不在本店?!案Q跑幘萍摇卑l(fā)生食物中毒后,次日防疫站對該店熟肉進(jìn)行模擬采樣檢測不能說明當(dāng)日出售的熟肉在店內(nèi)細(xì)菌指數(shù)超標(biāo),防疫站對我的處罰沒有科學(xué)根據(jù),要求撤銷該處罰決定。
被告宜陽縣衛(wèi)生防疫站辯稱:一、因該店所用食品袋上印刷的所有文字全為外文,屬進(jìn)口的塑料包裝袋,未有國境口岸食品衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)的檢驗證明,又未經(jīng)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生檢測部門檢驗,是不符合食品衛(wèi)生法要求的;二、原告以“從未有人通知過每次出售熟肉時都要進(jìn)行檢驗”為借口,否定防疫站依法行政是站不住腳的;三、模擬采樣檢驗和推斷是食品衛(wèi)生法允許的。防疫站對其處罰是正確的,請求人民法院予以維持。
「審判
宜陽縣人民法院經(jīng)審理認(rèn)為,1995年8月29日張午“福雅軒酒家”食物中毒事件屬變形桿菌所致,并非大分子化合物中毒,而新塑料食品袋的衛(wèi)生指標(biāo)為正已烷提取物。被告8月30日對原告店中鹵肉模擬采樣檢驗結(jié)果說明原告的鹵肉加工點存在不衛(wèi)生情況,但該模擬采樣檢驗不能證明8月29日出售給福雅軒酒家的鹵肉已攜帶(變形桿菌)致病菌或未攜帶致病菌。鹵肉從加工出鍋到食用前存在著多個可能污染的環(huán)節(jié)。在未排除鹵肉從“福雅軒酒家”來人裝入塑料編織袋運(yùn)至張午及第2天的再加工這一系列過程中可能造成污染前,以或然性的推斷結(jié)論進(jìn)行處罰,事實不清,主要證據(jù)不足,依法應(yīng)予撤銷。根據(jù)《中華人民共和國行政訴訟法》第五十四條第二項之規(guī)定,該院于1996年5月27日作出判決;
撤銷宜陽縣衛(wèi)生防疫站1996年1月29日(96)宜衛(wèi)罰字第2號行政處罰決定。
判決后原被告均未在法定期限內(nèi)提起上訴。
「評析
本案涉及以下幾個方面的問題:
一、衛(wèi)生防疫站的行政處罰主要證據(jù)不足
這是因為:(1)衛(wèi)生防疫站沒有對原告使用的塑料食品包裝袋進(jìn)行檢驗,沒有證據(jù)證明包裝袋的衛(wèi)生狀況與食物中毒有直接因果關(guān)系。根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)總局的GBn146-81食品包裝用聚炳稀樹脂衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),檢驗項目為正乙烷(大分子化合物)提取物,而不是細(xì)菌、致病菌的衛(wèi)生指標(biāo)。衛(wèi)生防疫站既然沒有對塑料袋的衛(wèi)生狀況進(jìn)行檢驗,也就無法確定塑料袋在用時是否攜帶致病菌。從“8。29”中毒事件原因看屬致病菌中毒,而不是大分子化合物中毒,故無法確認(rèn)塑料袋的使用與食物中毒有直接因果關(guān)系,以此進(jìn)行處罰,實屬勉強(qiáng)。(2)“8。29”食物中毒的直接致害物是鹵肉。而鹵肉從加工出售到消費者使用前,存在著多個可能造成污染的環(huán)節(jié),因此只有排除了“福雅軒酒家”從購入、運(yùn)輸、保管、再加工到出售這一系列過程不存在污染的可能性之后,才能認(rèn)定鹵肉的病害是在原告加工的過程造成的。而在缺乏上述結(jié)論的情況下,以原告加工的鹵肉未經(jīng)檢驗,原告加工店中有人沒有健康證為由推定鹵肉在原告加工點受到污染發(fā)生病變是沒有根據(jù)的。以這種或然性的結(jié)論來進(jìn)行處罰難以令人信服。(3)8月30日的模擬檢驗不能作為認(rèn)定“8。29”食物中毒事件原告具有過錯的直接證據(jù)。從8月30日衛(wèi)生防疫站的抽檢情況看,原告食品加工點存在有“從業(yè)人員沒有健康證”,加工的鹵肉細(xì)菌超標(biāo)等違反食品衛(wèi)生法的行為。但此結(jié)論并不能必然說明或證明原告8月28日賣給“福雅軒酒家”的鹵肉不符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),衛(wèi)生防疫站以8月30日的核檢結(jié)論作為依據(jù)進(jìn)行處罰是沒有道理的。
二、衛(wèi)生防疫站不具有進(jìn)行處罰的主體資格
根據(jù)1995年10月30日新頒布的《中華人民共和國食品衛(wèi)生法》第三十二條“食品衛(wèi)生監(jiān)督的行政處罰權(quán)在縣級以上地方人民政府衛(wèi)生行政主管部門”的規(guī)定,在95年10月30日以后對食品衛(wèi)生違法事件進(jìn)行處罰的應(yīng)該是縣衛(wèi)生局,衛(wèi)生防疫站無權(quán)作出處罰決定。因此,縣衛(wèi)生防疫站于1996年1月29日作出行政處罰決定屬越權(quán)處罰,是無效的。審理中有人認(rèn)為“8。29”中毒事件發(fā)生時新的食品衛(wèi)生法尚未頒布,衛(wèi)生防疫站已調(diào)查處理,且處罰適用的法律《洛陽市〈食品衛(wèi)生法試行〉實施細(xì)則》尚未廢除,衛(wèi)生防疫站是有權(quán)對此事件進(jìn)行處罰的。我們認(rèn)為這種認(rèn)識是錯誤的,因為法律一經(jīng)生效就應(yīng)不打折扣的執(zhí)行,如有地方性法規(guī)與國家法律、行政法規(guī)不一致的,應(yīng)以國家法律、行政法規(guī)為準(zhǔn)。所以“8。29”食物中毒事件的處罰發(fā)生在1995年10月30日之后,就應(yīng)由縣衛(wèi)生局實施,衛(wèi)生防疫站不具備處罰的主體資格。
三、衛(wèi)生防疫站的處罰適用法規(guī)錯誤
關(guān)鍵詞:教學(xué)改革;自主學(xué)習(xí);以學(xué)生為中心
中圖分類號:G642.0 文獻(xiàn)識別碼:A 文章編號:1001-828X(2016)033-000-01
《商務(wù)定量分析》是將《管理統(tǒng)計學(xué)》與《運(yùn)籌學(xué)》兩門管理類專業(yè)的專業(yè)基礎(chǔ)課內(nèi)容按照企業(yè)經(jīng)營管理活動的需要整合而成的課程,課程內(nèi)容涵蓋描述統(tǒng)計、推斷統(tǒng)計、預(yù)測分析、規(guī)劃分析、決策分析等基本定量分析知識,注重培養(yǎng)學(xué)生理性思維發(fā)展,鍛煉學(xué)生深入研究問題的素養(yǎng)和撰寫分析報告的能力,為其今后在管理崗位的進(jìn)一步發(fā)展打下基礎(chǔ)。但是,《商務(wù)定量分析》通常在學(xué)生學(xué)習(xí)了高等數(shù)學(xué)、線性代數(shù)、概率論及數(shù)理統(tǒng)計等數(shù)學(xué)基礎(chǔ)理論課程后開設(shè),學(xué)習(xí)過程中需要學(xué)生具備一定的數(shù)學(xué)基礎(chǔ),這就造成了部分?jǐn)?shù)學(xué)基礎(chǔ)較為薄弱學(xué)生在學(xué)習(xí)過程中感到課程有一定的難度,以致于產(chǎn)生厭學(xué)態(tài)度,而同時學(xué)有余力的學(xué)生又希望深入學(xué)習(xí),因此在傳統(tǒng)的“以教師為中心”教學(xué)理念下的教學(xué)活動使得課程的教學(xué)效果大打折扣。
“以學(xué)生為中心”的教學(xué)理念提倡“讓學(xué)生自己去發(fā)現(xiàn)和創(chuàng)造知識”,由傳統(tǒng)的“課堂、教師、教材”向“學(xué)生、學(xué)習(xí)、學(xué)習(xí)過程”的轉(zhuǎn)變。承認(rèn)學(xué)生的個體差異,教師通過多種教學(xué)手段引導(dǎo)學(xué)生自主構(gòu)建學(xué)習(xí)體系,在教學(xué)過程中不斷通過教學(xué)評價了解學(xué)生的學(xué)習(xí)效果,不斷改進(jìn)教學(xué),提高教學(xué)教學(xué)效果。
基于以上兩點,在《商務(wù)定量分析》課程從課程內(nèi)容設(shè)計、教學(xué)方法和手段、教學(xué)評價等三個方面進(jìn)行了一系列的探索。
一、以實用性為原則構(gòu)建課程內(nèi)容主體框架
