學(xué)習(xí)周計(jì)劃精選(九篇)

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第1篇：學(xué)習(xí)周計(jì)劃范文

【摘要】目的 使實(shí)習(xí)護(hù)士在兩個(gè)周的實(shí)習(xí)時(shí)間熟悉手術(shù)室工作，掌握無(wú)菌技術(shù)。方法 設(shè)立教學(xué)干事、教學(xué)小組，建立指導(dǎo)教師負(fù)責(zé)制度和評(píng)教、評(píng)學(xué)制度，開(kāi)展情景式教學(xué)，采用循序漸進(jìn)的方法。教學(xué)內(nèi)容和教學(xué)手段分階段突出重點(diǎn)。結(jié)果 實(shí)習(xí)護(hù)士很快進(jìn)入臨床實(shí)習(xí)狀態(tài)，縮短了其上臺(tái)還需自己琢磨的過(guò)程，增強(qiáng)了自信心，全面掌握了手術(shù)室基礎(chǔ)理論知識(shí)和基本操作技能。結(jié)論 兩周教學(xué)計(jì)劃在手術(shù)室實(shí)習(xí)護(hù)士的教學(xué)中應(yīng)用效果良好。

【關(guān)鍵詞】手術(shù)室 實(shí)習(xí)護(hù)士 教學(xué)計(jì)劃

臨床實(shí)習(xí)是護(hù)理教學(xué)的重要階段，是學(xué)校教育的深化和延續(xù)，是促進(jìn)護(hù)理基礎(chǔ)和臨床實(shí)踐有機(jī)結(jié)合的一個(gè)重要時(shí)期［1］。手術(shù)室不同于病房，結(jié)合我科的實(shí)際情況，形成了一套完整的實(shí)習(xí)護(hù)士管理體系，現(xiàn)將我科教學(xué)經(jīng)驗(yàn)介紹如下。

1 一般資料

我科在職護(hù)士23人，職稱：主管護(hù)師5人，護(hù)師6人，護(hù)士12人；學(xué)歷：本科6人，?？?3人，中專4人；工齡2—25（平均6.2）年。從2007年以來(lái)，每年接收實(shí)習(xí)護(hù)士120—150人，每輪到我科有6—8人，時(shí)間為2個(gè)周。

2 管理制度

2.1設(shè)立教學(xué)干事、教學(xué)小組，建立指導(dǎo)教師負(fù)責(zé)制 設(shè)立教學(xué)干事一名，下設(shè)教學(xué)小組，成員8人（護(hù)師及以上），建立指導(dǎo)教師負(fù)責(zé)制度，由教學(xué)干事安排實(shí)施“一對(duì)一”帶教。帶教工作要有針對(duì)性、實(shí)用性。實(shí)習(xí)護(hù)士跟老師上班，便于指導(dǎo)，老師以身作則，言傳身教，給學(xué)生以深刻的影響。同時(shí)，也利于教學(xué)干事及時(shí)了解實(shí)習(xí)護(hù)士情況，為針對(duì)性地安排教學(xué)內(nèi)容提供便捷。

2.2評(píng)教、評(píng)學(xué)制度 以定期召開(kāi)座談會(huì)的形式，時(shí)機(jī)選擇在實(shí)習(xí)護(hù)士進(jìn)科室時(shí)、實(shí)習(xí)中期、實(shí)習(xí)結(jié)束出科室時(shí)，采取師生面對(duì)面交流，以增進(jìn)溝通，及時(shí)收集學(xué)生對(duì)教學(xué)工作的意見(jiàn)及建議，針對(duì)帶教中存在的問(wèn)題及時(shí)整改，調(diào)整教學(xué)內(nèi)容，出科時(shí)進(jìn)行理論考試和操作考核。

3 教學(xué)計(jì)劃

3.1學(xué)生入科教育

3.1.1加強(qiáng)思想素質(zhì)教育 護(hù)士長(zhǎng)與實(shí)習(xí)護(hù)士進(jìn)行溝通，了解學(xué)生思想情況，教育學(xué)生要熱愛(ài)護(hù)理專業(yè)，培養(yǎng)良好的工作習(xí)慣及吃苦耐勞的精神，分析就業(yè)前景，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)熱情，端正學(xué)習(xí)態(tài)度。

3.1.2了解科室基本情況 由帶教老師詳細(xì)介紹手術(shù)室環(huán)境、設(shè)施、工作程序、規(guī)章制度、管理內(nèi)容。尤其要詳細(xì)介紹手術(shù)室的各種電器、大型儀器的使用及注意事項(xiàng)。

3.1.3儀表著裝規(guī)范 手術(shù)室無(wú)菌要求嚴(yán)格，進(jìn)入手術(shù)室必須更換手術(shù)室的鞋和服裝，要求學(xué)生儀表、著裝、行為舉止規(guī)范化。

3.1.4熟悉手術(shù)器械 介紹常用器械（以普外為主）的名稱、用法、保養(yǎng)、放置位置及普通手術(shù)的器械準(zhǔn)備、打包方法。

3.1.5熟悉各種無(wú)菌技術(shù)及操作 認(rèn)識(shí)各種器械、敷料后，由指導(dǎo)教師親自講解示范：洗手、穿無(wú)菌手術(shù)衣、戴無(wú)菌手套、鋪無(wú)菌手術(shù)臺(tái)、器械擺放、持針穿線、取上刀片、傳遞物品、各種手術(shù)的消毒范圍以及鋪無(wú)菌巾，讓她們練習(xí)穿針引線、套刀片、器械傳遞的基本技術(shù)，為實(shí)際操作做好準(zhǔn)備。

3.2開(kāi)展情景式教學(xué) 學(xué)生入科第二天，采用情景模擬與實(shí)踐結(jié)合，實(shí)習(xí)生按角色分為三組:巡回護(hù)士組、洗手護(hù)士組及手術(shù)醫(yī)生組，模擬手術(shù)過(guò)程，實(shí)習(xí)護(hù)士演示相關(guān)護(hù)理操作， 從器械準(zhǔn)備、消毒鋪巾、術(shù)中物品傳遞進(jìn)行強(qiáng)化，包括的擺放，對(duì)手術(shù)儀器的使用等。老師從旁指導(dǎo)。

3.3提高?？萍寄苡?xùn)練

3.3.1入科第三天，實(shí)習(xí)護(hù)士直接參加手術(shù)配合，由帶教老師進(jìn)一步指導(dǎo)。尤其是查對(duì)工作，術(shù)前準(zhǔn)備十查：姓名、性別、年齡、科別、床號(hào)、診斷、手術(shù)名稱、部位、藥敏試驗(yàn)、用物準(zhǔn)備；術(shù)中用藥輸血三查對(duì);器械敷料三查對(duì)［2］。

3.3.2組織知識(shí)小講座 主要講解：《洗手護(hù)士的工作職責(zé)》、《巡回護(hù)士工作職責(zé)》、《手術(shù)常規(guī)tiwei的擺放原則及注意事項(xiàng)》、選出具有代表性的手術(shù)配合進(jìn)行講解。

3.3.3組織?？撇榉浚g(shù)前1日由實(shí)習(xí)護(hù)士探視病人，匯報(bào)帶教老師。術(shù)日由教學(xué)干事主持實(shí)習(xí)護(hù)士匯報(bào)病情以及術(shù)前準(zhǔn)備情況，術(shù)中物品準(zhǔn)備、手術(shù)配合要點(diǎn)，以及此手術(shù)的解剖，由帶教老師補(bǔ)充不足之處。

3.3.4要求實(shí)習(xí)護(hù)士對(duì)所做工作的感受和想法與帶教老師溝通，及時(shí)反饋到教學(xué)干事處，以便改進(jìn)教學(xué)計(jì)劃。

4 理論和操作技能的考核

4.1學(xué)生出科前一天，理論考核以試卷的形式考核，主要考核內(nèi)容圍繞洗手、巡回護(hù)士職責(zé)、手術(shù)患者擺放原則、手術(shù)配合注意要點(diǎn)、手術(shù)室基本常識(shí)為主。

4.2操作技能的考核，主要由帶教老師負(fù)責(zé)，做到放手不放眼，由實(shí)習(xí)護(hù)士單獨(dú)配合完成一臺(tái)簡(jiǎn)單手術(shù)。

4.3分析實(shí)習(xí)護(hù)士考核成績(jī)，針對(duì)不足之處，在出科最后一天再加以施教，強(qiáng)化彌補(bǔ)。

5 小結(jié)

我科形成的這一套兩周教學(xué)計(jì)劃，在實(shí)習(xí)護(hù)士的應(yīng)用中教學(xué)良好，實(shí)習(xí)護(hù)士基本上通過(guò)了理論知識(shí)考核、掌握無(wú)菌技術(shù)操作技能，圓滿完成在我科實(shí)習(xí)計(jì)劃。

參 考 文 獻(xiàn)

第2篇：學(xué)習(xí)周計(jì)劃范文

關(guān)鍵詞：化學(xué)；教學(xué)設(shè)計(jì)；課堂預(yù)習(xí)；步驟

中圖分類號(hào)：G632 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1002-7661（2013）31-220-01

如果把整個(gè)學(xué)習(xí)過(guò)程比作一首樂(lè)曲，那么預(yù)習(xí)可以說(shuō)就是樂(lè)曲的前奏，俗話說(shuō)：好的開(kāi)始是成功的一半，精彩的前奏引人入勝，能使人自然的熏陶于音樂(lè)的情境中。預(yù)習(xí)在學(xué)習(xí)中起著重要的作用。預(yù)習(xí)可以培養(yǎng)學(xué)生自學(xué)的習(xí)慣，提高學(xué)生自學(xué)能力；可以使學(xué)生主動(dòng)的聽(tīng)課，提高聽(tīng)課水平；可以彌補(bǔ)知識(shí)缺漏等。

一、化學(xué)課堂預(yù)習(xí)的教學(xué)設(shè)計(jì)

1、講學(xué)稿的設(shè)計(jì)

在設(shè)計(jì)講學(xué)稿時(shí)，將學(xué)習(xí)目標(biāo)、學(xué)習(xí)重點(diǎn)、難點(diǎn)、活動(dòng)設(shè)計(jì)、反饋練習(xí)、知識(shí)拓展、課外閱讀、作業(yè)等納入其中。既可以作為學(xué)生使用的學(xué)案，又可以作為教師使用的教案。講學(xué)稿的設(shè)計(jì)和實(shí)施是一個(gè)動(dòng)態(tài)生成的過(guò)程。其間，要不斷地向?qū)W生和老師征求意見(jiàn)，逐步實(shí)行講學(xué)稿的優(yōu)化。因此，講學(xué)稿的內(nèi)容也應(yīng)包括學(xué)生意見(jiàn)、教師意見(jiàn)一欄。

2、對(duì)學(xué)生講學(xué)稿預(yù)習(xí)情況的檢查

每節(jié)課上課之前，教師將講學(xué)稿收上來(lái)，并逐一進(jìn)行準(zhǔn)確及時(shí)的評(píng)閱，通過(guò)批語(yǔ)對(duì)學(xué)生的預(yù)習(xí)進(jìn)行指導(dǎo)和評(píng)價(jià)。而后，進(jìn)行歸納總結(jié)，為課堂上的二次預(yù)習(xí)指導(dǎo)進(jìn)行針對(duì)性的準(zhǔn)備。

3、針對(duì)學(xué)生情況，進(jìn)行指導(dǎo)下的二次預(yù)習(xí)

首先，讓學(xué)生根據(jù)講學(xué)稿批語(yǔ)，進(jìn)行小組討論，由每小組進(jìn)行組內(nèi)問(wèn)題解決，不能解決的以提問(wèn)的方式提交給教師，教師在這些問(wèn)題的基礎(chǔ)上進(jìn)行預(yù)習(xí)指導(dǎo)，學(xué)生進(jìn)行二次預(yù)習(xí)。

4、課后評(píng)價(jià)及反思

本次課結(jié)束之后，根據(jù)學(xué)生的預(yù)習(xí)、課堂表現(xiàn)、作業(yè)等進(jìn)行教學(xué)反思。促進(jìn)講學(xué)稿的進(jìn)一步優(yōu)化，預(yù)習(xí)指導(dǎo)的針對(duì)性及課堂教學(xué)效率的提高。