《商務(wù)定量分析》課程教學(xué)目的在于從實用性角度培養(yǎng)學(xué)生從事管理類崗位的基本職業(yè)素養(yǎng)和能力,因此課程內(nèi)容也主要圍繞企業(yè)經(jīng)營管理活動相關(guān)內(nèi)容而展開,內(nèi)容涉及面較廣,注重知識的應(yīng)用,理論夠用即可。因此課程多與實際經(jīng)營活動中的案例相結(jié)合,通過實景式學(xué)習(xí)背景激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的熱情,打破傳統(tǒng)的統(tǒng)計學(xué)、運(yùn)籌學(xué)只注重理論忽視應(yīng)用的模式,讓學(xué)生在學(xué)習(xí)的過程中能夠切實感受到知識的實用性,從而產(chǎn)生濃厚的學(xué)習(xí)興趣。
但是少部分學(xué)生也有繼續(xù)深造研究的需要,因此對于這部分學(xué)生,可以在教師的指導(dǎo)下完成課程延伸知識的學(xué)習(xí),完成下一步深造的知識儲備。
二、多種教學(xué)手段相結(jié)合促進(jìn)學(xué)生自主學(xué)習(xí)
引導(dǎo)學(xué)生自主學(xué)習(xí)、構(gòu)建學(xué)習(xí)體系是“以學(xué)生為中心”的教學(xué)目的,因此教學(xué)目標(biāo)設(shè)置、教學(xué)材料組織以及教學(xué)方法運(yùn)用方面都應(yīng)圍繞該目的展開。
1.明確教學(xué)目標(biāo)促進(jìn)學(xué)生自主學(xué)習(xí)
根據(jù)學(xué)生的個體水平在每個知識模塊中設(shè)置基本目標(biāo)、提升目標(biāo)以及晉級目標(biāo)等三個等級的教學(xué)目標(biāo),三個學(xué)習(xí)目標(biāo)的學(xué)習(xí)難度是逐漸增加的。教師在學(xué)生開始學(xué)習(xí)每個模塊之前都會對該模塊的三級學(xué)習(xí)目標(biāo)做出提示,以便于學(xué)生在自主學(xué)習(xí)過程中參照三級學(xué)習(xí)目標(biāo)進(jìn)行有針對性地學(xué)習(xí)和訓(xùn)練,在模塊的總結(jié)和復(fù)習(xí)中有目的的對學(xué)習(xí)內(nèi)容進(jìn)行回顧,滿足不同基礎(chǔ)的學(xué)生的學(xué)習(xí)要求。
2.基于基礎(chǔ)理論應(yīng)服務(wù)于知識的運(yùn)用的原則設(shè)置教學(xué)內(nèi)容
教學(xué)內(nèi)容弱化傳統(tǒng)教學(xué)中對于統(tǒng)計學(xué)、運(yùn)籌學(xué)中定理、公式的推導(dǎo)過程而注重于數(shù)據(jù)分析方法的應(yīng)用,相關(guān)理論做到夠用即可。與此同時,通過教師對知識的進(jìn)一步梳理,在傳授知識的同時側(cè)重于學(xué)生解決實際問題的能力,各模塊的課后思考題和作業(yè)的設(shè)置既能夠讓學(xué)生牢固掌握基礎(chǔ)理論知識同時又能夠通過較為復(fù)雜的案例分析完成對基礎(chǔ)知識應(yīng)用能力的提升鍛煉,這就要求教師在教育教學(xué)環(huán)節(jié)對各模塊的知識體系做出詳盡的分解,合理設(shè)計教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)環(huán)節(jié)。
3.豐富多樣的教學(xué)材料拓展學(xué)生的專業(yè)知識
圍繞學(xué)生的興趣,從經(jīng)濟(jì)、生產(chǎn)、質(zhì)量、物流、人力資源、財務(wù)等多方面豐富教學(xué)材料,讓學(xué)生在閱讀教學(xué)材料的同時對企業(yè)經(jīng)營管理有宏觀的認(rèn)識,從學(xué)生個人的興趣角度出發(fā),有針對性地選擇他們所感興趣的專業(yè)知識進(jìn)行深入的思考和探討,告別傳統(tǒng)教學(xué)中由一本教材貫穿整個課程的教學(xué)模式。這對教師的課程準(zhǔn)備工作帶來了新的挑戰(zhàn)。
4.多種教學(xué)手段輔助教學(xué)過程
傳統(tǒng)的教學(xué)往往是教師講,學(xué)生聽的模式。以學(xué)生為中心的教學(xué)中則可以采用小組討論、辯論、案例討論、角色扮演等多種以W生為主的教學(xué)手段,在教師的組織下完成學(xué)生通過自主學(xué)習(xí)就能夠完成的內(nèi)容,而教師在課堂上的講授將主要圍繞學(xué)生自主學(xué)習(xí)過程中遇到的難點問題給予及時的指導(dǎo)。其次,運(yùn)用信息化手段將教學(xué)目標(biāo)、教學(xué)材料、教學(xué)內(nèi)容設(shè)計可以滿足學(xué)生隨時隨地學(xué)習(xí)的愿望,是實現(xiàn)自主學(xué)習(xí)的必要支持手段。
5.重點強(qiáng)調(diào)計算機(jī)軟件的使用技能
當(dāng)今社會,計算機(jī)已成為人們工作中不可缺少的工具,在數(shù)據(jù)分析領(lǐng)域,計算機(jī)的作用更是重要。學(xué)生在校學(xué)習(xí)期間如果能掌握一到兩種計算機(jī)分析軟件,將會為他們未來的職業(yè)發(fā)展奠定良好的基礎(chǔ)。因此在課程的教學(xué)過程中,避免了讓學(xué)生進(jìn)行長篇累牘的手工計算,取而代之的是常用的計算機(jī)軟件完成復(fù)雜的數(shù)據(jù)處理和分析功能,如Microsoft Excel、SPSS等軟件的學(xué)習(xí)都能夠起到讓學(xué)生開闊視野的作用。而且當(dāng)今的學(xué)生具備很強(qiáng)的自學(xué)能力,他們完全可以在教師的指引下,通過教學(xué)材料的自學(xué)、網(wǎng)絡(luò)搜索、討論學(xué)習(xí)等手段初步掌握這些軟件的使用。
三、合理的學(xué)習(xí)效果評價及時反饋教學(xué)效果
根據(jù)各個學(xué)習(xí)模塊的不同特點設(shè)定合理的學(xué)習(xí)效果評價體系,一方面為學(xué)生自測學(xué)習(xí)效果提供了依據(jù),另一方面為教師進(jìn)一步改進(jìn)教學(xué)方法提供了依據(jù),是學(xué)生學(xué)習(xí)過程的重要組成部分。在教學(xué)組織過程中要注意學(xué)習(xí)效果的及時反饋才能起到應(yīng)有的效果。學(xué)習(xí)效果評價機(jī)制可以采用學(xué)生自主測評、師生互評、生生互評等多種渠道展開,通過學(xué)習(xí)過程中的反饋、案例討論報告、隨堂測試、學(xué)生自主學(xué)習(xí)匯報等多種手段實施,其目的都是掌握學(xué)生自主學(xué)習(xí)的動態(tài),及時地糾正偏差。
教師們經(jīng)常感嘆現(xiàn)在的大學(xué)生與以往的大學(xué)生不一樣了,那是因為環(huán)境在變化,學(xué)生也在變化,因此教育教學(xué)手段和方法也要隨之而改變,其目的都是為了更好地培養(yǎng)培養(yǎng)具備創(chuàng)新意識的現(xiàn)代人才,因此“以學(xué)生為中心”的教育教學(xué)改革在大學(xué)教育中任重而道遠(yuǎn),值得我們不斷地深入挖掘教育的潛力。
1 嗜熱微生物
1.1 嗜熱微生物的定義及分布
嗜熱微生物也被稱為嗜熱菌或者高溫菌。嗜熱微生物主要分布于溫泉、堆肥、煤堆、有機(jī)物堆、強(qiáng)烈太陽輻射加熱的地面、地?zé)釁^(qū)土壤以及陸地和海底火山口等高溫環(huán)境[2]。
1.2 嗜熱微生物的分類
嗜熱微生物分為耐熱菌、兼性嗜熱菌、專性嗜熱菌、極端嗜熱菌、超嗜熱菌,根據(jù)嗜熱微生物對高溫環(huán)境的耐受程度不同,學(xué)者們作如下的區(qū)分(表1)。
1.3 嗜熱微生物的應(yīng)用
1.3.1 嗜熱酶及超級嗜熱酶 嗜熱酶(55~80 ℃)和超級嗜熱酶(80~113 ℃)具有與普通化學(xué)催化劑不同的高催化效率、很強(qiáng)的底物專一性、在高溫條件下穩(wěn)定性良好等優(yōu)點。這些酶在食品工業(yè)、造紙工業(yè)、煙草業(yè)、石油開采、醫(yī)藥工業(yè)、環(huán)境保護(hù)、液體燃料的開采、能源利用等領(lǐng)域中具有廣闊的應(yīng)用前景。
1.3.2 抗生素 嗜熱微生物生活在高溫環(huán)境中,能夠產(chǎn)生多種特殊的代謝產(chǎn)物,其中有一部分是抗生素類,為目前抗生素的開發(fā)和生產(chǎn)提供了新的思路,有較大的應(yīng)用前景。
1.3.3 嗜熱微生物菌體及其它活性物質(zhì) 嗜熱微生物菌體可直接用于工業(yè)生產(chǎn),同時嗜熱微生物在高溫的條件下還會產(chǎn)生維生素等物質(zhì)。
2 嗜冷微生物
2.1 嗜冷微生物的定義
嗜冷微生物是適應(yīng)低溫環(huán)境生活的一類極端微生物[3]。
2.2 嗜冷微生物的分類
嗜冷微生物分為專性嗜冷菌、兼性嗜冷菌、極端嗜冷菌、耐冷菌,根據(jù)嗜冷微生物對低溫環(huán)境的耐受程度不同,學(xué)者們作如下的區(qū)分(表2)。
2.3 嗜冷微生物的應(yīng)用
2.3.1 環(huán)境保護(hù)方面 通過嗜冷微生物產(chǎn)生的冷適應(yīng)酶來實現(xiàn)低溫下的污染物生物降解。
2.3.2 食品方面 嗜冷微生物常用于牛奶加工業(yè)、果汁提取工藝、肉類加工業(yè)、烘培面包工藝、乳酪制造業(yè)等食品制作方面。
2.3.3 生物技術(shù)方面 嗜冷微生物也用于生物降解或生物催化?;旌吓囵B(yǎng)的專一嗜冷微生物在污染環(huán)境中擴(kuò)增和接種產(chǎn)生的酶可提高不耐火化學(xué)藥品的降解能力。由于嗜冷微生物的特殊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),嗜冷微生物在生物催化方向上具有更大的優(yōu)越性和更好的應(yīng)用前景。
3 嗜酸微生物
3.1 嗜酸微生物的分布及定義
自然界存在許多強(qiáng)酸環(huán)境,如廢煤堆及其排出水、酸性溫泉、廢銅礦、生物瀝濾堆及酸性土壤等。其中,許多微生物的代謝活動也會產(chǎn)生酸性環(huán)境。生長在酸性環(huán)境中的微生物被稱為嗜酸微生物[4]。
3.2 嗜酸微生物的分類
嗜酸微生物分為嗜酸型、耐酸型、極端嗜酸微生物,根據(jù)嗜酸微生物對酸性環(huán)境的耐受程度不同,學(xué)者們作如下的區(qū)分(表3)。
3.3 嗜酸微生物的應(yīng)用
3.3.1 在冶金方面的應(yīng)用 冶金方面利用嗜酸微生物是將貧礦和尾礦中金屬溶出并回收,即我們常說的生物濕法冶金。 []
3.3.2 環(huán)境保護(hù)應(yīng)用 利用嗜酸微生物處理重金屬,去除率可達(dá)到80%以上,而且處理成本比傳統(tǒng)方法要降低很多。
3.3.3 能源應(yīng)用 利用嗜酸微生物為催化劑,可以構(gòu)建成為微生物燃料電池。
4 嗜堿微生物
4.1 嗜堿微生物的定義
一般把最適生長pH值在9.0以上的微生物稱嗜堿微生物[5],其所耐pH值可高達(dá)10~12。到目前為止,嗜堿微生物還沒有確切的定義。
4.2 嗜堿微生物的分類
嗜堿微生物分為嗜堿菌、耐堿菌、專性嗜堿菌、兼性嗜堿菌,根據(jù)嗜堿微生物對堿性環(huán)境的耐受程度不同,學(xué)者們作如下的區(qū)分(表4)。
4.3 嗜堿微生物的應(yīng)用
4.3.1 發(fā)酵工業(yè) 嗜堿微生物可以作為許多酶制劑的生產(chǎn)菌。如洗滌劑酶和環(huán)糊精的生產(chǎn)都是利用嗜堿微生物的胞外酶獲得的。
4.3.2 造紙工業(yè) 嗜堿微生物被應(yīng)用于革脫脂、造紙木漿脫脂等。
4.3.3 其他方面 嗜堿微生物和堿性纖維素酶在堿性廢水處理、化妝品、皮革和食品等方面也具有獨特用途。在環(huán)境保護(hù)方面嗜堿微生物可發(fā)揮巨大作用;堿性淀粉酶可用于紡織品退漿及淀粉作粘接劑時的粘度調(diào)節(jié)劑;用于皮革工業(yè)中的脫毛工藝以提高脫毛效率和質(zhì)量,利用嗜堿微生物進(jìn)行苧麻脫膠。
5 嗜鹽微生物
5.1 嗜鹽微生物的分布及定義
在自然界中,有許多含有高濃度鹽分的環(huán)境,如美國猶他大鹽湖(鹽度為2.2 %)、著名的死海(鹽度為2.5%)、里海(鹽度為1.7%)、海灣和沿海的礁石池塘等。在這些高鹽環(huán)境中仍然存在許多抗高滲透壓微生物,即嗜鹽微生物。
5.2 嗜鹽微生物的分類
嗜鹽微生物分為弱嗜鹽微生物、中度嗜鹽微生物、極端嗜鹽微生物,各自最適生長鹽濃度如表5。
5.3 嗜鹽微生物的應(yīng)用
利用菌體發(fā)酵,可生產(chǎn)高聚化合物。除去工業(yè)廢水中的磷酸鹽,用于開發(fā)鹽堿、生產(chǎn)嗜鹽酶。嗜鹽古菌和紫膜蛋白能通過構(gòu)型的改變儲存信息,可作為生物計算機(jī)芯片的新材料,還可用于高鹽污水的處理。
6 嗜壓微生物
6.1 嗜壓微生物的定義
需要高壓才能良好生長的微生物稱嗜壓微生物。最適生長壓力為正常壓力,但能耐受高壓的微生物被稱為耐壓微生物。
6.2 嗜壓微生物的分類
嗜壓微生物分為耐壓菌、嗜壓菌、極端嗜壓菌,各自的最低生長壓、最適生長壓、最高生長壓如表6。
6.3 嗜壓微生物的應(yīng)用
關(guān)鍵詞:微生物發(fā)酵;發(fā)酵飼料;生產(chǎn)菌種
中圖分類號:S816.6文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1674-9944(2012)11-0265-02
1引言
20世紀(jì) 50 年代之前,人們一直都被動物的生產(chǎn)問題所困擾,紛紛試著尋找其他途徑來解決這個難題。而在50年代時,人們發(fā)現(xiàn)如果動物食用加有抗生素的口糧,則可明顯提高其產(chǎn)量。此項發(fā)現(xiàn)對畜牧業(yè)的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。然而,隨著時間的推移,添加抗生素這一舉措帶來的危害日益顯現(xiàn)且逐漸加重,受到社會各界的重視。2004年,三大組織包括WTO、聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界動物衛(wèi)生組織聯(lián)合召開專題討論會,討論了非人用抗生素的使用和抗生素的耐藥性問題.[1]。人們開始試著探索其他的方法或物質(zhì)來替代抗生素的使用,以保證不影響畜牧業(yè)生產(chǎn)的效率與效益。近年來,隨著生命科學(xué)的興起,利用生物技術(shù),特別是微生物發(fā)酵技術(shù)來實現(xiàn)新型優(yōu)質(zhì)飼料資源和新型添加劑受到廣泛關(guān)注。
由于我國是人口大國,飼料和糧食的缺少便是最難通過的一關(guān),而其生產(chǎn)也是我國國民經(jīng)濟(jì)的薄弱環(huán)節(jié)。整體來看,我國人均占有糧食為 400 kg 以下,在這之中,總產(chǎn)量的40%左右都用于飼料生產(chǎn)。從長遠(yuǎn)來看,牲畜與人爭糧問題仍然是我國不能掉以輕心的大事,這是由我國國情及糧情所決定的.[2]。因此,迅速高效發(fā)展高效飼料工業(yè),生產(chǎn)生態(tài)健康型飼料刻不容緩。
2微生物發(fā)酵飼料的一般概念
2.1微生物發(fā)酵飼料的定義
雖然發(fā)酵現(xiàn)象幾乎和地球同時誕生,但只是在近200年人們才對其本質(zhì)有了一定的了解。發(fā)酵在英語中為“fermentation”,由拉丁語“ferver”派生而來,原意是翻涌,就是看到了發(fā)酵現(xiàn)象。許多現(xiàn)代化發(fā)酵工業(yè)的建立是近10年的事情.[3]。發(fā)酵飼料定義為:在人工控制條件下,微生物通過自身的代謝活動,將植物性、動物性和礦物性物質(zhì)中的抗?fàn)I養(yǎng)因子分解或轉(zhuǎn)化,產(chǎn)生更能被畜禽采食、消化、吸收且無毒害作用的飼料原料.[4]。實驗證明:飼料經(jīng)過發(fā)酵處理,可以提高其營養(yǎng)吸收水平,降解其原料中可能存在的毒素,且促進(jìn)生長、維持動物體內(nèi)微生態(tài)平衡、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、防病治病等這些作用也可以得到體現(xiàn)。
2.2微生物發(fā)酵飼料的主要特征
天然微生物發(fā)酵飼料味道很香,具有不錯的誘食效果,能明顯提高動物的適口性。其次有益菌數(shù)量極多,而有害菌(例如大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌)數(shù)量極低,不超過 10cfu/g,并且發(fā)酵成品的pH值在 4.5 左右,較低,含有較多的乳酸和乙酸。
3微生物發(fā)酵飼料的種類
依據(jù)含水量的多少可將微生物發(fā)酵飼料分為液體發(fā)酵飼料和固體發(fā)酵飼料兩類。液體發(fā)酵飼料國外使用較多,普遍采用飼料中天然存在的乳酸菌、酵母菌發(fā)酵;而國內(nèi)普遍使用微生物發(fā)酵劑或菌種,使用固體發(fā)酵飼料技術(shù).[5]。
關(guān)鍵詞:農(nóng)藥;土壤污染;微生物;修復(fù)
農(nóng)藥,作為人類文明進(jìn)步的產(chǎn)物,為解決人類溫飽、增強(qiáng)社會穩(wěn)定、促進(jìn)社會發(fā)展做出了貢獻(xiàn),對人類健康起到了積極作用。尤其是20世紀(jì)三四十年代,有機(jī)農(nóng)藥的成功發(fā)現(xiàn)和生產(chǎn),為控制害蟲的危害提供了有效的手段。然而,從現(xiàn)階段看,農(nóng)藥的使用已不可避免,為了人類更加健康安全地生存,了解、避免、減緩和解決這一越發(fā)嚴(yán)重的問題,有必要和必須探索和研究農(nóng)藥的環(huán)境污染機(jī)理。