二、預(yù)習(xí)的組織

1、認(rèn)真?zhèn)湔n，制定目標(biāo)

教師在備課時(shí)，應(yīng)該充分重視對(duì)預(yù)習(xí)的指導(dǎo)，通過(guò)教師相互間的討論，對(duì)那些需回顧的相關(guān)知識(shí)或?qū)W生通過(guò)預(yù)習(xí)完全能掌握的課時(shí)目標(biāo)，均應(yīng)列入預(yù)習(xí)目標(biāo)，在預(yù)習(xí)中解決，從而使學(xué)生自學(xué)能力提高。

2、認(rèn)定目標(biāo)，激發(fā)動(dòng)機(jī)

預(yù)習(xí)目標(biāo)也是課時(shí)教學(xué)目標(biāo)的一部分，師生在認(rèn)定目標(biāo)時(shí)，應(yīng)明確哪些是預(yù)習(xí)目標(biāo)，教師作適當(dāng)?shù)那楦屑ぐl(fā)，以調(diào)動(dòng)學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性

三、預(yù)習(xí)的指導(dǎo)

1、出示提綱，引導(dǎo)思路

教師通過(guò)書(shū)面或口頭向?qū)W生出示預(yù)習(xí)提綱，并指出預(yù)習(xí)時(shí)應(yīng)作哪些知識(shí)和技能準(zhǔn)備，以及預(yù)習(xí)時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題。預(yù)習(xí)提綱的編制，應(yīng)與教學(xué)內(nèi)容有相關(guān)性和層次性，以便于學(xué)生在預(yù)習(xí)時(shí)開(kāi)拓思路，層層深入，逐步提高。

2、獨(dú)立自學(xué)，重點(diǎn)點(diǎn)撥

這是預(yù)習(xí)程序的關(guān)鍵一步，教師要鼓勵(lì)學(xué)生獨(dú)立自學(xué)或小組學(xué)習(xí)，認(rèn)真讀書(shū)，勤于思考。在學(xué)生自學(xué)的基礎(chǔ)上教師要給予適當(dāng)?shù)狞c(diǎn)撥，做到自學(xué)為主，點(diǎn)撥為輔，兩者有機(jī)結(jié)合。

四、培養(yǎng)初三學(xué)生預(yù)習(xí)能力的具體做法

1、合理、科學(xué)的“預(yù)習(xí)文本”是學(xué)生進(jìn)行有效預(yù)習(xí)的保障

近年來(lái)，我?；瘜W(xué)學(xué)科就如何指導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行預(yù)習(xí)，經(jīng)過(guò)了一番嘗試，收集了大量一手資料，積累了一些經(jīng)驗(yàn)。我們發(fā)現(xiàn)，設(shè)計(jì)一份合理、科學(xué)的“預(yù)習(xí)文本”，可使學(xué)生的預(yù)習(xí)有本可依，有章可循。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的訓(xùn)練，學(xué)生逐漸從不愿預(yù)習(xí)、不會(huì)預(yù)習(xí)，變得愛(ài)預(yù)習(xí)、會(huì)預(yù)習(xí)了。學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性得到提高，也大大提高了教學(xué)效率。我們把精心設(shè)計(jì)的“預(yù)習(xí)文本”稱為“講學(xué)稿”，根據(jù)陶行知先生“學(xué)生學(xué)的法子，就是先生教的法子”這一教學(xué)思想來(lái)設(shè)計(jì)。

“講學(xué)稿”以預(yù)習(xí)為切入點(diǎn)，設(shè)計(jì)時(shí)將學(xué)習(xí)目標(biāo)、預(yù)習(xí)提示、預(yù)習(xí)自評(píng)、課堂研討、實(shí)踐應(yīng)用、知識(shí)歸納、課堂評(píng)價(jià)、課后拓展等板塊納入其中。一份講學(xué)稿既可以作為學(xué)生使用的學(xué)案，又可以作為教師使用的教案?！爸v學(xué)稿”不僅使學(xué)生的課前預(yù)習(xí)、課堂學(xué)習(xí)及課后復(fù)習(xí)融會(huì)貫通，還將教師的教與學(xué)生的學(xué)巧妙地結(jié)合。

2、布置適量、適度的預(yù)習(xí)作業(yè)，為學(xué)生進(jìn)行有效預(yù)習(xí)鋪設(shè)階梯

有了預(yù)習(xí)文本，就不加引導(dǎo)放手讓學(xué)生自由預(yù)習(xí)，對(duì)大部分學(xué)生來(lái)說(shuō)效果不理想。有的學(xué)生把課本和“講學(xué)稿”同時(shí)打開(kāi)，看了講學(xué)稿上的要求后直接到課本上去找答案，找一句抄一句，內(nèi)容寫(xiě)得很多很滿，可實(shí)際上這部分內(nèi)容沒(méi)經(jīng)過(guò)思考，沒(méi)有達(dá)到有效預(yù)習(xí)的目的。而且長(zhǎng)此以往，學(xué)生只會(huì)依據(jù)老師給的文本進(jìn)行預(yù)習(xí)，當(dāng)“無(wú)本可依”時(shí)，就不會(huì)預(yù)習(xí)了。

（1）針對(duì)不同的學(xué)習(xí)模塊，引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行不同的預(yù)習(xí)

很多老師認(rèn)為，化學(xué)是一門以實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)的學(xué)科，實(shí)驗(yàn)還沒(méi)做，學(xué)生怎么會(huì)預(yù)習(xí)呢？經(jīng)過(guò)摸索，我們發(fā)現(xiàn)，針對(duì)不同模塊的內(nèi)容，布置不同預(yù)習(xí)作業(yè)，同樣可以讓預(yù)習(xí)進(jìn)行的很有效。

（2）針對(duì)不同的學(xué)習(xí)階段，引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行有效預(yù)習(xí)

初中化學(xué)只開(kāi)一年，在這一年中，學(xué)生的學(xué)習(xí)能力有很大的變化。在布置預(yù)習(xí)作業(yè)時(shí)，應(yīng)考慮學(xué)生的實(shí)際能力，不同的階段，采用不同的布置，甚至不同學(xué)習(xí)能力的學(xué)生，在布置預(yù)習(xí)作業(yè)時(shí)都要有所區(qū)別。

第3篇：學(xué)習(xí)周計(jì)劃范文

關(guān)鍵詞：益氣活血藥；毛細(xì)血管密度；周細(xì)胞計(jì)數(shù)；心肌梗死；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.07.015

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2013）07-0038-05

Change of Capillary Pericapillary Cells in Rats with Myocardial Infarction and Effect of Supplementing Qi and Activating Blood Circulation Herbs HUANG Kun， YANG Dan-dan， GUO Shu-wen， SUN Qing， ZHANG Lu， QI Xin， WAN Ting， ZHENG Cheng-long （Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029 ， China）

Abstract：Objective To observe the change of capillary pericapillary cells in rats with myocardial infarction and the influence of supplementing qi and activating blood circulation herbs， and explore its mechanism of improving myocardial perfusion. Methods The rat model was established by ligaturing the left anterior descending coronary artery. On the base of ECG evaluation， successfully modeled rats were randomly divided into the model group， group treated with supplementing qi and activating blood circulation Chinese medicine （activating blood and supplementing qi group）， group treated with Perindopril （Perindopril group）， group treated with Tongxinluo Capsules （Tongxinluo group）. The sham-operation group was taken as the control. There were totally 5 groups. The model group and the sham-operation group were treated with normal saline. The changes of myocardial capillary density （MCD） and number of pericapillary cells on the 7th， 28th day after medicinal administration were observed. Results On the 7th and 28th day， the MCD decreased significantly and the number of capillary pericapillary cells increased significantly in the model group compared with the sham-operation group （P

Key words：supplementing qi and activating blood circulation herbs；myocardial capillary density；number of pericapillary cells；myocardial infarction；rats

研究顯示，心肌梗死患者雖然經(jīng)過(guò)搭橋或支架置入術(shù)后使梗死相關(guān)冠脈再通，或經(jīng)冠脈造影證實(shí)已達(dá)TMI3級(jí)血流的梗

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81173142）

通訊作者：郭書(shū)文，E-mail：

死相關(guān)血管，有超過(guò)25%的患者心肌組織水平的血流灌注并未恢復(fù)[1]。因此，減少缺血心肌再灌注損傷、保持心肌微血管的完整性、改善缺血心肌血供狀態(tài)、恢復(fù)心肌細(xì)胞功能，是目前研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。

前期的系列研究結(jié)果顯示，益氣活血方能明顯促進(jìn)大鼠缺血心肌微血管生成而改善心肌缺血，并能抑制心肌細(xì)胞凋亡，對(duì)相關(guān)蛋白及細(xì)胞因子有顯著調(diào)節(jié)作用[2-4]。本研究采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的方法建立大鼠急性心肌梗死后心衰模型，利用免疫組織化學(xué)方法觀察模型大鼠心肌毛細(xì)血管周細(xì)胞的變化，以及益氣活血中藥對(duì)其的影響，進(jìn)一步探討益氣活血中藥改善心肌血流灌注的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量（200±20）g，清潔級(jí)，8周齡，中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所提供，許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001。

1.2 藥物

益氣活血藥由黃芪、人參、當(dāng)歸、川芎、三七粉等組成。根據(jù)前期研究結(jié)果[5-6]選擇益氣活血藥（2∶1）的劑量組合[5-6]。依口服劑工藝制備，按處方比例稱取中藥材，加9倍量水，煎煮2次，每次2.5 h，共5 h，水煎液過(guò)濾，濃縮，加乙醇調(diào)含醇量至50%，過(guò)濾，回收乙醇，過(guò)濾，調(diào)整濃度為相當(dāng)原藥材2 g/mL，北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠提供。

對(duì)照藥物選用通心絡(luò)膠囊，石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)110723-120116；培哚普利片，施維雅（天津）制藥有限公司，批號(hào)P2009971052951。

1.3 試劑與儀器

BA3414 兔抗鼠CD34抗體（武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品），BM0002小鼠抗α-SMA抗體（武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品），血清內(nèi)皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO），南京建成生物工程公司提供。RSP1002型小動(dòng)物呼吸機(jī)（Kent Scientific Corporation）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模

采用左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎方法[7]。用1%戊巴比妥鈉腹腔注射（40 mg/kg）麻醉后，背位固定，行氣管插管，連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，在左側(cè)第3、4肋間切開(kāi)皮膚，鈍性分離肌層，打開(kāi)胸腔，用開(kāi)胸器推開(kāi)胸腺擴(kuò)大手術(shù)視野，充分暴露心臟，用帶線縫合針在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間于左心耳下約2 mm處，無(wú)張力的狀態(tài)下將左前降支連同少量的心肌組織一起結(jié)扎，然后迅速將心臟復(fù)位，關(guān)閉胸腔。全部手術(shù)過(guò)程在30 min內(nèi)完成，嚴(yán)格無(wú)菌操作。術(shù)后連續(xù)3 d肌肉注射青霉素預(yù)防感染。以結(jié)扎部位以下心肌變灰白、搏動(dòng)減弱、心電圖肢體導(dǎo)聯(lián)出現(xiàn)ST段弓背向上明顯抬高為造模成功的標(biāo)志。假手術(shù)組手術(shù)過(guò)程相同，僅繞過(guò)左冠狀動(dòng)脈，打松結(jié)。

2.2 分組與給藥

將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組、中藥組、培哚普利組、通心絡(luò)組。

各組于造模的第1日開(kāi)始分別灌胃相應(yīng)藥物，每日1次。通心絡(luò)組每日給予通心絡(luò)膠囊30 mg/kg體質(zhì)量，培哚普利組每日給予培哚普利片0.72 mg/kg體質(zhì)量，益氣活血組每日給予益氣活血中藥21 g/kg體質(zhì)量[5-6]。各干預(yù)藥物均溶于無(wú)菌蒸餾水中，在保證藥物劑量的前提下，調(diào)整濃度使每只動(dòng)物給藥容積均為10 mL/（kg?d）。假手術(shù)組和模型組每日以相同容積無(wú)菌蒸餾水灌胃。連續(xù)灌胃28 d。

2.3 標(biāo)本采集

稱取大鼠體質(zhì)量，用1%戊巴比妥鈉麻醉，剪開(kāi)腹腔，從腹主動(dòng)脈取血，分離出血清待測(cè)。然后剪斷肋骨和胸肌，暴露胸腔取出心臟，用生理鹽水洗去血污，剔除血管、脂肪等非心肌組織，從左心室最大橫徑處切開(kāi)，將切好的下半部分心臟放入預(yù)先準(zhǔn)備的4%多聚甲醛液中固定備用，進(jìn)行常規(guī)組織學(xué)方法處理，制作石蠟切片。據(jù)各組大鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的成活數(shù)量分別觀察第7、28日2個(gè)時(shí)間點(diǎn)指標(biāo)的變化情況。

2.4 心肌病理形態(tài)學(xué)觀察

將心肌組織用不同濃度酒精梯度脫水，二甲苯透明，浸蠟、包埋、切片，脫臘，二甲苯透明，HE常規(guī)染色，梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹(shù)膠封固，光學(xué)顯微鏡觀察。

2.5 心肌毛細(xì)血管密度

石蠟切片脫蠟至水；3%過(guò)氧化氫室溫孵育8 min，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性；蒸餾水沖洗3次（每次2 min），電爐加熱沸騰后斷電，間隔7 min，反復(fù)2次，冷卻后PBS（pH 7.2～7.6）洗滌2次，滴加5%牛血清白蛋白封閉液，室溫20 min，甩去多余液體，滴加CD34一抗（濃度為1∶100），4 ℃過(guò)夜，第2日早晨滴加生物素山羊抗小鼠IgG，室溫20 min，PBS洗3次（每次2 min），滴加SABC，室溫20 min，PBS洗4次（每次5 min），DAB顯色，取1 mL蒸餾水，A、B、C試劑各加1滴，混勻后加至切片，室溫顯色，鏡下控制時(shí)間，蒸餾水沖洗，蘇木素輕度復(fù)染，1～2 s即可，梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。

2.6 免疫組化染色法檢測(cè)周細(xì)胞

石蠟包埋，切片（厚度4 ?m，每只鼠各取3張切片），脫蠟，高溫高壓抗原修復(fù)，噴氣后計(jì)時(shí)2 min，自然冷卻，水洗。4 ℃下于1∶300 α-SMA單克隆抗體孵育24 h，每張切片滴加50 ?L EnVisionTM試劑，室溫下孵育30 min。滴加新鮮配制的顯色劑（DAB），蘇木素復(fù)染。顯微鏡下觀察，胞漿顯棕黃色者為陽(yáng)性細(xì)胞。按下法計(jì)數(shù)：先在100×視野下隨機(jī)選擇血管密度高的5個(gè)區(qū)和血管密度低的5個(gè)區(qū)作為計(jì)數(shù)部位，后在400×視野下計(jì)數(shù)微血管旁胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒的周細(xì)胞數(shù)，每只大鼠計(jì)數(shù)20個(gè)視野，最后以平均每個(gè)視野（400×）的周細(xì)胞數(shù)表示。小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞亦為α-SMA陽(yáng)性表達(dá)，根據(jù)血管壁厚度及結(jié)構(gòu)可與周細(xì)胞相區(qū)別，此類陽(yáng)性細(xì)胞不在計(jì)數(shù)范圍內(nèi)。

2.7 血清內(nèi)皮素-1、一氧化氮測(cè)定

采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定各組大鼠血清ET-1、NO的變化，具體方法嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明操作。根據(jù)各組大鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的成活數(shù)量分別觀察第7、28日2個(gè)時(shí)間點(diǎn)指標(biāo)的變化情況。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。一般資料采用描述性分析，計(jì)量資料以―x±s表示，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)及百分?jǐn)?shù)描述；多個(gè)樣本計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料符合正態(tài)性分布采用t檢驗(yàn)，如不符合正態(tài)性分布采用非參數(shù)檢驗(yàn)，比較各項(xiàng)指標(biāo)在治療前后之間的差異，多組間差異性統(tǒng)計(jì)采用方差分析，若方差不齊，則用Games-Howell分析，雙側(cè)檢驗(yàn)。P

4 結(jié)果

4.1 模型建立情況

采用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法致大鼠急性心肌梗死后，肢導(dǎo)Ⅱ?qū)?lián)心電圖ST段呈弓背向上抬高，缺血心肌很快變蒼白色。共手術(shù)100只，造模成功81只，死亡19只，其中手術(shù)中死亡8只，急性心肌梗死造模成功后24 h內(nèi)死亡3只，給予藥物治療后死亡3只，注射麻藥后行心臟超聲檢查后死亡5只，死亡原因?yàn)楹粑Ｖ?、室顫和大出血，造模成功?1.0%。第7日觀察大鼠42只，第28日觀察大鼠39只。

4.2 各組大鼠心肌形態(tài)學(xué)觀察

第7日：假手術(shù)組大鼠心外膜未見(jiàn)纖維素滲出及未見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組心肌梗死區(qū)炎癥反應(yīng)明顯，有泡沫狀組織細(xì)胞聚集，大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌纖維斷裂、排列紊亂，壞死的心肌組織由新生的肉芽組織取代；梗死區(qū)邊緣有充血、出血及炎細(xì)胞帶，心外膜有炎性及纖維素性滲出物。培哚普利組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小。通心絡(luò)組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，較培哚普利組病變范圍小。益氣活血組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，較培哚普利組及通心絡(luò)組病變范圍較小。見(jiàn)圖1。

第28日：假手術(shù)組大鼠心外膜未見(jiàn)纖維素滲出及未見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組大鼠心肌梗死區(qū)由纖維母細(xì)胞、纖維細(xì)胞及致密的膠原纖維束組成，呈束狀或平行排列，膠原纖維束之間有極少殘存的心肌組織，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，地圖狀瘢痕組織形成；心室腔擴(kuò)大，室壁變薄。培哚普利組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區(qū)有島狀或細(xì)帶狀的心肌組織。通心絡(luò)組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區(qū)有島狀或細(xì)帶狀的心肌組織，但較培哚普利組病變范圍大。益氣活血組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區(qū)有島狀或細(xì)帶狀的心肌組織，但較培哚普利組病變范圍大。見(jiàn)圖2。

假手術(shù)組 模型組

益氣活血組 培哚普利組 通心絡(luò)組

圖1 第7日HE染色大鼠心肌病理形態(tài)（×50）

假手術(shù)組 模型組

益氣活血組 培哚普利組 通心絡(luò)組

圖2 第28日HE染色大鼠心肌病理形態(tài)（×100）

4.3 益氣活血中藥對(duì)心肌梗死大鼠血清內(nèi)皮素-1、一氧化氮水平的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清ET-1含量明顯升高，NO水平下降（P

表1 各組大鼠血清ET-1、NO水平比較（―x±s，pg/mL）

組別 術(shù)后第7日 術(shù)后第28日

只數(shù) ET1 NO 只數(shù) ET1 NO

假手術(shù)組 10 5.37±1.06 31.12±2.57 9 6.38±1.73 30.38±4.00

模型組 7 13.67±1.68## 19.41±3.24## 7 14.60±2.38## 16.23±3.05##

益氣活血組 9 8.06±1.21** 41.71±4.43** 8 8.97±1.07** 40.11±5.51**

培哚普利組 8 10.65±1.12** 33.02±2.68** 8 7.30±1.37** 45.26±6.60**

通心絡(luò)組 8 9.87±0.73** 37.76±3.34** 7 9.57±1.57** 35.06±5.20**

注：與假手術(shù)組比較，##P

4.4 益氣活血中藥對(duì)心肌梗死大鼠毛細(xì)血管密度的影響

在病理圖像分析系統(tǒng)下測(cè)定各組大鼠心肌梗死邊緣區(qū)平均毛細(xì)血管密度（MCD）。第7日：模型組較假手術(shù)組心肌梗死邊緣區(qū)MCD明顯降低（P

表2 各組大鼠心肌MCD比較（―x±s）

組別 n 第7日 第28日

假手術(shù)組 20 612.79±33.35 611.11±25.67

模型組 20 533.67±20.27## 493.27±19.38##

益氣活血組 20 1178.50±33.27** 1051.30±30.12**

培哚普利組 20 1010.10±33.27** 1099.30±33.98**

通心絡(luò)組 20 1094.30±33.12** 974.75±35.41**

4.5 益氣活血中藥對(duì)心肌梗死大鼠毛細(xì)血管周細(xì)胞計(jì)數(shù)影響

第7日：模型組較假手術(shù)組心肌梗死邊緣區(qū)周細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增加，益氣活血中藥組、培哚普利組、通心絡(luò)組與模型組比較，梗死邊緣區(qū)的周細(xì)胞計(jì)數(shù)減少（P

表3 各組大鼠心肌周細(xì)胞計(jì)數(shù)比較（―x±s，個(gè)）

組別 n 第7日 第28日

假手術(shù)組 20 0.8±0.84 1.2±0.84

模型組 20 8.2±1.30## 14.0±1.58##

益氣活血組 20 4.2±0.84* 4.4±1.14**

培哚普利組 20 5.8±0.84** 3.6±1.14**

通心絡(luò)組 20 4.4±0.55** 5.8±1.30**

注：與益氣活血組比較，P

P

5 討論

臨床研究表明，急性心肌梗死患者多存在“氣虛血瘀”的中醫(yī)病理[8]。實(shí)驗(yàn)的中藥組方中，生曬參、黃芪大補(bǔ)元?dú)?、廣益五臟，針對(duì)氣虛的主要病機(jī)；三七、川芎、當(dāng)歸為臣，活血通絡(luò)、止血消瘀。諸藥相合，氣行則血行，血行則氣實(shí)，諸藥合用，標(biāo)本兼治，相得益彰，共奏益氣活血、化瘀通絡(luò)之功效。

冠脈微血管結(jié)構(gòu)完整性與功能正常，是確保心肌收縮力儲(chǔ)備和局部功能恢復(fù)的先決條件，是心肌存活的必備條件，當(dāng)發(fā)生微小動(dòng)脈和阻力血管的功能及結(jié)構(gòu)變化時(shí)，冠脈血流速率和血流儲(chǔ)備的變化可引起心肌缺血。低灌注梗死區(qū)和正常心肌之間的慢復(fù)流區(qū)域毛細(xì)血管內(nèi)皮腫脹、突出甚至脫落，受周邊的壞死組織壓迫，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)完整性受損，心肌毛細(xì)血管周細(xì)胞功能失調(diào)。血管壁在結(jié)構(gòu)上由血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管周圍細(xì)胞組成，它們分別構(gòu)成血管的內(nèi)外壁。周細(xì)胞又叫壁細(xì)胞，可以分化為巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等，具有收縮能力，從而調(diào)節(jié)微循環(huán)的灌流量和通透性[9-10]。

有研究顯示，早期心肌缺血缺氧性壞死中周細(xì)胞數(shù)量在4 h后明顯增多，12 h后開(kāi)始下降，48 h后顯著低于正常水平，推測(cè)周細(xì)胞作為心肌中的間質(zhì)細(xì)胞可能是心肌纖維化發(fā)生發(fā)展中的主要效應(yīng)細(xì)胞[11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用益氣活血中藥后，毛細(xì)血管周細(xì)胞的計(jì)數(shù)減少，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，益氣活血組較模型組心肌梗死邊緣區(qū)域MCD明顯增加，可見(jiàn)周細(xì)胞對(duì)毛細(xì)血管生長(zhǎng)起到調(diào)控的作用。研究發(fā)現(xiàn)新生血管的生長(zhǎng)和維持主要由周細(xì)胞的募集和分化所推動(dòng)[12-13]。周細(xì)胞募集并伴隨發(fā)生基底膜重塑[14-15]。可見(jiàn)，周細(xì)胞的募集對(duì)血管新生是必不可少的。

此外，益氣活血中藥可提升內(nèi)皮分泌NO水平，并相應(yīng)降低ET-1水平。NO和ET-1是由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的一對(duì)作用相反的血管活性分子，NO的含量與生物活性的變化能夠反映內(nèi)皮功能的狀態(tài)。與益氣活血組模型組比較，ET-1下降，NO升高，說(shuō)明益氣活血中藥具有保護(hù)血管內(nèi)皮功能的作用。