1 概述
1.1 農(nóng)藥的定義
農(nóng)藥廣義的定義是指用于預(yù)防、消滅或者控制危害農(nóng)業(yè)、林業(yè)的病、蟲、草和其他有害生物以及有目的地調(diào)節(jié)植物、昆蟲生長的化學(xué)合成或者來源于生物、其他天然物質(zhì)的一種物質(zhì)或者幾種物質(zhì)的混合物及其制劑。是指在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,為保障、促進(jìn)植物和農(nóng)作物的成長,所施用的殺蟲、殺菌、殺滅有害動物(或雜草)的一類藥物統(tǒng)稱。特指在農(nóng)業(yè)上用于防治病蟲以及調(diào)節(jié)植物生長、除草等藥劑。
1.2 農(nóng)藥的毒性
農(nóng)藥對人體的危害主要表現(xiàn)為急性毒性和慢性毒性。農(nóng)藥經(jīng)口、吸呼道或接觸而大量進(jìn)入人體內(nèi),在短時間內(nèi)表現(xiàn)出的急性病理反應(yīng)為急性中毒。急性中毒往往導(dǎo)致神經(jīng)麻痹乃至死亡,甚至造成大面積死亡,成為最明顯的農(nóng)藥危害。據(jù)世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國環(huán)境署報告,全世界每年有300多萬人農(nóng)藥中毒,其中20萬人死亡。時至今日,由于農(nóng)藥在各方面的廣泛應(yīng)用,任何一個生活在現(xiàn)代生活中的人都不可能避免每天接觸很低濃度的各種不同種類的農(nóng)藥,或是通過食物,或是通過飲水。由此所產(chǎn)生的可能對人體健康的危害屬于連續(xù)的低水平暴露,這是一種潛在的慢性毒性效應(yīng)。
1.3 農(nóng)藥對土壤的污染
土壤是污染物的匯也是污染物的源。農(nóng)藥土壤污染是農(nóng)藥污染最典型的例子之一。農(nóng)藥的理化特性決定了它在土壤中的分布、降解速率及對環(huán)境的影響。農(nóng)藥在土壤中經(jīng)土壤微生物作用,可以遷移、轉(zhuǎn)化直至礦化。土壤污染了,土壤上所生長的作物和所結(jié)的果實也會吸收污染空氣。一種簡單的植物物種,吸收也是多種多樣的,植物根系可以吸收土壤溶液中的農(nóng)藥,土壤中固體顆粒也能吸收土壤溶液中的農(nóng)藥。有些農(nóng)藥易揮發(fā),植物的葉子可以吸收空氣中的農(nóng)藥蒸氣;而根又能吸收土壤中的農(nóng)藥,再從葉面上蒸發(fā)出它,過程相當(dāng)復(fù)雜。植物根莖葉吸收農(nóng)藥后,繼而在植物體內(nèi)提升,最后可殘留在植物體內(nèi),人們攝入該植物可直接攝入農(nóng)藥。
2 農(nóng)藥在土壤中的環(huán)境行為與降解機(jī)理
2.1 農(nóng)藥在土壤環(huán)境中的滯留、遷移
一般而言,如果農(nóng)藥能被強(qiáng)烈地吸附,則它們就容易滯留在土壤的固相,不易進(jìn)一步造成對周圍環(huán)境的污染;反之,就容易發(fā)生遷移,如被淋溶進(jìn)入地下水而造成污染。農(nóng)藥滯留、遷移的物理化學(xué)原理有:表面功能基團(tuán);表面配合物;表面吸附。
2.2 農(nóng)藥在土壤中的水解作用
農(nóng)藥的水解是農(nóng)藥分子與水分子發(fā)生相互作用的過程,它是農(nóng)藥在環(huán)境中遷移轉(zhuǎn)化的一個重要途徑。水解反應(yīng)是許多農(nóng)藥如有機(jī)磷、菊酯、氨基甲酸酯及羧酸脂等降解的主要步驟,與農(nóng)藥在環(huán)境中尤其是在水體中的持久性是密切相關(guān)的,是影響農(nóng)藥在環(huán)境中歸宿機(jī)制的主要判據(jù)之一,也是評價農(nóng)藥在水中殘留特性的重要指標(biāo)。研究農(nóng)藥在環(huán)境系統(tǒng)中的水解,尤其是一些有機(jī)磷酸脂類殺蟲劑、磺酰脲類除草劑水解反應(yīng)是其在環(huán)境中降解轉(zhuǎn)化的初始步驟,對于了解這些農(nóng)藥在環(huán)境系統(tǒng)中的歸宿機(jī)制、殘留特性及其對靶標(biāo)與非靶標(biāo)生物的毒理效應(yīng)具有重要意義。
2.3 農(nóng)藥在環(huán)境中的光降解
農(nóng)藥可以吸收一定的光能量或光量子,發(fā)生光物理和光化學(xué)反應(yīng)。光物理反應(yīng)包括輻射能以光、熱等能量形式吸收或釋放,但農(nóng)藥分子形態(tài)沒有變化;而光化學(xué)反應(yīng)則是通過農(nóng)藥分子的異構(gòu)化、鍵斷裂、分子重排或分子間反應(yīng)生成新的化合物。環(huán)境中農(nóng)藥的光化學(xué)反應(yīng)可在氣相、水相、固相中發(fā)生。盡管評價農(nóng)藥在環(huán)境中遷移、轉(zhuǎn)化行為時,有一些農(nóng)藥光化學(xué)降解可以忽視,但許多農(nóng)藥的光降解還是其在環(huán)境中主要的降解途徑之一。農(nóng)藥光解釋農(nóng)藥真正的分解過程,它不可逆地改變了反應(yīng)分子,強(qiáng)烈影響著某些農(nóng)藥在環(huán)境中的趨勢。因此研究農(nóng)藥的光化學(xué)降解具有非常重要的意義。
3 農(nóng)藥污染土壤的生物修復(fù)技術(shù)
微生物修復(fù)技術(shù)是利用微生物的生命代謝活動對有機(jī)農(nóng)藥的降解作用使受污染土壤恢復(fù)到健康狀態(tài)。所利用的微生物主要有土著微生物、外來微生物和基因工程菌3種類型。微生物修復(fù)技術(shù)可分為原位修復(fù)、現(xiàn)場修復(fù)和異位修復(fù),其中原位修復(fù)不僅操作簡單、成本低,而且不破壞植物生長所需要的土壤環(huán)境,污染物氧化安全,無二次污染,處理效果好,是一種高效、經(jīng)濟(jì)和生態(tài)可承受的環(huán)保技術(shù)。
微生物降解農(nóng)藥有2種方式:一是微生物直接作用于農(nóng)藥,以農(nóng)藥成分作為唯一的碳源或氮源、磷源,通過酶促反應(yīng)降解農(nóng)藥;另一種是將農(nóng)藥與其它有機(jī)質(zhì)進(jìn)行共代謝。微生物修復(fù)與植物修復(fù)不同,通常一種微生物能降解多種農(nóng)藥,
如假單胞桿菌可降解DDT、艾氏劑、毒殺酚和敵敵畏等。另外,微生物也可通過改變土壤的環(huán)境理化特征降低農(nóng)藥有效性,從而間接起到修復(fù)污染土壤的作用。如:劉憲華等人用假單胞菌AEBL3降解呋喃丹污染,結(jié)果發(fā)現(xiàn)未加菌土壤呋喃丹在0 ~7cm土層中含量已達(dá)90mg/kg,加菌土壤呋喃丹含量為48mg/kg,后者降解率達(dá)96.4%。
現(xiàn)今微生物修復(fù)農(nóng)藥污染已進(jìn)入基因水平,通過基因重組、構(gòu)建基因工程菌來提高微生物降解農(nóng)藥的能力。目前對微生物修復(fù)技術(shù)的研究已相當(dāng)成熟。世界各國的科研工作者分離篩選了大量的降解性微生物,利用基因工程技術(shù),人們按照需要構(gòu)建具有特殊功能、降解效率高、降解范圍廣和表達(dá)穩(wěn)定的新菌株。有微生物原位修復(fù)技術(shù)的構(gòu)成提高修復(fù)效果的技術(shù)措施的成功例子,但存在的問題也非常突出。首先,雖然已經(jīng)篩選到許多有機(jī)農(nóng)藥降解菌,但高效菌種不多;其次,降解菌的降解譜不夠廣,不能完全代謝有機(jī)農(nóng)藥中各組分;另外,許多實驗室得到的高效降解菌在實際應(yīng)用中效率不高,修復(fù)效果不理想。為此,有機(jī)農(nóng)藥高效降解菌的篩選及降解效果的改良是環(huán)境科學(xué)工作者的研究熱點課題?;蚬こ叹糜谖廴疚锾幚淼难芯砍晒钊斯奈?,發(fā)展?jié)摿艽蟆5?,基因工程菌的?yīng)用研究尚停留在實驗室水平,真正投入污染物處理的還很少,而且基因工程菌在實際應(yīng)用中存在一些問題,主要包括基因工程菌構(gòu)建的技術(shù)問題和應(yīng)用的安全性問題。如今,微生物修復(fù)技術(shù)作為一種有效的環(huán)境治理措施, 在治理土壤污染方面的作用已越來越突出。
參考文獻(xiàn)
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【關(guān)鍵詞】宏基因組學(xué);微生物群落;遺傳物質(zhì);口腔
【中圖分類號】Q781
【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A