總之，益氣活血中藥可以通過(guò)降低心肌梗死大鼠毛細(xì)血管周細(xì)胞計(jì)數(shù)，維持血管的相對(duì)完整性，改善局部微循環(huán)的血流，減少梗死面積，并促進(jìn)血管新生，調(diào)節(jié)NO/ET-1的平衡，從而達(dá)到改善局部心肌血供的目的。

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第4篇：學(xué)習(xí)周計(jì)劃范文

關(guān)鍵詞：水化學(xué)特征 成因 荊州市

中圖分類號(hào)：P641 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-3973（2012）011-126-02

1 研究區(qū)概況

荊州市位于湖北省中南部，江漢平原中西部，地形以崗坡平原、低平原、低洼平原由西向東分布，總體西北高，東南低。該市境內(nèi)水系發(fā)達(dá)（長(zhǎng)江及其支流松滋河、虎渡河、藕池河、調(diào)弦河等），湖泊眾多（千畝以上湖泊30余個(gè)，其中有湖北省第一大湖洪湖及第三大湖長(zhǎng)湖）。其中，荊州市城區(qū)面積100平方千米，常住人口115萬(wàn)（2011年），南依長(zhǎng)江，北臨廟湖、海子湖、長(zhǎng)湖，屬亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)，光能充足、熱量豐富、無(wú)霜期長(zhǎng)，多數(shù)年份降雨量在1100-1300毫米之間。城區(qū)地下水埋深0.5-10米，含水巖層可劃分為淺層孔隙潛水含水巖組、上部孔隙承壓水含水巖組和下部裂隙孔隙承壓水含水巖組，含水巖層巖性以粉土、粉質(zhì)粘土和粘土、粉質(zhì)粘土為主，長(zhǎng)江沿線以粉質(zhì)粘土、粉土、粉砂為主，局部地段有薄層砂礫石層，河湖混合區(qū)多為粉土、粉質(zhì)粘土、粉砂、淤泥質(zhì)粉質(zhì)粘土與淤泥質(zhì)粘土互層。

近年來(lái)，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人口的增加，地下水污染和地下水位下降等一系列問(wèn)題凸現(xiàn)。從城區(qū)出發(fā)重點(diǎn)分析地下水成分及其成因，有利于全市地下水資源的合理開(kāi)發(fā)和地下水污染的防治，為該市實(shí)施“資源節(jié)約型、環(huán)境友好型社會(huì)”戰(zhàn)略打下理論研究基礎(chǔ)。

2 采樣與檢測(cè)分析

2.1 采樣

采樣按照“兼顧自然狀態(tài)與人為影響”的原則，有選擇性地從城區(qū)12處民用井和3處常年觀測(cè)井共采集樣品68組，采集地點(diǎn)如圖1。

2.2 指標(biāo)

按照《GB5749-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)》，分析選取了pH、硬度、總?cè)芙夤腆w（TDS）、氨氮、K+、Na+、Ca2+、Mg2+、CO32-、HCO3-、SO42-、Cl-、Fe、Mn等14項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行分析。

2.3 檢測(cè)分析方法及結(jié)果分析

區(qū)內(nèi)平均硬度為360.87mg/L，介于150-450mg/L的硬水占73.2%，高于450mg/L的高硬水占8.8%。受大氣降水補(bǔ)給、長(zhǎng)江徑流補(bǔ)給和湖泊水地下徑流補(bǔ)給的多重影響，地下水含水巖土中的Ca2+、Mg2+被大量交換進(jìn)入地下水中，使地下水偏硬并有增高趨勢(shì)。

由于Ca2+含量較高，加之區(qū)屬弱酸性土壤環(huán)境，地下水中F-在地下水中難以富集，含量極少，故在后續(xù)水樣檢測(cè)中排除了F-的分析。

4 成因分析

4.1 離子來(lái)源

4.2 補(bǔ)排條件的影響

4.3 污染來(lái)源

荊州市城區(qū)地下水埋深淺，地下水易利用也易污染。城區(qū)人口集中于長(zhǎng)江沿線，大量生活污水通過(guò)各種途徑進(jìn)入地下水，使得氨氮含量超標(biāo)，污染點(diǎn)呈密集型分布。北部農(nóng)業(yè)區(qū)農(nóng)作物被使用了大量的有機(jī)磷農(nóng)藥、有機(jī)氯農(nóng)藥等，凡未被植物吸收利用的農(nóng)藥殘留在土壤中積累或轉(zhuǎn)入地下水引起水體污染。

5 結(jié)論

（1）荊州城區(qū)地下水屬弱酸-弱堿性水，TDS普遍小于1g/L，水質(zhì)屬于淡水。地下水污染主要是生活污水造成的氨氮含量超標(biāo)。

（2）水化學(xué)類型為單一的HCO3-Ca型和HCO3-Ca·Mg型。其主要離子來(lái)源于碳酸鹽巖的風(fēng)化溶解，受地下水徑流條件的影響，陽(yáng)離子中Ca2+、陰離子中HCO3-占主導(dǎo)地位。

（3）地下水系統(tǒng)脆弱，污染程度不容樂(lè)觀，亟待治理。

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第5篇：學(xué)習(xí)周計(jì)劃范文

【關(guān)鍵詞】 高血壓 趨化因子 單核細(xì)胞 基因表達(dá) 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定

原發(fā)性高血壓（essential hypertension，EH）是常見(jiàn)的心血管疾病，也是導(dǎo)致心腦血管疾病的重要危險(xiǎn)因素。近年來(lái)，越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為EH是一種與遺傳、環(huán)境、代謝極為相關(guān)的復(fù)雜疾病[1～3]，當(dāng)EH與其他相關(guān)危險(xiǎn)因素并存時(shí)，單純的血壓控制只能使不到60%的患者獲益，而危險(xiǎn)因素的干預(yù)才能獲得更大的益處。因此，積極探討EH的發(fā)病機(jī)制及其影響因素，對(duì)更有效的控制EH，減輕其危害已成為醫(yī)務(wù)工作者的共識(shí)。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，炎癥可能在EH的發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用[4]，2007年2月～12月實(shí)驗(yàn)檢測(cè)EH患者外周血單核細(xì)胞趨化因子1（monocyte chemotactic protein1，MCP1）蛋白水平及單個(gè)核細(xì)胞MCP1 mRNA的表達(dá)，探討外周血MCP1的變化與EH的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象及分組

按《中國(guó)高血壓防治指南（2005年修訂版）》[5]制定的標(biāo)準(zhǔn)，選取心血管科住院和門診新診斷或未經(jīng)正規(guī)降壓治療的EH患者62例，同時(shí)選取血壓正常的30例健康體檢者作為對(duì)照組。排除繼發(fā)性高血壓、血栓出血性疾病、糖尿病、高脂血癥、感染、嚴(yán)重肝腎疾病、自身免疫性疾病及腫瘤性疾病，排除近期有手術(shù)或外傷史等影響MCP1的因素。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器 人淋巴細(xì)胞分離液（上海捷瑞），Trizol試劑（美國(guó)Invitrogen），焦炭酸二乙酯（瑞興），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Promega），PCR試劑盒（Promega），100 bp DNA Ladder Marker、D2000 DNA Marker（天根生化），人MCP1 ELISA 試劑盒（美國(guó)R＆D公司）；ULT13863三洋-80 ℃低溫冰箱(日本)，5745臺(tái)式冷凍離心機(jī)(德國(guó))，Eppendorff centrifuge 5810R 高速離心機(jī)，Amersham核酸蛋白分析儀，PCR儀（PE geneAmp PCR System 2400）（Perkin Elmer），DNA成像分析儀（Gel Doc EQ，BioRad），酶標(biāo)儀（ELx800，BioTek公司）。MCP1引物設(shè)計(jì)由上海生工合成，上游引物5' AGGAAGATCTCAGTGCAGAGG 3'，下游引物5' – AGTCTTCGGAGTTTGGGTTTG 3'；βaction：上游引物5'AGCGAGCATCCCCCAAAGTT 3'，下游引物5'GGGCACGAAGGCTCATCATT 3'。

1.2.2 標(biāo)本采集 受檢者空腹12 h，于次日清晨6∶00～7∶00采集肘正中靜脈血8 ml，其中4 ml置普通生化管中，室溫靜置2 h，自然凝固后予離心10 min，1 000 r/min收集上清液置于-80℃冰箱保存待測(cè)；另4 ml置于EDTA抗凝試管中搖勻后即刻置40 ℃冰箱冷存，于6 h內(nèi)提取RNA用。

1.2.3 外周血MCP1蛋白含量測(cè)定 用保存待測(cè)的血清，依照MCP1 ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)的步驟操作。用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)下各孔吸光度，根據(jù)吸光度值計(jì)算標(biāo)本中MCP1的濃度。

1.2.4 人血單個(gè)核細(xì)胞中RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR） 淋巴細(xì)胞分離液提取外周血中單個(gè)核細(xì)胞后，按照說(shuō)明書(shū)的步驟提取總RNA；按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟合成cDNA，并用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的片段，PCR產(chǎn)物用1.5% 瓊脂糖凝膠跑電泳，溴乙錠顯色。測(cè)定各條帶灰度值，以βactin為內(nèi)參，用MCP1與βactin的灰度比值定量MCP1。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，數(shù)據(jù)以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

EH組及對(duì)照組的一般資料見(jiàn)表1。兩組研究對(duì)象的年齡、性別、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、總膽固醇、空腹血糖和外周血白細(xì)胞比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表1 EH組及對(duì)照組的基本資料注：TC示總膽固醇，TG示甘油三酯，F(xiàn)BG示空腹血糖，LDL示低密度脂蛋白，HDL示高密度脂蛋白，WBC示白細(xì)胞。

2.2 MCP1水平及MCP1 mRNA表達(dá)

見(jiàn)表2。與對(duì)照組比較，EH組外周血MCP1蛋白水平及單個(gè)核細(xì)胞MCP1mRNA表達(dá)均顯著增高（P＜0.01)。表2 外周血MCP1水平及單個(gè)核細(xì)胞MCP1mRNA表達(dá)注：（1）與對(duì)照組比較， P＜0.01。

3 討論

EH是最常見(jiàn)的心血管疾病之一。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為，EH是多種因素引起的血液流變學(xué)異常，表現(xiàn)為心搏出量和（或）外周阻力增加，治療目標(biāo)也僅限于用藥物控制血壓。隨著對(duì)EH發(fā)病機(jī)制的深入研究，發(fā)現(xiàn)在EH發(fā)生發(fā)展的不同階段，血管炎癥是一個(gè)主要的、共同的病理特征，提示EH與炎癥關(guān)系密切[6]。

MCP1為堿性蛋白，屬于趨化因子超家族，可由炎癥介質(zhì)刺激的單核-巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞分泌。MCP1在體內(nèi)及體外均有強(qiáng)大的誘導(dǎo)單核-巨噬細(xì)胞聚集、附壁、游走的功能，是炎癥的始動(dòng)因子及標(biāo)志[7]。研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性高血壓患者外周血MCP1蛋白含量升高，認(rèn)為EH可能是一種慢性炎癥過(guò)程[8]。本研究顯示，EH患者外周血MCP1蛋白水平顯著升高，提示MCP1可能參與了EH的病理生理過(guò)程。因此，積極探索控制炎癥的方法可能是高血壓乃至冠心病具有前景的治療策略之一。

EH患者外周血MCP1升高的機(jī)制尚不十分明了，可能來(lái)源于與內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞等上調(diào)表達(dá)MCP1 mRNA有關(guān)，但外周血MCP1蛋白的升高是否與外周血單個(gè)核細(xì)胞中MCP1 mRNA表達(dá)上調(diào)有關(guān)尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究顯示，與對(duì)照組比較，單純EH組外周血單個(gè)核細(xì)胞中MCP1 mRNA表達(dá)顯著增高，提示外周血單個(gè)核細(xì)胞的MCP1 mRNA表達(dá)上調(diào)可能是導(dǎo)致EH患者外周血MCP1蛋白含量升高的一個(gè)因素，但是否與內(nèi)皮細(xì)胞等其它因素有關(guān)，需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。由于MCP1蛋白可能進(jìn)一步激活CCR2趨化因子受體，介導(dǎo)趨化活性，使單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生移行，黏附于血管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮[9]，使其產(chǎn)生更多的炎癥因子，加速血管重構(gòu)，使血管壁順應(yīng)性下降，從而使血壓升高。因此，針對(duì)炎癥的治療，或許對(duì)控制血壓有一定意義。

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第6篇：學(xué)習(xí)周計(jì)劃范文

[關(guān)鍵詞]原因不明反復(fù)流產(chǎn)；T淋巴細(xì)胞亞群；自然殺傷細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)

[中圖分類號(hào)] R714.21 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）04（a）-0087-03

Molecular Genetics Laboratory，Liaoning Province Research Institute of Family Planning，Shenyang 110031，China

[Abstract]Objective To explore the changes of T lymphocytes sub-types and NK cells in patients with unexplained recurrent abortion.Methods The patients were collected in the Liaoning Province Research Institute of Family Planning from March 2014 to March 2016. The 50 patients with URSA were selected as the observation group and 30 patients with voluntary abortion were selected as the control group.Flow cytometry was used to measure the number of T lymphocytes sub-types and NK cells in the two groups.Results The percentages of CD4+ and ratio of CD4+/CD8+ was significantly increased in peripheral blood of unexplained recurrent abortion patients （P0.05）.The level of NK cell was also significantly increased in peripheral blood of unexplained recurrent patients（P

[Key words]Unexplained recurrent abortion；T lymphocytes sub-types；NK cells；Flow cytometry

反復(fù)自然流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指連續(xù)發(fā)生了2次或2次以上的自然流產(chǎn)，是一種常見(jiàn)的妊娠并發(fā)癥[1]。其主要原因有染色體異常、感染、內(nèi)分泌失調(diào)和凝血異常，而排除這些因素后，其中有40%～80%的患者原因不明，稱為不明原因反復(fù)自然流產(chǎn)（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）[2]。正常妊娠需要母體建立起一個(gè)對(duì)胎兒局部免疫耐受的環(huán)境，如果免疫微環(huán)境失調(diào)則會(huì)導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生[3]。URSA是育齡婦女常見(jiàn)的妊娠并發(fā)癥，已經(jīng)成為困擾育齡婦女和臨床工作者的一大難題，其發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚。免疫因素在維持正常妊娠起著關(guān)鍵作用，T淋巴細(xì)胞亞群及自然殺傷細(xì)胞（natural killer，NK）在妊娠免疫中越來(lái)越受到重視，本研究通過(guò)比較URSA患者與健康早孕婦女外周血中T淋巴胞亞群和NK細(xì)胞比率，探討URSA患者外周血中免疫細(xì)胞的變化，同時(shí)為URSA患者治療提供理論依據(jù)，避免流產(chǎn)的發(fā)生。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年3月～2016年3月于遼寧省計(jì)劃生育科研院附屬醫(yī)院門診診斷為URSA患者50例，同期健康早期妊娠并且自愿要求人工流產(chǎn)的患者30例。觀察組50例URSA患者平均年齡（30.12±6.73）歲，平均孕齡（8.01±3.13）周，平均月經(jīng)周期（28.32±3.22）d，平均體重指數(shù)（23.27±3.15）kg/m2。對(duì)照組30例早孕婦女中，平均年齡（29.42±5.58）歲，平均孕齡（8.32±3.45）周，平均月經(jīng)周期（29.01±4.73）d，平均體重指數(shù)（23.24±3.14）kg/m2。兩組患者的年齡、孕齡、月經(jīng)周期和體重指數(shù)等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有患者在組織收集前均簽署知情同意書(shū)并經(jīng)遼寧省計(jì)劃生育科研院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)通過(guò)。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合URSA診斷標(biāo)準(zhǔn)：有2次或2次以上的自然流產(chǎn)病史，夫婦雙方染色體正常；②內(nèi)分泌功能正常；③母兒血型不和，抗心磷抗體、抗核抗體均為陰性；④丈夫男科檢查均正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并生殖道感染、畸形。對(duì)照組排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有流產(chǎn)史；②合并內(nèi)分泌、染色體和自身免疫抗體異常；③合并生殖道感染、畸形。

1.2方法

淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)1.2號(hào)管均加入女方全血50 μl，然后于1號(hào)管中加入10 μl FITC-CD3/PE-CD8/PerCP-CD45/APC-CD4混合單克隆熒光抗體（BD公司；批號(hào)：340503），2號(hào)管加入10 μl FITC-CD3/PE-CD16+ CD56/PerCP-CD45/APC-CD19混合單克隆熒光抗體（BD公司；批號(hào)：340503），振蕩混勻，室溫避光20 min；加入紅細(xì)胞裂解液（BD公司；批號(hào)：5154719）1 ml，震蕩混勻，室溫避光10 min；磷酸鹽緩沖液洗1次，500 μl懸液上樣檢測(cè)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)和檢驗(yàn)分析；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P

2結(jié)果

2.1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群及CD4+/CD8+比率的比較

URSA患者外周血中CD4+細(xì)胞百分率和CD4+/CD8+比率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。

2.2 兩組NK細(xì)胞百分率的比較

URSA患者外周血中NK細(xì)胞的百分率為（18.09±2.32）%，明顯高于對(duì)照組的（14.36±3.21）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3討論

妊娠是一個(gè)復(fù)雜的生理過(guò)程，是一個(gè)特殊的半同種異體移植過(guò)程，主要是母體免疫耐受來(lái)維持正常妊娠過(guò)程，一但母體與胎兒的免疫平衡被破壞，會(huì)造成病理性流產(chǎn)的發(fā)生[4-5]。各種免疫的失衡均可導(dǎo)致URSA：封閉抗體的缺乏、T淋巴細(xì)胞亞群的改變、CD4+/CD8+失衡、Th1/Th2失衡、CD56+CD16+/CD56+CD16-NK細(xì)胞亞群比例失調(diào)、細(xì)胞因子、趨化因子等表達(dá)異常[6-8]。

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，URSA的患者多是免疫狀態(tài)相對(duì)異常，其中T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞越來(lái)越受到關(guān)注。胎兒對(duì)于母體而言，屬于同種異體移植物，其抗原不是存在于母體中樞免疫器官內(nèi)，妊娠免疫耐受本質(zhì)主要是外周免疫耐受。根據(jù)T淋巴細(xì)胞表面的特征性分子不同，可將成熟T細(xì)胞分為兩個(gè)亞群，即CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞。CD4+T淋巴細(xì)胞可輔助B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而產(chǎn)生抗體，CD8+T淋巴細(xì)胞抑制這一過(guò)程使CD4+T淋巴細(xì)胞的作用不至于過(guò)強(qiáng)，兩者比例的平衡是維持生理功能正常和免疫反應(yīng)正常應(yīng)答的基礎(chǔ)。URSA與母體的免疫狀態(tài)有很大的相關(guān)性，反復(fù)流產(chǎn)患者表現(xiàn)為免疫系統(tǒng)呈現(xiàn)免疫過(guò)度表達(dá)的狀態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn)，URSA患者外周中CD4+和CD4+/CD8+比率明顯高于正常早孕的婦女，這與以往的研究相符[9-10]。CD4+T淋巴細(xì)胞為輔T淋巴細(xì)胞，其比率升高，使機(jī)體免疫功能增強(qiáng)，對(duì)胚胎的免疫排斥加強(qiáng)，導(dǎo)致妊娠不能繼續(xù)[11]。正常早孕的婦女外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞明顯低于非懷孕的健康婦女，說(shuō)明CD4+T淋巴細(xì)胞在外周血中表達(dá)降低，是正常妊娠維持的一個(gè)必要條件。正常妊娠早期，CD4+/CD8+的比值降低，有利于胚胎免于遭受母體免疫系統(tǒng)的排斥。CD4+/CD8+的比值在正常情況下始終保持著動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)二者比例失調(diào)，則會(huì)引起免疫紊亂，造成流產(chǎn)的發(fā)生。在URSA患者外周中CD4+/CD8+的比值升高，提示早期流產(chǎn)患者淋巴細(xì)胞亞群失調(diào)，細(xì)胞免疫功能過(guò)度，導(dǎo)致妊娠不能繼續(xù)。當(dāng)URSA經(jīng)過(guò)主動(dòng)免疫治療后，CD4+/CD8+的比值下降，利于妊娠的維持[12]。

NK細(xì)胞存在于先天性免疫系統(tǒng)的一類淋巴細(xì)胞，主要分布于外周血中，不需要預(yù)先致敏就能殺傷靶細(xì)胞，能產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng)。NK細(xì)胞在妊娠的維持過(guò)程中具有重要作用。在胚胎植入和妊娠早期，子宮蛻膜細(xì)胞中NK細(xì)胞的比例占70%以上，主要對(duì)胎兒滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生免疫耐受作用，提供主要的免疫防御作用。子宮蛻膜中的NK細(xì)胞與胚胎滋養(yǎng)細(xì)胞直接接觸，當(dāng)其細(xì)胞活性過(guò)度表達(dá)會(huì)對(duì)胚胎的發(fā)育有害，從而引起胚胎損傷乃至流產(chǎn)的發(fā)生。目前國(guó)內(nèi)外研究認(rèn)為CD56+CD16+T細(xì)胞等NK細(xì)胞與URSA發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[13-14]，外周血高水平的NK細(xì)胞預(yù)示著染色體核型正常的妊娠可能發(fā)生生化妊娠或自然流產(chǎn)[15]。本研究發(fā)現(xiàn)URSA患者相比較正常早孕婦女的外周血中NK細(xì)胞比率明顯升高，提示NK細(xì)胞參與了URSA的形成。NK細(xì)胞可能發(fā)揮作用的機(jī)制是NK細(xì)胞的殺傷功能啟動(dòng)，釋放穿孔素及絲氨酸酯酶，導(dǎo)致胚胎的損傷，引發(fā)流產(chǎn)。另外URSA患者外周中NK細(xì)胞的增多，改變了細(xì)胞因子表達(dá)，打破了母胎界面Th1/Th2的平衡，也可以引發(fā)流產(chǎn)[16]。

綜上所述，CD4+、CD4+/CD8+以及NK細(xì)胞比率在URSA患者外周血中升高與早期自然流產(chǎn)的發(fā)生相關(guān)，免疫因素是URSA流產(chǎn)的重要原因，筆者以T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞為研究URSA疾病的切入點(diǎn)，取得一定的結(jié)果，對(duì)臨床URSA的診療具有理論意義和指導(dǎo)價(jià)值。

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第7篇：學(xué)習(xí)周計(jì)劃范文

【摘要】 目的 探討大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血后早期不同時(shí)間注射紅花注射液后，對(duì)血腫周圍細(xì)胞凋亡及細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白等指標(biāo)的影響。方法 將96只SD大鼠隨機(jī)分成紅花治療組、出血對(duì)照組、正常對(duì)照組，各組又再分成出血前24h、出血后0、6、12、24h治療組。各組均于腦出血后第72h處死，取腦，連續(xù)切片做TUNEL染色和免疫組化染色。觀察不同時(shí)間用藥對(duì)大鼠神經(jīng)功能評(píng)分、血腫周圍細(xì)胞凋亡數(shù)目及凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3和Bcl-2/Bax等指標(biāo)的影響。結(jié)果 與出血對(duì)照組相比較，各藥物治療組的神經(jīng)功能評(píng)分降低、Bcl-2/Bax蛋白比值增高、Caspase-3蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少、TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少；紅花注射液組在腦出血前24h和腦出血后0h給藥治療的Bcl-2/Bax蛋白比值低于腦出血后6、12、24h治療組、Caspase-3蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)高于腦出血后6、12、24h治療組；在大鼠腦出血后6h、12h、24h注射紅花注射液，出血灶周圍Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞逐漸增多、Bcl-2/ Bax比值逐漸降低，出血后6h給藥治療組的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)低于出血后24h治療組。結(jié)論 在不同時(shí)間給予紅花注射液治療腦出血大鼠，均能不同程度地促進(jìn)腦出血大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)，其中術(shù)后6h給藥組治療效果最好，其可能通過(guò)促進(jìn)Bcl-2蛋白的表達(dá)，抑制Bax和Caspase-3蛋白的表達(dá)，從而抑制血腫周圍的細(xì)胞凋亡。

【關(guān)鍵詞】 腦出血；細(xì)胞凋亡；紅花注射液；大鼠

The effect of Safflor injection on cell apoptosis around the hematoma in the early time after experimental intracerebral hemorrhage in rats

【Abstract】 Objective To study the effect of Safflor injection on apoptotic cell and protein about apoptotic cell in the early time after experimental intracerebral hemorrhage （ICH）in rats.Methods 96 rats were randomly pided into the remedial group with ICH and the contrast group including ICH contrast group with ICH and normal contrast group without ICH. Then each group of rats were pided into five groups which were 24 hours remedial group before ICH of rats，0，6，12 and 24 hours remedial group after ICH of rats. All rats involved in the experiment were killed on the 72nd hour following ICH. The immunohistochemical method was performed in rat brain by using antibody caspase-3 or antibody bcl-2，bax. TUNEL method was used to detect apoptosis around the hematoma.Results Compared with ICH model group，Safflor injection could significantly alleviate neurological system damage symptoms，heighten the ratio of bcl-2/bax，and reduce the number of caspase-3 positive cell and the number of TUNEL positive cell around hematoma in ICH rats. The number of caspase-3 positive cell of Safflor group treated before ICH 24 hours ahead，after ICH 0 hour were more than that of Safflor group treated after ICH 6，12，24 hours. The bcl-2/bax of Safflor group treated before ICH 24 hours ahead，after ICH 0 hour were lower than that of Safflor group treated after ICH 6，12 or 24 hours. When the treated group were injected Safflor after ICH 6，12，24 hours，The number of caspase-3 positive cell around hematoma was gradually increased and the number of bcl-2/bax positive cell was gradually degraded and the number of TUNEL positive cell of Safflor group treated after ICH 6 hours were less than that of Safflor group treated after ICH 24 hours. Conclusions When Safflor injection is used earlier to cure ICH，it can decrease the rate of cell apoptosis and capase-3 protein expression，heighten the ratio of bcl-2/bax around the hematoma，especially in the Safflor group treated after ICH 6 hours.