宏基因組學(xué)認(rèn)為,生命研究的對象應(yīng)是生物環(huán)境中全部微小生物的基因組,即特定環(huán)境下所有生物遺傳物質(zhì)的總和。它包含了可培養(yǎng)的和不可培養(yǎng)的微生物的基因總和,微生物主要包括環(huán)境樣品中的細(xì)菌和真菌;因此,宏基因組學(xué)就是一種以環(huán)境樣品中的微生物群體基因組為研究對象,以功能基因篩選和測序分析為研究手段,以微生物多樣性、種群結(jié)構(gòu)、進(jìn)化關(guān)系、功能活性、相互協(xié)作關(guān)系以及與環(huán)境之間的關(guān)系等為研究目的的新的微生物群落研究方法,也稱為微生物環(huán)境基因組學(xué)、元基因組學(xué)或生態(tài)基因組學(xué)。
利用宏基因組學(xué)技術(shù)研究口腔微生物,無需單一分離培養(yǎng)某一種類的微生物,即可直接在基因水平上研究口腔微生物,包括可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)微生物。宏基因組學(xué)應(yīng)用于口腔微生物的研究,主要包括兩個方面:一方面進(jìn)行微生物生態(tài)學(xué)研究,從整體微生物群落水平來研究口腔微生物,揭示口腔微生物群落多樣性及其變化;另一方面是進(jìn)行口腔微生物及其基因的研究,從中篩選到新的功能基因及其產(chǎn)物。通過這兩方面的研究,較全面地了解口腔微生物的群落結(jié)構(gòu)和功能基因組,為深入探索口腔微生物的代謝活動,最大限度地發(fā)掘口腔微生物資源提供可能。
1 宏基因組學(xué)的研究方法
宏基因組學(xué)是從特定環(huán)境中直接分離所有微生物的DNA,選擇合適的載體用于克隆DN段,將DN段克隆到宿主細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),根據(jù)某些生物活或基因序列篩選有價值的克隆并進(jìn)行其功能分析。
1.1宏基因組文庫的構(gòu)建
1.1.1環(huán)境微生物DNA的提取 環(huán)境樣品DNA的提取是基因組文庫構(gòu)建中最重要的一步,不僅要盡可能地將環(huán)境中所有微生物的DNA提取出來,而且還要保證一定的DN段長度和完整性。根據(jù)提取樣品總DNA前是否需要分離細(xì)胞,可將其提取方法分為原位裂解法和異位裂解法。原位裂解法可直接破碎樣品中的微生物細(xì)胞而使其DNA得以釋放。原位裂解法無需對樣品微生物進(jìn)行復(fù)蘇,黏附顆粒上的微生物細(xì)胞亦能被裂解,所得DNA能更好地代表微生物的多樣性。由于原位裂解法所提取的DN段僅為1~50kb,故其通常用于構(gòu)建小片段插入文庫(以質(zhì)?;蛉胧删w為載體)的DNA提取。異位裂解法則先采用物理方法將微生物從樣品中分離出來,然后以較溫和的方法抽提其DNA。此法提取可以獲得長度為20~500kb的大片段DNA,而且純度高,但卻容易丟失微生物物種信息。該方法適用于構(gòu)建大片段插入文庫(以黏粒或細(xì)菌人工載體為載體)的DNA提取。
1.1.2載體選擇 目的基因能否有效地轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞并在其中高表達(dá),在很大程度上取決于載體。通常用于DNA克隆的載體包括質(zhì)粒、黏粒和細(xì)菌人工染色體(bacterial artificial chromosome,BAC)等。質(zhì)粒一般用于克隆小于10kb的DN段,適用于單基因的克隆與表達(dá)。黏粒又稱柯斯質(zhì)?;蚩滤馆d體,用于克隆大片段的DNA分子,其克隆外源DN段的極限高達(dá)350kb,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過質(zhì)粒載體的克隆能力。BAC用于克隆150kb左右大小的DN段,最多可保存300kb個堿基對,轉(zhuǎn)化率高,而且其以環(huán)狀結(jié)構(gòu)存在于細(xì)菌體內(nèi),易于分辨和分離純化。另外,構(gòu)建能容納40kb外源DNA插入片段的fosmid文庫也有報道。
1.1.3宿主選擇 目前,常用的宿主主要有大腸埃希菌以及鏈霉菌屬或假單胞菌屬。一些缺陷型突變體細(xì)菌也可以作為宿主進(jìn)行宏基因組文庫的功能篩選。宿主的選擇主要應(yīng)考慮其轉(zhuǎn)化率和宏基因表達(dá)以及重組載體在宿主細(xì)胞中的穩(wěn)定性和目標(biāo)性狀的篩選等。對于任何宏基因組來源的基因來說,大腸埃希菌依然是最理想的克隆和表達(dá)宿主。也可以用其他宿主菌,例如被用來鑒定與新抗生素生物合成相關(guān)基因的淺青紫鏈霉菌和一些革蘭陰性細(xì)菌。也可以用穿梭黏粒或BAC載體將構(gòu)建于大腸埃希菌的文庫轉(zhuǎn)入其他宿主,如鏈霉菌屬或假單胞菌屬中。根據(jù)不同微生物產(chǎn)生活性物質(zhì)的差異和研究目標(biāo)的不同,選擇不同的宿主。隨著技術(shù)的成熟和新宿主的選擇,基因篩選率和功能基因檢測率得以提高,進(jìn)而宏基因組文庫的目標(biāo)基因的表達(dá)也得以提高。
1.2宏基因組文庫的篩選
根據(jù)研究目的,宏基因組文庫的篩選通常有功能篩選和序列篩選兩種方法。功能篩選最常用方法是根據(jù)重組克隆產(chǎn)生一些酶蛋白功能活性,采用各種檢測手段,挑選活性克隆子,得到完整的功能基因和帶有目的基因的基因簇,發(fā)現(xiàn)全新的基因或活性物質(zhì)。功能篩選首先要求功能基因或帶有目的的基因簇在宿主中表達(dá),但因其受到檢測手段的限制,往往是在數(shù)千個甚至數(shù)百萬個重組克隆子中才能檢測到有用的活性克隆。序列篩選是依賴于目的基因的保守DNA序列,以序列相似性為基礎(chǔ),執(zhí)行某類功能的酶可能具有相似的基因序列,根據(jù)已有的序列信息設(shè)計引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增或雜交篩選陽性克隆子。序列篩選一般只能獲得結(jié)構(gòu)基因的片段,而不能獲得完整的功能基因;但是,它可以將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)志并將其作為探針篩選宏基因文庫,以獲得完整的功能基因。用這種方法有可能篩選到某一類結(jié)構(gòu)或功能的蛋白質(zhì)中的新分子。
宏基因組文庫的篩選除了功能篩選和序列篩選法外,還可以采用底物誘導(dǎo)基因表達(dá)法(sub-strate-induced gene expression,SIGEX)。SIGEX是以代謝相關(guān)基因或酶基因往往有底物存在的條件下才表達(dá),反之則不表達(dá)的原理來篩選目的代謝基因的。SIGEX的優(yōu)點在于它為高通量篩選提供了保障,而且不需要對底物進(jìn)行修飾。
2 宏基因組學(xué)在口腔微生物研究領(lǐng)域中的應(yīng)用
2.1口腔微生物群落結(jié)構(gòu)分析
口腔是一個由大量微生物組成的復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng),人類口腔中寄居著大約700多種細(xì)菌。人類口腔適宜的溫度、濕度,豐富的營養(yǎng)來源,結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和理化性質(zhì)的不同,為口腔內(nèi)各種微生物的生長、繁殖和定居提供了非常適宜的環(huán)境,因而也就造就了口腔微生物群的多樣性??谇晃⑸锎蟛糠挚梢韵嗷リP(guān)聯(lián)并形成生物膜,抵抗機(jī)械清除力或抗生素治療,但是在環(huán)境變化或其他口腔情況(如個人口腔衛(wèi)生質(zhì)量)變化觸發(fā)時,它們也可成為致病微生物。
菌斑指示劑和傳統(tǒng)培養(yǎng)方法以及常規(guī)的PCR特異性擴(kuò)增的分子生物學(xué)方法在某種程度上都不能完整地反映整個微生物群落的組成和動態(tài)變化,不適合用其研究復(fù)雜的口腔微生物群落。此外,在難培養(yǎng)或不可培養(yǎng)的微生物當(dāng)中,可能也有致病菌匿藏其中,因而也不能有效地用其研究與病程相關(guān)的微生物。
隨著分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)技術(shù)的發(fā)展,在基因組學(xué)的基礎(chǔ)上誕生了宏基因組學(xué)這一門嶄新的交叉學(xué)科。宏基因組學(xué)是繼發(fā)明顯微鏡以來研究微生物最重要的進(jìn)展,將為微生物世界帶來革命性的突破。Turnbaugh等利用16S rRNA基因測序發(fā)現(xiàn):胖人和瘦人的內(nèi)臟中有著不同的微生物菌群;當(dāng)胖人減肥的時候,他們內(nèi)臟中的細(xì)菌群基因也同樣發(fā)生變化,更加接近瘦人內(nèi)臟中的細(xì)菌群。