【Key words】 intracerebral hemorrhage; apoptosis; Safflor injection;rat

腦出血是一種發(fā)病率、病死率和致殘率均較高的臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病，迄今為止對(duì)腦出血的治療雖較以往有很大進(jìn)步，但腦出血仍具有相當(dāng)高的死亡率。近年來(lái)，部分作者應(yīng)用活血化瘀法治療急性期腦出血取得了一定的療效，但在治療的時(shí)機(jī)上，特別在早期使用活血化瘀藥治療腦出血患者尚存在較大的爭(zhēng)議。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 SD大鼠雌雄不限（126只），體重230～280g，由寧夏醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)（SCXK〈寧〉20050001）。

1.1.2 主要試劑 紅花注射液（雅安三九藥業(yè)有限公司，批號(hào) 070304），Ⅶ型膠原酶（sigma公司），TUNEL 檢測(cè)試劑盒（Roche公司），Caspase-3多克隆抗體（武漢博士德公司），Bcl-2、Bax單克隆抗體（Sata Cruz公司），DAB染色試劑盒（北京中衫生物公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 將大鼠（雌雄對(duì)半）隨機(jī)分成紅花治療組、出血對(duì)照組、正常對(duì)照組，各組又再分成出血前24h、出血后0、6、12、24h治療組，各紅花治療組每日腹腔注射紅花注射液1次，劑量為1.5ml/（kg·d），正常對(duì)照組和出血對(duì)照組組每日腹腔注射等量生理鹽水1次。每日進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分1次，各組大鼠均于腦出血后第72h處死。

1.2.2 腦出血大鼠模型制作 根據(jù)腦立體定位圖譜于大鼠前囟后0.2mm，中線右側(cè)旁開(kāi)3.0mm鉆孔，暴露硬腦膜。微量進(jìn)樣器吸取0.5u/μlⅦ型膠原酶和6.25u/μl肝素的混合液0.26μl，以硬腦膜平面為零點(diǎn)，緩慢進(jìn)針，深度為5.0mm，緩慢注入藥物，注射完畢后留針10 min，緩慢退出微量進(jìn)樣器，清潔傷口，縫合頭皮，術(shù)后保溫。

1.2.3 免疫組織化學(xué)染色 石蠟切片，采用SP法，DAB顯色，光學(xué)顯微鏡下觀察。于 200 倍光鏡下在血腫周圍按順時(shí)針?lè)较蛟?、4、6、8、10、12六個(gè)時(shí)鐘點(diǎn)中選擇5個(gè)不重復(fù)視野區(qū)，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算平均值。

1.2.4 細(xì)胞凋亡的檢測(cè) 取與免疫組化染色相鄰切片，用末端脫氧核糖核苷轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的DUTP缺口末端標(biāo)記法（TUNEL），DAB顯色。于 200 倍光鏡下在血腫周圍按順時(shí)針?lè)较蛟?、4、6、8、10、12六個(gè)時(shí)鐘點(diǎn)中選擇5個(gè)不重復(fù)視野區(qū)，計(jì)數(shù)TUNEL反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算平均值。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 結(jié)果用x±s表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.5軟件包進(jìn)行t檢驗(yàn)、方差分析，顯著性水準(zhǔn)均為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分 麻醉蘇醒后，模型組動(dòng)物均出現(xiàn)不同程度神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，根據(jù)Berderson評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)術(shù)后各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，各組評(píng)分情況見(jiàn)表1。表1 腦出血后各時(shí)相點(diǎn)神經(jīng)功能評(píng)分注：notes:P

2.2 免疫組化 Caspase-3蛋白表達(dá)以細(xì)胞漿或細(xì)胞核中呈棕黃色著色的顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，Bcl-2和Bax 蛋白表達(dá)均以細(xì)胞漿呈棕黃色著色為陽(yáng)性細(xì)胞，以神經(jīng)元細(xì)胞表達(dá)為主，并且主要集中在血腫周圍腦組織。正常對(duì)照組也可見(jiàn)到較少的Caspase-3蛋白、Bcl-2 蛋白和Bax 蛋白陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，但Bcl-2/Bax的比值始終接近1。

2.3 TUNEL染色 根據(jù)免疫組化的結(jié)果，選取差異顯著的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)一步做TUNEL染色，TUNEL 陽(yáng)性細(xì)胞以細(xì)胞膜周邊染色質(zhì)堆積染色呈棕黃色或細(xì)胞核著色呈棕黃色評(píng)判為TUNEL 陽(yáng)性細(xì)胞。在血腫周邊的外圍，以神經(jīng)元為主，少部分是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。ICH各組、各時(shí)間點(diǎn)凋亡細(xì)胞表達(dá)情況見(jiàn)表2、表3。表2 各藥物在不同時(shí)間點(diǎn)給藥時(shí)血腫周圍Caspase-3、Bcl-2、Bax陽(yáng)性細(xì)胞記數(shù)注:VS ICH group，P

3 討論

腦出血是一種嚴(yán)重危害人類生命健康的臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在我國(guó)腦出血占急性腦血管?。X卒中）的40%～50%，是腦卒中死亡率最高的臨床類型，腦出血后30天內(nèi)病死率接近50%，許多存活者遺留明顯的神經(jīng)功能缺失。在治療上目前臨床上除運(yùn)用傳統(tǒng)脫水藥、手術(shù)清除血腫外，治療手段較少，無(wú)其他特效的方法［1］，且相當(dāng)部分腦出血患者雖早期行血腫清除，但預(yù)后仍然不佳。千百年來(lái)中醫(yī)中藥在腦卒中的治療得以廣泛的應(yīng)用，部分作者應(yīng)用活血化瘀法治療急性期腦出血取得了一定的療效，但在治療的時(shí)機(jī)上特別在早期使用活血化瘀藥治療腦出血患者尚存在較大的爭(zhēng)議。

文獻(xiàn)表明，細(xì)胞凋亡是腦出血后細(xì)胞死亡主要途徑之一 ［2］。各種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明， 腦出血后4～6h細(xì)胞凋亡即開(kāi)始出現(xiàn)，凋亡高峰在腦出血后48～72h［3］。另外，有研究表明：腦細(xì)胞缺血后先出現(xiàn)促凋亡基因表達(dá)，后出現(xiàn)神經(jīng)元群體的凋亡，這就為治療提供了時(shí)間窗，從理論上推測(cè)如果能在發(fā)病早期抑制促凋亡基因的表達(dá)或促進(jìn)抑制凋亡基因的表達(dá)，就能有效地保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞的損傷。

目前認(rèn)為，哺乳動(dòng)物的細(xì)胞凋亡至少由兩條通路構(gòu)成，即死亡受體通路和線粒體通路，這兩條凋亡途徑不是孤立的，后期的共同途徑是Caspases的激活，其中caspase-3是哺乳動(dòng)物細(xì)胞凋亡中的關(guān)鍵酶，在細(xì)胞凋亡分子機(jī)制網(wǎng)絡(luò)中居核心地位［4］。線粒體在多種凋亡途徑中起到了核心作用［5］，在線粒體通路調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡中，Bcl-2基因家族是目前較為公認(rèn)與之密切相關(guān)的基因。Bcl-2和Bax是Bcl-2基因家族中已被發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切的兩種基因，是一對(duì)在功能上相互對(duì)立的細(xì)胞凋亡調(diào)控基因，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中均有表達(dá)。Bcl-2和Bax是兩類典型的抑凋亡和促凋亡蛋白， Bcl-2與bax結(jié)合成異二聚體是Bcl-2發(fā)揮抗凋亡活性所必需的［6］， Bcl-2/Bax異二聚體，可通過(guò)阻斷細(xì)胞色素C的釋放，抑制下游Caspase-3的激活，從而抑制凋亡的發(fā)生，即細(xì)胞內(nèi)Bcl-2與Bax比例決定受凋亡信號(hào)刺激細(xì)胞的最終命運(yùn)，Bcl-2/Bax值增加，細(xì)胞凋亡減少；反之，則誘發(fā)細(xì)胞凋亡機(jī)制的啟動(dòng)［7］。

腦出血后腦內(nèi)血腫，中醫(yī)認(rèn)為離經(jīng)之血即為淤血，治法也應(yīng)活血化瘀。祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為血瘀是中風(fēng)的本質(zhì)，活血化瘀是治療中風(fēng)的根本大法，但在治療時(shí)機(jī)上存在較大爭(zhēng)議。有作者認(rèn)為活血化瘀不論在早期先驅(qū)癥狀、發(fā)作期，還是恢復(fù)期均可應(yīng)用。特別提出，在急性腦血管疾病中，控制出血不是采取止血方法，而是應(yīng)用活血止血、化瘀止血、理氣止血等法。

紅花作為一種應(yīng)用普遍的強(qiáng)活血藥，臨床廣泛應(yīng)用于腦中風(fēng)的治療?，F(xiàn)代藥理研究顯示紅花具有:擴(kuò)張血管、降低血壓［8］；抑制血小板活化因子誘發(fā)血小板聚集、釋放及血小板內(nèi)游離鈣濃度升高；抑制誘發(fā)的人中性粒細(xì)胞聚集、粘附［9，10］，提高大鼠的纖溶性［11］；抑制缺血腦線粒體膜流動(dòng)性的降低、線粒體腫脹、脫氫酶、琥珀酸脫氫酶和降低細(xì)胞色素氧化酶活性；抑制Ca2+過(guò)多攝入，改善線粒體呼吸功能，拮抗氧自由基［12］。

眾多的醫(yī)家使用活血化瘀藥多在腦出血的亞急性期（3天或3天以后）。況時(shí)祥［13］認(rèn)為活血化瘀藥在腦出血急性期的主要作用還在于改善由出血而引發(fā)的血液循環(huán)障礙，減輕腦組織的缺血缺氧損傷，而并非消除血腫或減輕腦水腫，反對(duì)一味尋求促進(jìn)血腫清除的峻猛之藥，并指出腦出血在使用活血化瘀保持謹(jǐn)慎態(tài)度，防止再出血，認(rèn)為發(fā)病后6～24h內(nèi)應(yīng)為應(yīng)用活血化瘀類藥的最佳時(shí)機(jī)。