基于常規(guī)的口腔細(xì)菌培養(yǎng)方法和細(xì)胞學(xué)顯微鏡檢查,目前公認(rèn)變異鏈球菌和乳酸桿菌等是引起齲病的主要致病菌;但是,隨著宏基因組學(xué)在微生物的種類和多樣性研究中的應(yīng)用,有關(guān)齲病是由單一細(xì)菌引起或是由生物膜中的多種細(xì)菌引起的定論面臨質(zhì)疑。目前普遍認(rèn)為,齲病并不是僅由變異鏈球菌或其他任何一種菌斑中的細(xì)菌單獨引起的,而是由各種產(chǎn)酸菌相互作用的結(jié)果。
Aas等在對51名齲患者的1285個菌斑細(xì)菌的16S rRNA序列進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn),50%的細(xì)菌不能識別,一些新的細(xì)菌菌種與齲病的發(fā)生有關(guān)。Keijser等在用焦磷酸測序法分析健康人涎液和牙菌斑中細(xì)菌群時發(fā)現(xiàn),口腔微生物具有多樣性。即他們從98名健康成人口腔中取得的牙菌斑就由1萬個微生物表型組成,其種族數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過之前報道的通過培養(yǎng)或者傳統(tǒng)克隆和測序技術(shù)定義的700種口腔微生物表型。
Zaura等在利用焦磷酸測序技術(shù)檢測了3名健康高加索人口腔內(nèi)5個部位的微生物組后發(fā)現(xiàn),在健康人的口腔中微生物有3600種獨特物序列,超過500種不同的分類單元或“物種級”表型和88~104種高級分類群,每個單獨的樣品平均藏匿有266種分類單元。從這3名個體微生物組的測序結(jié)果分析可知,高級分類群、分類單元和獨特序列都有一個較大的重疊,即84%的高級分類群、75%的分類單元和65%的獨特序列至少在這3個微生物組中的2個組中存在。這3名個體的總共6315個獨特序列中有1660個相同序列,這1660個相同序列,即“核心微生物組”貢獻(xiàn)了66%的測序內(nèi)容,重疊的分類單元貢獻(xiàn)了94%的內(nèi)容,而幾乎所有的內(nèi)容(99.8%)都屬于共享的高級分類群。
研究證實,在不同的健康人的口腔微生物中,大部分微生物組是相同的,提示可能存在健康口腔核心微生物組。Kanasi等在對80名患齲和無齲嬰幼兒牙菌斑微生物的16S rRNA序列克隆分析中發(fā)現(xiàn),兩者之間存在著139種不同微生物。Gross等通過酶促法測序技術(shù)對無齲和患齲年輕恒牙牙菌斑微生物的16S rRNA序列進(jìn)行分析后認(rèn)為,齲齒中產(chǎn)酸菌除了變異鏈球菌和乳酸桿菌外,月形單胞菌、奈瑟菌和緩癥鏈球菌同樣是潛在的產(chǎn)酸細(xì)菌。Willner等等在利用高通量測序技術(shù)檢測了19名健康人口腔咽部的病毒宏基因組序列后發(fā)現(xiàn),口腔咽部是一個潛在的被噬菌體T3侵蝕的腸道菌儲存庫。另外,他們還發(fā)現(xiàn)了編碼血小板凝集因子PblA和PblB的兩個寄生于變異鏈球菌中的噬菌體sm-1基因,而之前有研究稱在心內(nèi)膜上發(fā)現(xiàn)了變異鏈球菌。這說明,口腔中的病毒與心臟疾病存在潛在的聯(lián)系。
宏基因組學(xué)技術(shù)可以避開傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法,在DNA水平來探討口腔微生物群落結(jié)構(gòu)及其與環(huán)境微生物的關(guān)系。微生物多樣性在基因水平上主要表現(xiàn)為基因組大小和基因數(shù)目的多樣性,遺傳物質(zhì)化學(xué)組成的多樣性和某些特異性序列的差異。宏基因組技術(shù)為研究口腔微生物復(fù)雜群落和多樣性提供了重要的技術(shù)手段,通過快速可靠地獲得口腔微生物中各種微生物的菌落指紋和特征性核苷酸序列,以系統(tǒng)分析口腔微生物的多樣性及其分類地位,發(fā)掘豐富的口腔微生物資源。
2.2口腔微生物宏基因組文庫中的新型基因篩選及其功能
宏基因組學(xué)除了研究微生物群落結(jié)構(gòu)及其功能外,還可用于發(fā)現(xiàn)新的基因和開發(fā)新的微生物活性物質(zhì)。Jiang等構(gòu)建土壤宏基因文庫,成功地克隆和鑒定出一種新型的β-葡萄糖苷酶基因,該基因包含一個由151個氨基酸編碼組成的多肽。該研究對深入挖掘土壤未培養(yǎng)微生物的β-葡萄糖苷酶基因資源和該基因功能具有的重要意義。陳春嵐等從富集培養(yǎng)物宏基因組文庫中篩選出一個表達(dá)木聚糖酶基因umxyn10B,該基因大小為999bp,編碼產(chǎn)物的氨基酸序列具有較好的同源性。對其功能進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),該酶具有優(yōu)良的理化特性,可廣泛應(yīng)用于食品、能源、造紙和紡織等行業(yè)。Yu等利用宏基因功能篩選發(fā)現(xiàn)的兩個新型低溫活性酶脂EstM-N1和EstM-N2,屬于細(xì)菌脂肪分解酶Ⅷ家族成員。這一發(fā)現(xiàn)將推動生物催化劑的應(yīng)用。
當(dāng)前,宏基因組學(xué)技術(shù)已經(jīng)在微生物學(xué)研究的諸多領(lǐng)域,尤其是在發(fā)現(xiàn)具有潛在應(yīng)用價值的次生代謝產(chǎn)物方面顯示出了無窮的魅力,但是,利用宏基因組技術(shù)探索口腔微生物的新的功能基因尚處于起步階段。Warburton等對口腔細(xì)菌群體中的耐藥基因進(jìn)行了分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)一個新的耐四環(huán)素基因tet32能夠使四環(huán)素失活。雖然對口腔微生物新的功能基因及其功能研究還太少,但依然可以借助宏基因組學(xué)技術(shù)發(fā)掘新基因,以利用這些新基因在口腔醫(yī)學(xué)行業(yè)發(fā)揮應(yīng)有的作用。
關(guān)鍵詞:植物-微生物聯(lián)合修復(fù);重金屬污染;底泥/土壤
中圖分類號 X53;X820.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731(2016)06-83-04
The Research Progress on Plant-microorganism Combined Remediation of Heavy Metals-contaminated Soil & Sediments
Wen Xiaofeng1 et al.
(1School of Hydraulic Engineering,Changsha University of Science and Technology,Changsha 410004,China)
Abstract:As a kind of persistent toxic,heavy metals pollution has caused a high degree of attention recently in China.As a green technology,plant-microorganism combined remediation are increasingly mature on its application in the oil pollution of soil,so appllying to the restoration of sediment/soil heavy metal pollution has been gradually carried out.This article summarizes the current situation of sediment/soil heavy metal pollution,the processing method and so on.Also the definition,principle about the plant-microorganism combined remediation was expatiated,and the different forms of plant-microorganism combined remediation on plant-microbial was described.Finally,the application foreground of the plant-microorganism combined remediation in sediment/soil heavy metal pollution repair was prospected.
Key words:Plant-microorganism combined remediation;Heavy metals pollution;Sediments & Soils
重金屬(Heavy metals)一般是指密度大于5g/cm3,超過一定量后對生物具有明顯毒性的金屬或者類金屬元素,如鎘、鉻、鋅、銅、鉛、汞、砷等[1]。這些(類)金屬元素及其化合物在環(huán)境中只是發(fā)生形態(tài)或者價態(tài)的變化,難以被降解,屬于持久性的累積性毒物,對人類有著潛在長久的危害[2]。底泥、土壤是眾多底棲生物、陸生生物的棲息覓食生活場所,在底泥/土壤中累積的重金屬會通過食物鏈的放大,最終進(jìn)入人體,使得人體內(nèi)的重金屬含量逐漸增多,從而出現(xiàn)慢性中毒,對人類的健康造成長久且不可挽回的損害[3]。因此,對底泥/土壤中重金屬污染的治理研究有著重要的意義。中國對重金屬污染底泥/土壤的治理始于20世紀(jì)70年代,對重金屬污染底泥/土壤的處理機(jī)理分為固定、活化2種,前者降低底泥/土壤中重金屬離子的有效性,使其沉淀化從而降低其生物有效性,降低對植物的毒害,后者通過一系列措施提高重金屬的生物有效性,再通過植物、微生物等吸附提取從底泥/土壤中去除[4]。目前用于處理重金屬污染底泥/土壤的方法可分為原位修復(fù)(In-situ Remediation)與異位修復(fù)(Ex-situ Remediation)。物理修復(fù)法見效快,但工程量大,耗財耗力,且通過物理修復(fù)后均難以使底泥/土壤達(dá)到要求的標(biāo)準(zhǔn);化學(xué)修復(fù)法能在短時間內(nèi)大幅度去除底泥/土壤中的重金屬,但去除一般都不徹底,且治理成本高,人力物力耗費較多,易造成二次污染,化學(xué)藥劑也會對水生/陸生生態(tài)系統(tǒng)構(gòu)成潛在的威脅[5]。植物-微生物聯(lián)合修復(fù)在進(jìn)入21世紀(jì)后得到了快速發(fā)展,近年來由于其在富營養(yǎng)化污廢水、石油污染水體/土壤中的良好治理效果而引起了高度關(guān)注[6],在重金屬污染底泥/土壤的處理中極具潛力,是今后治理重金屬污染底泥/土壤著重研究發(fā)展的方向。
1 植物-微生物聯(lián)合修復(fù)的定義及原理
植物-微生物聯(lián)合修復(fù)屬于生物修復(fù),它通過建立植物-微生物共生體系,通過微生物加強(qiáng)植物富集、固定底泥/土壤中重金屬的能力,利用植物-微生物共生體系富集、固定底泥/土壤中的污染物[7]。微生物強(qiáng)化植物修復(fù)主要是強(qiáng)化植物富集、固定能力,主要表現(xiàn)在2個方面[8]:(1)活化或固定底泥/土壤中重金屬;(2)促進(jìn)植物生長。用于重金屬污染修復(fù)的植物-微生物聯(lián)合修復(fù)中的植物與微生物兩者是互惠互利的關(guān)系,土壤-微生物共存環(huán)境中,底泥/土壤中附著在根際的微生物能將土壤有機(jī)質(zhì)、植物根系分泌物轉(zhuǎn)化成自身可吸收的小分子物質(zhì),同時通過分泌有機(jī)酸、鐵載體等螯合物質(zhì)改變底泥/土壤中重金屬的賦存狀態(tài)或者氧化還原狀態(tài),降低重金屬的毒性,增加重金屬的生物有效性,減少重金屬對植物本身的毒害,有利于植物對重金屬的吸收、轉(zhuǎn)移、富集,從而增加了累積植物重金屬的生長量、富集量[8-9]。體外微生物對土壤中Fe、Mn氧化物進(jìn)行還原,解析出其中的重金屬,也可將硫等氧化成硫酸鹽,降低土壤的pH值,進(jìn)而增加了重金屬的活性,轉(zhuǎn)換成易于被植物吸收的形態(tài);活動于植物體內(nèi)的根內(nèi)菌則通過分泌一定量的生長促生劑促進(jìn)宿主植物生長,進(jìn)而增加宿主植物對重金屬的富集量,有利于植物對底泥/土壤中重金屬的吸收[6,10]。而植物對微生物修復(fù)的強(qiáng)化則體現(xiàn)在植物根際分泌物上,根際的分泌物對根際微生物起著很關(guān)鍵的作用,根系分泌物數(shù)量豐富,一般包括糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、有機(jī)酸、酚類等,其中有機(jī)酸通過螯合、活化作用改變土壤中的重金屬化學(xué)行為、生態(tài)行為,進(jìn)而改變重金屬對植物、微生物生物有效性、毒性[11]。同時,蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)質(zhì)分泌物可以作為根際微生物的營養(yǎng)、能源來源,大大提高了根際微生物的活性,根際微生物活性的增加又反過來作用于植物根際,影響了根的代謝活動和細(xì)胞膜的膜透性,并改變了根際養(yǎng)分的生物有效性,促進(jìn)了根際分泌物的釋放[12]。植物-微生物二者的聯(lián)合對植物、微生物修復(fù)法各自處理底泥/土壤中的重金屬起到了強(qiáng)化作用,提高了對底泥/土壤中重金屬的處理效率,在處理重金屬污染底泥/土壤中有著很大的潛力[13]。
2 植物-微生物聯(lián)合修復(fù)技術(shù)的幾種形式
2.1 植物-土著優(yōu)勢菌聯(lián)合修復(fù) 隨著底泥/土壤中重金屬污染的加重,某些微生物能對重金屬表現(xiàn)出耐受性,從污染底泥/土壤中分離出來的此類微生物即為土著優(yōu)勢菌種[14]。真菌、細(xì)菌、放線菌是底泥/土壤中分布廣、生物量大的微生物,表面積/體積比很大,表面附著的羧基、磷?;⒘u基等負(fù)電荷的功能基團(tuán)使得它們對重金屬陽離子有著很強(qiáng)的吸附作用[15]。土著優(yōu)勢菌強(qiáng)化植物富集重金屬的機(jī)制主要表現(xiàn)在以下幾個方面[16]:(1)微生物分泌胞外聚合物與重金屬離子絡(luò)合解毒,降低重金屬毒性;(2)分泌的酸類對重金屬起到活化作用,提高重金屬的生物有效性,增強(qiáng)了植物對重金屬的富集能力;(3)微生物對土壤中金屬離子進(jìn)行氧化還原及甲基化作用,從而對重金屬離子產(chǎn)生作用,將重金屬轉(zhuǎn)化為低毒、無毒的形式。陳文清等[17]利用盆栽實驗研究了魚腥草與內(nèi)源根際微生物聯(lián)合修復(fù)鎘污染土壤,發(fā)現(xiàn)在土壤鎘濃度為5mg/kg、10mg/kg時,魚腥草的富集率分別為2.86%、1.63%,吸收量最高可達(dá)培養(yǎng)前自身鎘濃度的200倍(種植前魚腥草鎘含量0.114 6mg/kg,富集后最高達(dá)24.44mg/kg),根際的細(xì)菌、霉菌耐性較弱,培養(yǎng)初期放線菌對鎘耐性很強(qiáng),較高濃度鎘可能刺激了放線菌的大量生長,在兩者聯(lián)合下,土壤微生態(tài)系統(tǒng)能夠保持較好的穩(wěn)定性。高亞潔等[18]利用草本植物紫花苜蓿-土著微生物對重金屬污染的河道底泥進(jìn)行修復(fù),在經(jīng)過6個月的PVC箱培養(yǎng)后,底泥中的Ni、Cu、Pb、Cr、Mn、Zn都得到了一定的去除,Ni、Cu、Pb、Cr、Zn均累積在紫花苜蓿根部,其中對Zn的總累積量最大,而Mn則在紫花苜蓿葉片中累積最多,占植物中總累積量的42.47%,而根際微生物也對植物修復(fù)起了輔助強(qiáng)化作用,其中的Cu與細(xì)菌總數(shù)有著相關(guān)系數(shù)為0.90的相關(guān)關(guān)系。
2.2 植物-根際菌根真菌聯(lián)合修復(fù) 菌根是一個微生物團(tuán),主要包括真菌、放線菌、固氮菌,是在植物根際發(fā)現(xiàn)的有助于植物生長的菌絲團(tuán),是土壤中的微生物與根系形成的聯(lián)合體[19-20]。菌根表面微生物形成的菌絲大幅度增加了根系吸收面積,而菌根真菌是處理重金屬的主要部分,真菌的酸溶、酶解能力使得它們能為植物提供了一部分營養(yǎng)物質(zhì),增加了植物的長勢,同時改善根際土壤環(huán)境,增加了植物抗蟲、抗逆的生存能力[21]。菌根真菌在自然界分布廣泛,一般來說,重金屬污染區(qū)域的菌根植物根際的真菌對重金屬會有著強(qiáng)的耐受力,也可從未受重金屬污染土壤中分離菌根真菌再進(jìn)行篩選強(qiáng)化。李芳等[22]選了未受重金屬污染的點柄粘蓋牛肝菌、卷緣樁菇2種外生菌根真菌,研究二者對Pb、Zn、Cd的耐受性,發(fā)現(xiàn)卷緣樁菇比點柄粘蓋牛肝菌更耐受Pb、Zn的毒害,點柄粘蓋牛肝菌則對Cd有更強(qiáng)的耐受性。
2.3 植物-植物內(nèi)生菌聯(lián)合修復(fù) 植物內(nèi)生菌(Endophytes)是指那些在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物的各種組織和器官體內(nèi)或細(xì)胞間隙的真菌和細(xì)菌,被感染的宿主植物不表現(xiàn)或暫時不表現(xiàn)外在病癥[23]。內(nèi)生菌通過代謝作用利于宿主植物的生長和抗重金屬毒性,可通過沉淀重金屬離子、產(chǎn)有機(jī)酸和蛋白降低植物毒性、產(chǎn)生促進(jìn)植物生長的植物激素、抗氧化系統(tǒng)抵御重金屬毒性、增強(qiáng)植物對營養(yǎng)元素的吸收能力等來強(qiáng)化植物修復(fù)[24]。萬勇等[25]通過在龍葵種子中接種來自龍葵的抗性內(nèi)生菌(S.nematodiphila,LRE07)來處理污染土壤,對龍葵富集鎘濃度沒有顯著影響,但極大地促進(jìn)了植物的生長量,間接地提高了植物對鎘的總富集量,在10μM鎘濃度下,植株鎘富集量比對照組增長了(72±5)%。Sheng等[26]將來自油菜根部的內(nèi)生菌P.fluorescens G10、Microbacterium sp.G16接種于鉛污染土壤,極大地提高了土壤中可溶態(tài)鉛的含量,有利于植物對鉛的富集吸收。Badu等[27]將從歐洲赤松根部內(nèi)分離得到的抗性菌蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis,GDB-1)接種于赤楊皮樹苗體內(nèi),用以處理污染土壤,發(fā)現(xiàn)相對對照組赤楊皮樹根部重金屬濃度分別提高了154%(Ni)、135%(Cd)、120%(Zn)、117%(Pb)、114%(Cu)、113%(As),莖部重金屬濃度分別提高了175%(Ni)、160%(Cd)、137%(Zn)、137%(Pb)、161.1%(Cu)、110.1%(As)。