本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果顯示：（1）實(shí)驗(yàn)性ICH后不同時(shí)間點(diǎn)使用紅花注射液治療均有效果。（2）6h治療組和12h治療組治療效果優(yōu)于其他組。從行為學(xué)表現(xiàn)來(lái)看，從術(shù)后6h開(kāi)始對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，各治療組神經(jīng)功能缺失癥狀明顯輕于出血對(duì)照組，但各治療組組間比較無(wú)差異。從凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況來(lái)看，各治療組均能減少腦出血后的出血灶周圍凋亡蛋白Caspase-3的表達(dá)，升高Bcl-2/Bax的比值，與出血對(duì)照組相比較差異有顯著性（P0.05）。在大鼠腦出血后6、12、24h注射紅花注射液，出血灶周圍Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞逐漸增多、Bcl-2/ Bax比值逐漸降低，與TUNEL染色結(jié)果相一致，提示紅花注射液在大鼠腦出血6h以后盡早用藥效果比較理想，與文獻(xiàn)［14］報(bào)道一致。推測(cè)其可能與通過(guò)促進(jìn)Bcl-2蛋白的表達(dá)，抑制Bax和Caspase-3蛋白的表達(dá)，從而降低血腫周圍凋亡細(xì)胞的表達(dá)有關(guān)。另外在本實(shí)驗(yàn)中，在大鼠腦出血后0h給予紅花注射液治療，有1例血腫周邊見(jiàn)可到新鮮出血灶，說(shuō)明出血6h以內(nèi)應(yīng)慎用活血化瘀藥物來(lái)治療腦出血。但在腦出血后康復(fù)治療階段應(yīng)用紅花注射液治療腦出血的效果如何有待進(jìn)一步的研究。

綜上所述，紅花注射液早期治療實(shí)驗(yàn)性大鼠腦出血可明顯減少血腫周圍的細(xì)胞凋亡率，腦出血6h以內(nèi)應(yīng)慎用活血化瘀藥物來(lái)治療腦出血，腦出血6h以后盡早用藥效果較理想。

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第8篇：學(xué)習(xí)周計(jì)劃范文

【摘要】 目的對(duì)亞洲帶絳蟲(chóng)膜聯(lián)蛋白B2(Annexins B2)進(jìn)行克隆表達(dá)及免疫學(xué)初步研究。方法利用在線生物信息學(xué)工具從亞洲帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)cDNA文庫(kù)中篩選出Annexins B2基因，并將該基因克隆到原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)中，在大腸埃希菌BL21/DE3中誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物通過(guò)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定，重組后的蛋白用His-鎳蛋白純化柱純化，純化的重組蛋白用Western blotting進(jìn)行免疫學(xué)分析。結(jié)果PCR、雙酶切及重組質(zhì)粒DNA測(cè)序均顯示重組體構(gòu)建成功，并得到高純度的蛋白，且該重組蛋白可被亞洲帶絳蟲(chóng)、豬帶絳蟲(chóng)及牛帶絳蟲(chóng)患者的血清識(shí)別。結(jié)論亞洲帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)Annexins B2基因可在原核表達(dá)系統(tǒng)中獲得具有免疫活性的高效表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】 亞洲帶絳蟲(chóng);膜聯(lián)蛋白B2;基因克隆;免疫反應(yīng)性

ABSTRACT: ObjectiveTo clone and express the gene named as Annexins B2 of Taenia saginata asitica so as to analyze the immunogenicity of its recombinant protein.MethodsBy online analysis of the gene at bioinfomatics websites to identify the gene from the Taenia saginata asiatica full-length cDNA plasmid library， the gene was cloned into prokaryotic expression vector pET-28a(+) and then transformed to E.coli BL21 with IPTG induction. Thereafter， the gene product was analyzed by SDS-PAGE and purified by Ni-NTA affinity chromatography. In addition， the immunoreactivity of the purified recombinant proteins was analyzed by Western blotting.ResultsAs demonstrated by PCR， double enzyme digestion and DNA sequencing indicated that the recombinant plasmid was successfully constructed and highly expressed. The recombinant protein tested with Western blotting analysis could react with Taenia asiatica and Taeniarhynchus saginatus infected patient serum.ConclusionThe Annexins B2 of Taenia saginata asitica has been cloned and expressed in the prokaryotic expression system and the purified protein has been confirmed with immunogenicity.

KEY WORDS: Taenia saginata asiatica; Annexins B2; gene cloning; immunoreactivity

鑒于亞洲帶絳蟲(chóng)與豬帶絳蟲(chóng)及牛帶絳蟲(chóng)在起源、分類學(xué)地位存在的差異[1-2]，本課題組率先構(gòu)建亞洲帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)，并對(duì)該蟲(chóng)進(jìn)行功能基因組的研究工作[3]。本文利用生物信息學(xué)工具從文庫(kù)中篩選到了一個(gè)膜聯(lián)蛋白B2(Annexins B2)的同源基因，構(gòu)建了原核表達(dá)載體，并對(duì)其原核表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行免疫學(xué)方面的初步研究。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1血清、載體與菌株3種人體帶絳蟲(chóng)患者血清取自糞檢陽(yáng)性的帶絳蟲(chóng)患者。原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)及大腸埃希菌BL-21/DE3由中山大學(xué)熱帶病防治教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)。

1.1.2主要試劑和工具酶Ex Taq酶(含dNTP)，BamHⅠ，XhoⅠ，T4 DNA連接酶 (大連寶生物工程公司);異丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)(美國(guó)Promega公司);質(zhì)粒純化試劑盒(廣州東盛科技公司);辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗豬IgG二抗、兔抗人二抗、3，3二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司);氯化鈣、氯化鈉等為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2方法

1.2.1Annexins B2基因的識(shí)別及擴(kuò)增將獲得的亞洲帶絳蟲(chóng)Annexins B2基因進(jìn)行BLASTX分析。并根據(jù)已獲得的該基因全長(zhǎng)編碼序列的開(kāi)放閱讀框，利用軟件設(shè)計(jì)引物(引物由上海聯(lián)合基因公司合成)，分別帶上BamHⅠ和XhoⅠ的酶切位點(diǎn)進(jìn)行PCR反應(yīng)。

1.2.2重組原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定PCR產(chǎn)物和pET-28a(+)載體分別用BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切，回收、連接后轉(zhuǎn)入大腸埃希菌BL-21/DE3感受態(tài)細(xì)胞，對(duì)陽(yáng)性克隆依次進(jìn)行質(zhì)粒的提取、雙酶切和PCR鑒定，并進(jìn)行重組質(zhì)粒DNA測(cè)序鑒定(測(cè)序由英俊科技股份有限公司完成)。

1.2.3重組蛋白的表達(dá)及純化按照常規(guī)方法進(jìn)行蛋白誘導(dǎo)表達(dá)，考馬斯亮蘭蛋白染色液染色觀察蛋白表達(dá)情況。確定蛋白表達(dá)后，進(jìn)行大量的誘導(dǎo)表達(dá)，并判斷重組蛋白的可溶性，再將樣品加入預(yù)先處理好的Ni-IDA His.Bind樹(shù)脂親和層析純化柱中，最后再用PBS 24h透析以去掉過(guò)柱時(shí)留下的咪唑。

1.2.4Western blotting分析重組蛋白的免疫反應(yīng)性用3種人體帶絳蟲(chóng)患者及正常人血清與辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的兔抗人IgG進(jìn)行Western blotting鑒定。

2結(jié)果

2.1Annexins B2基因的識(shí)別和序列分析該基因全長(zhǎng)922bp，編碼區(qū)為224～686bp。其最大ORF為其完整編碼區(qū)。

2.2原核重組質(zhì)粒的鑒定將重組質(zhì)粒進(jìn)行PCR和雙酶切鑒定，產(chǎn)物行0.8g/L瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果顯示在500bp左右有一清晰條帶，與目的基因大小基本相符。此外，重組質(zhì)粒的測(cè)序報(bào)告表明插入序列與理論序列一致，證明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功(圖1)。

2.2蛋白表達(dá)及純化結(jié)果將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.coli BL/DE3中，超聲裂解后SDS-PAGE電泳分析結(jié)果顯示在大約25ku處出現(xiàn)高效表達(dá)條帶(圖2)，與目的蛋白基本相符。測(cè)得純化產(chǎn)物的蛋白濃度為0.526g/L。

2.3Western blotting鑒定純化蛋白的免疫反應(yīng)性

用感染亞洲帶絳蟲(chóng)、豬帶絳蟲(chóng)、感染牛帶絳蟲(chóng)的患者血清以及亞洲帶絳蟲(chóng)感染豬的血清與純化蛋白反應(yīng)的結(jié)果均顯示出較清晰的條帶，而陰性對(duì)照血清在相應(yīng)位置未識(shí)別出該蛋白條帶(圖3)，表明該表達(dá)產(chǎn)物具有良好的免疫反應(yīng)性。圖1重組質(zhì)粒的PCR和雙酶切鑒定

Fig.1 The identification of the pET-28a(+)-Ta Annexins B2 by PCR amplification and digestion with restriction enzymesM1：DNA標(biāo)準(zhǔn)(DL2000);1：PCR產(chǎn)物;2：pET-28a(+)質(zhì)粒雙酶切;3：pET-28a(+)-Annexins B2重組質(zhì)粒雙酶切;M2：DNA標(biāo)準(zhǔn)(DL 15000)。圖2100g/L SDS-PAGE分析pET-28a(+)-Ta Annexins B2在大腸埃希菌中的表達(dá)產(chǎn)物及其純化產(chǎn)物Fig.2 100g/L SDS-PAGE analysis of the prokaryotic expression product and purified product

M：蛋白Marker;1：pET-28a(+)IPTG未誘導(dǎo);2：pET-28a(+)IPTG誘導(dǎo);3：pET-28a(+)-Annexins B2 IPTG未誘導(dǎo);4：pET-28a(+)-Annexins B2 IPTG誘導(dǎo);5：pET-28a(+)-Annexins B2上清;6：pET-28a(+)-Annexins B2沉淀;7：pET-28a(+)-Annexins B2純化蛋白。

3討論

帶絳蟲(chóng)病的流行在我國(guó)西部一直是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。每年由帶絳蟲(chóng)病造成的健康和畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)損失上百億，嚴(yán)重影響西部欠發(fā)達(dá)地區(qū)的社會(huì)發(fā)展。目前，亞洲帶絳蟲(chóng)病的防治研究的重點(diǎn)集中在診斷和疫苗候選抗原、藥物靶標(biāo)、致病的分子機(jī)制研究。圖3重組蛋白的Western blotting 鑒定Fig.3 Western blotting analysis of the recombinantsM：蛋白Marker;1：純化蛋白與亞洲帶絳蟲(chóng)患者血清的反應(yīng)結(jié)果;2：純化蛋白與牛帶絳蟲(chóng)患者血清的反應(yīng)結(jié)果;3：純化蛋白與豬帶患者血清的反應(yīng)結(jié)果;4：純化蛋白與亞洲帶絳蟲(chóng)感染豬血清的反應(yīng)結(jié)果;5：純化蛋白與正常人血清的反應(yīng)結(jié)果。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)生物信息學(xué)方法從已經(jīng)構(gòu)建好的亞洲帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)中篩選出了一個(gè)膜聯(lián)蛋白(Annexins B2)的同源基因，并且預(yù)測(cè)出該基因位于胞漿，無(wú)跨膜區(qū)，二級(jí)結(jié)構(gòu)基本上是以α螺旋為主。這些都符合膜聯(lián)蛋白家族的共同特征[4]。根據(jù)膜聯(lián)蛋白家族分布廣泛，表達(dá)豐富且穩(wěn)定的特性，可以推測(cè)其在絳蟲(chóng)的生理活動(dòng)中可能起著重要的作用。