2.4 植物-其他微生物聯(lián)合修復(fù) 除了以上3類聯(lián)合,可以和植物聯(lián)合修復(fù)底泥/土壤重金屬污染的微生物還包括產(chǎn)酸微生物、基因工程菌等。楊卓等[28]利用印度芥菜與能產(chǎn)生有機(jī)酸、檸檬酸的巨大芽孢桿菌-膠質(zhì)芽孢桿菌、黑曲霉混合制劑來修復(fù)Cd、Pb、Zn污染的土壤,添加巨大芽孢桿菌-膠質(zhì)芽孢桿菌混合制劑時,污染土壤中印度芥菜對Cd、Pb、Zn的提取量分別提高了1.18、1.54、0.85倍,污染底泥中印度芥菜對Cd、Pb、Zn的提取量分別提高了4.00、0.64、0.65倍;添加黑曲霉時,污染土壤中印度芥菜對Cd、Pb、Zn的提取量比對照提高了88.82%、129.04%、16.80%,污染底泥中印度芥菜對Cd、Pb、Zn的提取量比對照提高了78.95%、113.63%、33.85%。在基因工程菌的研發(fā)方面,Lodewyckx等[29]將植物內(nèi)生菌的抗性基因ncc-nre耐鎳系統(tǒng)接種到Burkholderia cepacia L.S.2.4,再將B.cepacia L.S.2.4接種到羽扇豆(Lupinus luteus),發(fā)現(xiàn)根部的鎳濃度比對照提高了30%。
3 研究展望
植物-微生物聯(lián)合修復(fù)技術(shù)中能用于單一重金屬或有機(jī)物污染底泥/土壤的植物修復(fù)相對較多,多種重金屬和重金屬與有機(jī)物的復(fù)合污染的植物修復(fù)則相對較少。目前已發(fā)現(xiàn)的重金屬超積累植物大都為單一重金屬的超積累植物。超積累植物存在著個體矮小、生長緩慢、根系擴(kuò)張深度有限、對重金屬有選擇性、從根部到莖葉的重金屬轉(zhuǎn)移率較低等缺陷。而微生物對影響生長代謝的生物因子均有一定的耐受范圍,超出范圍微生物易死亡或休眠,因此在聯(lián)合修復(fù)中還應(yīng)根據(jù)微生物的需要,對環(huán)境因子做出相應(yīng)的調(diào)整,使微生物的代謝活動處于最佳狀態(tài)。
在實際利用植物-微生物聯(lián)合修復(fù)重金屬污染土壤時,“植物-微生物”聯(lián)合體的選擇至關(guān)重要。從目前來看,徹底解決底泥/土壤中的重金屬污染問題還需要很長一段時間。為了加速改善這種狀況,推進(jìn)植物-微生物修復(fù)在重金屬污染底泥/土壤實際修復(fù)中的應(yīng)用,近期應(yīng)該注重以下幾個方面的深入研究:(1)對植物-微生物不同聯(lián)合形式修復(fù)底泥/土壤中重金屬吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、忍耐機(jī)制進(jìn)行深入研究;(2)尋找能縮短修復(fù)周期、增強(qiáng)植物生長量、解決植物植株矮小等問題的手段;(3)針對超累積植物處理重金屬種類單一的缺點,應(yīng)加強(qiáng)對能同時修復(fù)多種重金屬的陸生、水生、濕生植物品種的篩選培育;(4)利用基因工程、分子技術(shù)研制適用于植物微生物聯(lián)合體系的微生物的篩選研發(fā),同時加強(qiáng)對底泥/土壤中土著微生物方面的研究;(5)盡快探索出能解決接種微生物與土著微生物競爭及適應(yīng)性問題的方案。
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關(guān)鍵詞:微生物 殼聚糖酶 殼寡糖 發(fā)酵
中圖分類號:Q936 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1672-5336(2014)10-0002-01
1973年,Monaghan等在研究細(xì)菌和真菌過程中,首次提出殼聚糖酶的概念。1992年殼聚糖酶被系統(tǒng)命名為EC3.2.1.132。2004年,國際酶委員對殼聚糖酶重新定義為:一類催化氨基葡萄糖間的β-1,4-糖苷鍵斷裂,從而專一性降解殼聚糖的糖苷水解酶,殼聚糖酶的發(fā)現(xiàn)可克服殼聚糖生產(chǎn)成本高和溶解性的缺陷,從而轉(zhuǎn)化為溶解性更優(yōu)越、溶液穩(wěn)定性更強(qiáng)、生物活性更豐富的殼寡糖,這就成了現(xiàn)今研究的熱點方向。作者結(jié)合近年來國內(nèi)外殼聚糖酶的研究成果,綜合分析了殼聚糖酶的分類、性質(zhì)和制備方法等研究現(xiàn)狀。
1 殼聚糖酶概述
殼聚糖酶目前有3種分類方法[3]:底物專一性差別和酶的產(chǎn)生特點。根據(jù)底物專一性差別,殼聚糖酶可以分為三類,第一類可以水解GlcN-GlcN鍵及GlcNAc-GlcN鍵;第二類只能水解GlcN-GlcN鍵;第三類既可水解GlcN-GlcN鍵,又可水解GlcN-GlcNAc鍵。根據(jù)酶的產(chǎn)生特點,可以將殼聚糖酶分為組成型和誘導(dǎo)型。
殼聚糖酶大部分為堿性蛋白,其最適pH值范圍一般在4.0~8.0。酶的等電點(pI)變化范圍大多集中在4.0~10.1。殼聚糖酶具有較好的熱穩(wěn)定性,最適反應(yīng)溫度在30~60℃。研究發(fā)現(xiàn)金屬離子尤其是重金屬離子對殼聚糖酶活性有不同程度的影響。大部分殼聚糖酶屬于內(nèi)切酶,降解殼聚糖生成殼二糖、殼三糖等寡聚體的混合物,殼聚糖酶在酶解過程中的活性是隨著N-乙?;?、N-取代基團(tuán)及其不同取代位置以及均相和非均相反應(yīng)體系而變化的。
2 殼聚糖酶的微生物制備方法
2.1 微生物液體發(fā)酵
目前研究公認(rèn)大多數(shù)微生物來源的殼聚糖酶屬于誘導(dǎo)酶,因此當(dāng)以殼聚糖作為唯一碳源時,微生物的產(chǎn)殼聚糖酶的能力就能被誘導(dǎo)出來。一般的液體發(fā)酵步驟是通過平板分離初篩和搖瓶培養(yǎng)復(fù)篩,從土壤中篩選出產(chǎn)殼聚糖酶菌株,然后經(jīng)酶活力檢測比較,挑選出產(chǎn)酶能力最強(qiáng)的菌株作為產(chǎn)酶試驗菌。當(dāng)然也可通過人工誘變處理來獲得高產(chǎn)突變株,最常用的方法是化學(xué)法和物理法誘變,可采用單因子誘變處理和復(fù)合因子處理。目前對于殼聚糖酶的分離純化方法主要有(NH4)2SO4分級鹽析、Q-Sepharose Fast Flow陰離子交換、Sephacry S-100凝膠過濾分離等方法。酶活單位定義為每分鐘催化生成相當(dāng)于1μmol氨基葡萄糖的還原糖所需的酶量。測定殼聚糖酶最常用的方法是DNS法,此外還有粘度法快速測定法和鐵氰化鉀顯色法。對已篩選出的產(chǎn)殼聚糖酶菌種的鑒定一般包括①形態(tài)學(xué)特征鑒定;②生理生化特性鑒定;③16S rDNA序列分析。由于殼聚糖酶的穩(wěn)定性不高、壽命短、且無法循環(huán)使用,在生產(chǎn)中的應(yīng)用受到了極大限制,但是通過固定化后上述缺點都可以解決。
2.2 絲狀真菌固態(tài)發(fā)酵
工業(yè)上固態(tài)發(fā)酵是生產(chǎn)酶制劑的主要方式,對于菌絲體有利于保持其自然生理狀態(tài)和生長,所用培養(yǎng)基和發(fā)酵條件更加低廉和簡單,而且投資較少;純化步驟少,產(chǎn)品純度高,是絲狀真菌的一種理想培養(yǎng)方法,糖化工業(yè)中以常見的根霉菌絲體替代純殼聚糖為誘導(dǎo)原料。
2.3 基因工程育種
除了在自然界中繼續(xù)篩選產(chǎn)酶活性較高的微生物菌種外,現(xiàn)在越來越多的研究人員利用基因工程通過對產(chǎn)殼聚糖酶菌株的基因分析,運(yùn)用分子方法克隆并高效表達(dá)所選菌種的殼聚糖酶基因,以實現(xiàn)重組菌的殼聚糖酶高效表達(dá),具體技術(shù)路線如下:根據(jù)所選菌株殼聚糖酶基因序列或參照其他菌株的殼聚糖酶基因序列PCR引物設(shè)計,引物合成提取所選菌株總DNAPCR擴(kuò)增獲得目的基因構(gòu)建原核表達(dá)載體重組菌高效表達(dá)條件研究殼聚糖酶高效表達(dá)。
3 研究展望
繼續(xù)篩選產(chǎn)酶活性較高的微生物菌種的過程中,要合理運(yùn)用新的誘變方法或進(jìn)行復(fù)合誘變,以減小菌種對誘變方法的抗性,從而獲得高產(chǎn)菌株。另外,對發(fā)酵條件也要進(jìn)行優(yōu)化和改進(jìn),篩選出最佳產(chǎn)酶條件,以獲得最大的產(chǎn)酶量。另一方面,應(yīng)該緊跟國際前沿,進(jìn)一步在分子水平上研究殼聚糖酶的分子結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制,以便更有效地克隆細(xì)菌殼聚糖酶基因,構(gòu)建能高效表達(dá)殼聚糖酶的工程菌株,對酶分子進(jìn)行定向修飾,從本質(zhì)上提高殼聚糖酶的活性與穩(wěn)定性,加速其應(yīng)用的大規(guī)模實用化和產(chǎn)業(yè)化。
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