膜聯(lián)蛋白是一個(gè)廣泛存在的蛋白家族，在所有真核基因組中廣泛表達(dá)。具有內(nèi)部重復(fù)單位和“G-X-G-T-(38residues)-D/E”基序[5]，即Ca2+結(jié)合區(qū)域的特征，用以結(jié)合帶有負(fù)電的脂質(zhì)。雖然它為鈣結(jié)合蛋白，但是在結(jié)構(gòu)上卻沒(méi)有EF手，而且在和Ca2+結(jié)合后，還可以與磷脂再次結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。例如，細(xì)胞的胞吞胞吐，離子通道的形成，調(diào)節(jié)磷脂酶A2的活性及細(xì)胞內(nèi)外Ca2+濃度、抗炎癥反應(yīng)等。在長(zhǎng)期的生物進(jìn)化過(guò)程中，膜聯(lián)蛋白家族各成員在生物學(xué)特性和生理功能方面表現(xiàn)出非常復(fù)雜的關(guān)系，且在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，annexins沒(méi)有信號(hào)肽，沒(méi)有跨膜結(jié)構(gòu)，是一個(gè)典型的細(xì)胞內(nèi)蛋白。但是，卻有學(xué)者發(fā)現(xiàn)它可以與細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生作用。例如，抗炎[6]、抗凝[7]、抑制腫瘤[8]等。最新的研究報(bào)道，當(dāng)將其作為疫苗的候選因子時(shí)，可以消除一些寄生于哺乳動(dòng)物體內(nèi)的寄生蟲(chóng)。此外，學(xué)者們認(rèn)為膜聯(lián)蛋白是維持細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能的重要蛋白。并可能具有激活纖維蛋白酶原的功能，有助于破壞宿主的結(jié)締組織，使蟲(chóng)體抗原更加容易進(jìn)入宿主機(jī)體，誘發(fā)免疫應(yīng)答。因此，對(duì)該基因的研究有助于進(jìn)一步了解它的生物學(xué)功能及開(kāi)辟預(yù)防治療寄生蟲(chóng)病的新途徑[9-10]。

目前，Annexins B2已經(jīng)在豬囊尾蚴的研究被發(fā)現(xiàn)并命名，但是具體的生理功能還不清楚，且在亞洲帶絳蟲(chóng)研究領(lǐng)域還是空白。因此，本研究將亞洲帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)annexins克隆到原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)中，構(gòu)建重組質(zhì)粒，在大腸埃希菌BL-21/DE3中用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物通過(guò)SDS-PAGE電泳進(jìn)行鑒定。SDS-PAGE結(jié)果表明，該蛋白在全菌和沉淀中都有表達(dá)，上清中有微量的表達(dá)，說(shuō)明annexins主要表達(dá)在包涵體中。因此，進(jìn)一步溶解包涵體[11]，經(jīng)變性處理并親和層析純化后，得到了大量較純的重組蛋白。此外，還嘗試性的用上清過(guò)柱純化并用蔗糖進(jìn)行蛋白濃縮，也得到部分有活性的蛋白。Western blotting就是以抗體-抗原沉淀反應(yīng)為基礎(chǔ)的，可用于不同抗原的比較和定量。其檢測(cè)結(jié)果表明所獲得的重組蛋白與豬帶絳蟲(chóng)、牛帶絳蟲(chóng)及亞洲帶絳蟲(chóng)有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)且在絳蟲(chóng)中的診斷特異性不高，推測(cè)其不能作為免疫診斷抗原的合適候選分子。但是，其具有免疫活性的高效表達(dá)。由此可推測(cè)它是一個(gè)具有開(kāi)發(fā)潛力的基因。總之，本項(xiàng)研究填補(bǔ)了該蛋白在亞洲帶絳蟲(chóng)研究領(lǐng)域的空白，也為進(jìn)一步研究該基因的生物學(xué)功能及在診斷尤其是疫苗研究方面奠定了基礎(chǔ)。

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第9篇：學(xué)習(xí)周計(jì)劃范文

關(guān)鍵詞 強(qiáng)直性脊柱炎;外周血;關(guān)節(jié)滑液;腫瘤壞死因子-α

Abstract Objective：To determine the concentration of TNF-αin the synovial fluid ( SF ) and peripheral blood in patients with ankylosing spondylitis (AS ), and analyze its role in the pathogenesis of synovial inflammation. Methods：SF and peripheral sera were collected from 90 patients with AS and 40 healthy control.. TNF-αwas detected using a sandwich ELISA method. Correlation between TNF-αand WBC, ESR, CRP was also analyzed subsequently. Results：The concentrations of TNF-αwere significantly increased in the SF and peripheral sera in AS patients than those in healthy control ( p 0.05). Conclusion：TNF-αis significantly increased in the SF and sera of AS patients. TNF-αmay play an important role in the development of synovial inflammation.

Key words Ankylosing spondylitis；Peripheral blood；Synovial fluid；TNF-α

強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS) 是一種以中軸關(guān)節(jié)慢性炎癥為主的慢性進(jìn)展性風(fēng)濕性疾病，多見(jiàn)于青少年，其病變最終結(jié)局是脊柱周圍韌帶和椎間盤骨化,形成竹節(jié)椎,中軸關(guān)節(jié)(尤其是骶髂關(guān)節(jié))出現(xiàn)纖維化及骨性強(qiáng)直,導(dǎo)致關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)功能喪失。外周關(guān)節(jié)炎多見(jiàn)于下肢關(guān)節(jié)，多為非對(duì)稱性。腫瘤壞死因子-α( TNF-α)是T細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、樹(shù)護(hù)士差錯(cuò)(n=71)包括標(biāo)簽錯(cuò)誤、操作差錯(cuò)、血液保存錯(cuò)誤，是由于違反了輸血護(hù)理常規(guī)和《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》中受血者血樣采集與送檢、和輸血的原則，對(duì)血液和血液成分的有關(guān)知識(shí)了解太少；血庫(kù)工作人員的差錯(cuò)主要為配血報(bào)告單填寫(xiě)錯(cuò)誤，1例交叉配血錯(cuò)誤在取血復(fù)核時(shí)發(fā)現(xiàn)，這些錯(cuò)誤都是由于責(zé)任心不強(qiáng)，違反技術(shù)操作規(guī)程造成的；檢驗(yàn)科血型鑒定13例差錯(cuò)中13例都在血庫(kù)進(jìn)行血型復(fù)查時(shí)發(fā)現(xiàn)。

血站的6例差錯(cuò)：包括4例筆誤和2例血型錯(cuò)誤（后經(jīng)調(diào)查是將血袋標(biāo)簽誤填誤貼），是由于違反技術(shù)操作規(guī)程造成的。

通過(guò)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析可以清楚地發(fā)現(xiàn)，多數(shù)輸血差錯(cuò)發(fā)生都是由于違反技術(shù)操作規(guī)程和《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》的各類原則。而隨著《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》的制定，說(shuō)明我國(guó)的臨床輸血已納入法制化軌道；而且新的《醫(yī)療事故處理辦法》即將開(kāi)始實(shí)施，因此加強(qiáng)臨床輸血管理，完善臨床輸血規(guī)程，強(qiáng)化質(zhì)量控制，避免或減少輸血差錯(cuò)和不良反應(yīng)的發(fā)生，從根本上增強(qiáng)輸血安全性，已成為我們的當(dāng)務(wù)之急。針對(duì)所發(fā)生的差錯(cuò)，我們提出如下措施：①建立健全工作制度、操作規(guī)程和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；②建立質(zhì)量考核指標(biāo)和質(zhì)量管理信息反饋系統(tǒng)，包括輸血突細(xì)胞和滑膜組織內(nèi)成纖維母細(xì)胞分泌的一種促炎癥細(xì)胞因子,參與了關(guān)節(jié)滑膜組織炎癥損傷過(guò)程[1] 。本文通過(guò)檢測(cè)AS患者外周血和關(guān)節(jié)滑液中TNF-α水平,旨在探討其在疾病發(fā)生過(guò)程中的免疫病理作用。

1材料與方法

1.1研究對(duì)象

90例AS來(lái)自本院2004年8月～2007年8月免疫風(fēng)濕科住院患者,診斷均符合修訂的紐約標(biāo)準(zhǔn)[2] 。其中男72例,女18例,平均年齡(30±11)歲。其中HLA-B27陽(yáng)性80例。40例健康對(duì)照來(lái)自本院體檢健康者,男27例,女13例,平均年齡(31±7)歲,無(wú)AS既往史和家族史,排除其他自身免疫性疾病和感染性疾病表現(xiàn)?；颊呔邮芘R床生化和其它影像學(xué)檢查,包括血常規(guī)、ESR、C反應(yīng)蛋白(CRP) 、HLA-B27、骶髂關(guān)節(jié)X線、CT檢查確診。

1.2檢測(cè)方法

于晨起空腹采集靜脈血4ml,離心分離血清,置于-20℃冰箱保存待用。另外,有50名患者接受膝關(guān)節(jié)外上方為穿刺點(diǎn),使用無(wú)菌注射器,收集關(guān)節(jié)滑液2 ml,離心保存在0℃冰箱內(nèi),用來(lái)檢測(cè)TNF-α。

1.3TNF-α測(cè)定

雙抗體夾心酶聯(lián)吸附免疫試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定TNF-α含量。采用上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)的檢測(cè)試劑盒,操作過(guò)程嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以x±s表示,采用SPSS11.0 統(tǒng)計(jì)軟件行t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α = 0. 05。

2結(jié)果

2.1AS患者外周血和關(guān)節(jié)滑液中TNF-α測(cè)定AS患者外周血中TNF-α水平比健康對(duì)照顯著升高( p < 0.01) 。另外,發(fā)現(xiàn)AS患者關(guān)節(jié)滑液中TNF-α 水平比外周血中也明顯升高( p < 0.001) 。見(jiàn)表1。

①與健康對(duì)照比較p < 0.01；②與患者外周血比較p

2.2TNF-α水平與WBC、ESR和CRP之間以及和HLA-B27相關(guān)分析經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn), AS患者的外周血和關(guān)節(jié)滑液中TNF-α水平與外周血中WBC (9.2±4.4×109/L ) 、ESR ( 62.4±16.2 mm/1h 后) 和CRP(26.8±6.4mg/L)之間均無(wú)相關(guān)關(guān)系( P > 0. 05) 。AS患者的外周血和關(guān)節(jié)滑液中TNF-α水平與HLA-B27陽(yáng)性之間無(wú)相關(guān)關(guān)系( P > 0. 05) 。

3 討論

我們的研究發(fā)現(xiàn)AS患者外周血和關(guān)節(jié)滑液中TNF-α濃度比健康對(duì)照顯著升高,且發(fā)現(xiàn)TNF-α水平與患者外周血中的WBC、ESR、CRP及HLA-B27陽(yáng)性之間無(wú)明顯相關(guān)性。我們的結(jié)果提示TNF-α對(duì)AS患者的診斷、治療和判斷預(yù)后轉(zhuǎn)歸均具有重要的幫助作用,它可作為判斷AS患者病情發(fā)展的一種生物學(xué)標(biāo)志物。

AS是一種自身免疫性疾病，其關(guān)節(jié)病理包括附著點(diǎn)炎和滑膜炎兩種類型[3]。關(guān)節(jié)囊、韌帶、肌腱的附著點(diǎn)炎是AS的主要病理特點(diǎn)。病理過(guò)程以關(guān)節(jié)囊、韌帶、肌腱的骨附著點(diǎn)為中心的慢性炎癥，初期以淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)為主，伴少數(shù)多核白細(xì)胞?；ぱ自贏S中并不少見(jiàn)，典型表現(xiàn)為滑膜細(xì)胞肥大和滑膜增生，有明顯的淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)。有研究表明TNF相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體在AS中表達(dá)增強(qiáng)[4]。TNF-α被認(rèn)為可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和惡病質(zhì),而現(xiàn)在它被認(rèn)為是擁有廣泛生物學(xué)活性的生物學(xué)介質(zhì)。它對(duì)機(jī)體炎癥反應(yīng)起著重要促進(jìn)作用,可直接參與許多病原體引起的保護(hù)性免疫應(yīng)答。TNF可誘導(dǎo)趨化因子的合成和分泌,增加免疫細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá),從而促使淋巴細(xì)胞向炎癥部位移動(dòng),引起局部炎癥反應(yīng)。TNF-α也可刺激抗原特異性T細(xì)胞的激活,誘導(dǎo)炎癥因子(促炎癥細(xì)胞因子、PGE2、基質(zhì)金屬蛋白酶)的釋放。在AS病變時(shí), TNF-α可協(xié)同一些趨化因子誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞向關(guān)節(jié)滑膜組織內(nèi)浸潤(rùn),引起炎癥應(yīng)答。已有報(bào)道[5-8],針對(duì)TNF-α靶向生物免疫治療可以控制AS的病情發(fā)展。通過(guò)本研究進(jìn)一步證實(shí)了TNF-α在AS患者發(fā)病過(guò)程中起著重要的免疫病理作用,它可能直接參與了關(guān)節(jié)滑膜組織炎癥損傷,促使關(guān)節(jié)炎癥病變。

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